醫(yī)院感染微生物學(xué)PPT課件.ppt

醫(yī)院感染微生物學(xué)監(jiān)測 醫(yī)院感染監(jiān)測的定義 醫(yī)院感染監(jiān)測是指長期地 系統(tǒng)地 有計劃地 主動地觀察一定人群中醫(yī)院感染發(fā)生和分布以及影響醫(yī)院感染的各種因素 對監(jiān)測資料進行定期的整理分析 確定其分布動態(tài)和變化趨勢 向有關(guān)人員和單位發(fā)送 反饋 并及時采取防治對策和措施 同時對其防治效果和經(jīng)濟效益作出評價 不斷改進 以期達到控制和降低醫(yī)院感染的目的 醫(yī)院感染監(jiān)測的內(nèi)涵 要有一個長期的監(jiān)測計劃 連續(xù)系統(tǒng)地收集資料定期匯總并經(jīng)分析和解釋所收集的資料 使之成為有意義的材料 向有關(guān)人員或單位反饋或報送準(zhǔn)確地確定醫(yī)院感染的各種問題 以便有針對性地采取控制措施對各種監(jiān)測方法和手段要進行評價要確定診斷標(biāo)準(zhǔn) 醫(yī)院感染監(jiān)測的目的 醫(yī)院感染監(jiān)測是醫(yī)院感染控制的先行 醫(yī)院感染控制水平是反映醫(yī)療技術(shù)水平的重要評價指標(biāo)之一 目的是為了控制醫(yī)院感染的各種危險因素 降低醫(yī)院感染的各種危險因素 降低醫(yī)院感染的發(fā)生率 保證和提高醫(yī)療質(zhì)量和醫(yī)療安全 醫(yī)院感染監(jiān)測簡史 醫(yī)院感染監(jiān)測源于19世紀(jì)中葉 產(chǎn)褥熱發(fā)生原因的調(diào)查研究醫(yī)院感染監(jiān)測的系統(tǒng)發(fā)展始于20世紀(jì)50年代歐美MRSA 耐甲氧西林金黃色葡萄球菌 感染的流行美國在60年代開始成立醫(yī)院感染控制委員會 在醫(yī)院中開展空氣和環(huán)境的細菌學(xué)監(jiān)測 醫(yī)院感染監(jiān)測的組織系統(tǒng) 院長領(lǐng)導(dǎo)下的醫(yī)院感染管理委員會醫(yī)院感染科科室醫(yī)院感染管理小組組成三級醫(yī)院感染監(jiān)測管理網(wǎng)絡(luò) 監(jiān)測內(nèi)容 醫(yī)院空氣微生物學(xué)監(jiān)測醫(yī)務(wù)人員手的微生物學(xué)監(jiān)測物體表面微生物學(xué)監(jiān)測使用中的消毒劑的微生物學(xué)監(jiān)測壓力蒸汽和干熱滅菌效果的微生物學(xué)監(jiān)測醫(yī)療器械消毒效果的微生物學(xué)監(jiān)測 監(jiān)測的時機 定期常規(guī)監(jiān)測 次 個月針對性監(jiān)測醫(yī)院感染暴發(fā)流行時環(huán)境變動時監(jiān)測新環(huán)境 基本原則 嚴格執(zhí)行國家統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)方法2012 醫(yī)療機構(gòu)消毒技術(shù)規(guī)范 監(jiān)測前準(zhǔn)備 檢驗科的準(zhǔn)備營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)皿 一次性使用采樣棉試子 一次性無菌規(guī)格板 無菌生理鹽水 壓力蒸汽消毒鍋 生物培養(yǎng)箱等臨床科室的準(zhǔn)備申請單的填寫 無菌采樣包 棉試子 剪刀 鑷子 醫(yī)務(wù)人員六步法洗手 記錄筆 標(biāo)簽 申請單的填寫 環(huán)境類別 采樣時間 科室 采樣人員 平皿規(guī)格 監(jiān)測項目 監(jiān)測目地 房號 醫(yī)務(wù)人員 采樣面積 樣本號 品名 批號 商標(biāo) 培養(yǎng)皿 倒置拿培養(yǎng)皿 在底部標(biāo)記1 防止凝結(jié)在皿蓋上的水蒸氣流到培養(yǎng)基表面導(dǎo)致染菌 2 有利于菌種利用培養(yǎng)基營養(yǎng) 加快生長速度 空氣微生物學(xué)監(jiān)測 采用潔凈技術(shù) 未采用潔凈技術(shù) 采集頻率采樣時間沉降法或浮游菌法采集 參照GB50333要求進行監(jiān)測 潔凈手術(shù)室及其他潔凈室 沉降法或浮游菌法采集靜態(tài) 室內(nèi)設(shè)施及功能齊備 空調(diào)凈化系統(tǒng)正常運行 但無人員的狀態(tài) 潔凈系統(tǒng)自凈后與從事醫(yī)療活動前或懷疑與醫(yī)院感染暴發(fā)有關(guān)時地面上或不高于地面0 8m的任意高度30min 放置培養(yǎng)皿 手術(shù)潔凈度級別不同 放置個數(shù)不同 潔凈手術(shù)室靜態(tài)空氣監(jiān)測方法 局部百級周圍千級 潔凈手術(shù)室靜態(tài)空氣監(jiān)測方法 局部千級周圍萬級 潔凈手術(shù)室靜態(tài)空氣監(jiān)測方法 局部萬級周圍十萬級 潔凈手術(shù)室靜態(tài)空氣監(jiān)測方法 局部十萬級 潔凈手術(shù)室靜態(tài)空氣監(jiān)測方法 潔凈度三十萬級設(shè)置個點面積 30m2布放4點 面積 30m2布放2點 層流手術(shù)室沉降法空氣監(jiān)測采樣布點數(shù) 潔凈手術(shù)室靜態(tài)空氣監(jiān)測方法 培養(yǎng)應(yīng)必須設(shè) 次空白對照第一次對照 為培養(yǎng)皿照 每監(jiān)測批次中取 個培養(yǎng)做對比試驗 培養(yǎng)皿不打開直接培養(yǎng) 用于檢測培養(yǎng)皿是否合格第二次對照 為操作過程對照 每室或每區(qū)取 個對照皿 對操作過程做對照試驗 模擬微生物檢測操作過程 但培養(yǎng)皿打開后應(yīng)立即封 用于檢測培養(yǎng)皿操作過程是否合格 注意 兩次對照結(jié)果都必須為陰性 整個操作應(yīng)符合無菌要求 潔凈手術(shù)室的等級標(biāo)準(zhǔn) 注意事項 靜態(tài)測試時 室內(nèi)測試人員不能多于 人采樣時應(yīng)遵守?zé)o菌操作原則采樣后 小時內(nèi)將培養(yǎng)皿置培養(yǎng)箱培養(yǎng)標(biāo)明培養(yǎng)皿的編號化驗單上必須注明手術(shù)室的級別必須設(shè)兩次空白對照采取一功措施防止人為對樣品的污染 未采用潔浄技術(shù)凈化空氣的房間 參照GB15982要求進行監(jiān)測 沉降法消毒或規(guī)定通風(fēng)換氣后與從事醫(yī)療活動前采樣前 關(guān)閉門窗 在無人走動的情況下 靜止10min后采樣距地面0 8 1 5m距墻壁 m 放置點 室內(nèi)面積 m2室內(nèi)面各 m2 檢測方法 將普通營養(yǎng)瓊脂平皿 90mm 放置各采樣點 采樣高度為距地面0 8m 1 5m 采樣時將平皿蓋打開 扣放于平皿旁 暴露規(guī)定時間后蓋上平皿蓋及時送檢 將送檢平皿置36 1 恒溫箱培養(yǎng)48h 計數(shù)菌落數(shù) 若懷疑與醫(yī)院感染暴發(fā)有關(guān)時 進行目標(biāo)微生物的檢測 結(jié)果計算 1 沉降法按平均每皿的菌落數(shù)報告 cfu 皿 暴露時間 沉降法計算公式50000 N空氣細菌總數(shù) cfu m3 ATA 平板面積 cm2 T 平板暴露時間 min N 平均菌落數(shù) 若平板直徑9cm 暴露時間5min 則計算式為 空氣細菌總數(shù) cfu m3 157N2 浮游菌法計算公式采樣器各平皿菌落數(shù)之各 cfu 空氣中菌落總數(shù) cfu m3 x1000采樣速率 L min x采樣時間 min 不得檢出金黃色葡萄球菌 溶血性鏈球菌 綠膿桿菌 沙門氏菌 志賀氏菌等致病菌 潔凈手術(shù)部 室 和其他潔凈場所 空氣中的細菌菌落總數(shù)要求應(yīng)遵循GB50333 非潔凈手術(shù)部 室 非潔凈骨髓移植病房 產(chǎn)房 導(dǎo)管室 新生兒室 器官移植病房 燒傷病房 重癥監(jiān)護病房 血液病病區(qū)空氣中的細菌菌落總數(shù) 4cfu 15 直徑9 平皿 兒科病房 母嬰同室 婦產(chǎn)科檢查室 人流室 治療室 注射室 換藥室 輸血科 消毒供應(yīng)中心 血液透析中心 室 急診室 化驗室 各類普通病室 感染疾病科門診及其病房空氣中的細菌菌落總數(shù) 4cfu 5min 直徑9cm平皿 醫(yī)護人員手樣細菌總數(shù)測定 采樣時間 在接觸病人前或從事醫(yī)療活動前進行采樣六步洗手法 采樣方法 被檢人五指并攏 用浸有含相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液的棉拭子在雙手指屈面從指根到指端往返涂擦2次 一只手涂擦面積約30cm2 并隨之轉(zhuǎn)動采樣棉拭子 剪去操作者手接觸部位 將棉拭子投入10ml含相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液試管內(nèi) 立即送檢 操作 將樣品管充分混合后 用無菌吸管吸取1 0ml待檢樣品接種于滅菌培養(yǎng)皿中 共接種2只平皿 做平行樣 加入熔化的450C滅菌營養(yǎng)瓊脂15ml混合后 待其凝固 翻轉(zhuǎn)平板置370C培養(yǎng)48h作菌落計數(shù) 結(jié)果計算 N 稀釋倍數(shù)細菌總數(shù) cfu cm2 面積 cm2 N 平均菌落數(shù) 10 換算成10ml 60 30cm2 手 衛(wèi)生手消毒 監(jiān)測的細菌菌落總數(shù)應(yīng) 10cfu cm2 外科手消毒 監(jiān)測的細菌菌落總數(shù)應(yīng) 5cfu cm2 物體表面的監(jiān)測 采樣時間消毒處理后4h內(nèi)進行采樣采樣方法 棉拭子采樣法涂抹法 物體表面的監(jiān)測 拭子采樣法 采樣面積 被采表面 100cm2時 取全部表面 被采表面 100cm2時 取100cm2 采樣方法 用5 5cm2的標(biāo)準(zhǔn)滅菌規(guī)格板 放在被檢物體表面 用浸有含相應(yīng)中和劑的無菌采樣液的棉拭子1支 在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返各涂抹5次 并隨之轉(zhuǎn)動棉拭子 連續(xù)采樣1 4個規(guī)格板面積 剪去或折去手接觸部份 棉拭子放入裝有10ml采樣液的試管中送檢 門把手等小型物體則采用棉拭子直接涂抹物體的方法采樣 物體表面的監(jiān)測 檢測方法 將采樣管在混勻器上振蕩20s或用力振搖80次 用無菌吸管吸取1 0ml接種于滅菌平皿 每一樣本接種2個平皿 內(nèi)加入已溶化的45 480C的營養(yǎng)瓊脂15 18ml 邊傾注邊搖勻 待瓊脂凝固后置36 1 溫箱培養(yǎng)48小時 計數(shù)菌落數(shù) 物體表面的監(jiān)測 結(jié)果報告 菌落總數(shù) 計算公式 物體表面細菌菌落總數(shù) cfu cm2 其中小件物品以cfu 件報告結(jié)果 平皿上菌落的平均數(shù)x稀釋倍數(shù) 采樣面積 cm2 潔凈手術(shù)部 其他潔凈場所 非潔凈手術(shù)部 室 非潔凈骨髓移植病房 產(chǎn)房 導(dǎo)管室 新生兒室 器官移植病房 燒傷病房 重癥監(jiān)護病房 血液病病區(qū)等 物體表面細菌菌落總數(shù) 5cfu cm2 兒科病房 母嬰同室 婦產(chǎn)科檢查室 人流室 治療室 注射室 換藥室 輸血科 消毒供應(yīng)中心 血液透析中心 室 急診室 化驗室 各類普通病室 感染疾病科門診及其病房等 物體表面細菌菌落總數(shù) 10cfu cm2 使用中消毒液細菌總數(shù)監(jiān)測 采樣方法 用無菌吸管吸取1 0ml待檢樣品 在無菌條件下加入9 0ml含相應(yīng)中和劑的采樣液中混合后送實驗室檢驗 采樣液可以用N S代 將樣品管充分混合后 用無菌吸管吸取1 0ml待檢樣品接種于滅菌培養(yǎng)皿中 共接種2只平皿 做平行樣 加入熔化的40 45 滅菌營養(yǎng)瓊脂15ml混合后 待其凝固 翻轉(zhuǎn)平板置37 培養(yǎng)48 72h作菌落計數(shù) 醇類與酚類消毒劑用普通營養(yǎng)肉湯中和 含氯消毒劑 含碘消毒劑和過氧化物消毒劑用含0 1 硫代硫酸鈉中和劑 洗必泰 季銨鹽類消毒劑用含0 3 吐溫80和0 3 卵磷脂中和劑 醛類消毒劑用含0 3 甘氨酸中和劑 含有表面活性劑的各種復(fù)方消毒劑可在中和劑中加入吐溫80至3 也可使用該消毒劑消毒效果檢測的中和劑鑒定試驗確定的中和劑 結(jié)果計算 細菌總數(shù) cfu ml N 10N 平均菌落數(shù) 10 換算成10ml 即1ml采樣量 結(jié)果按每ml報告 消毒液染菌量 cfu ml 平均每皿菌落數(shù) 10 稀釋倍數(shù) 結(jié)果判斷 使用中滅菌用消毒液 無菌生長 使用中皮膚黏膜消毒液染菌量 10cfu ml 其他使用中消毒液染菌量 100cfu ml 壓力蒸汽滅菌效果的監(jiān)測 方法 物理監(jiān)測法 化學(xué)監(jiān)測法 生物監(jiān)測法和B D測試 標(biāo)準(zhǔn)生物測試包的制作方法 標(biāo)準(zhǔn)指示菌株 嗜熱脂肪桿菌芽孢 菌片含菌及抗力符合國家有關(guān)標(biāo)準(zhǔn) 標(biāo)準(zhǔn)測試包的制作 由16條41cm 66cm的全棉手術(shù)巾制成 制作方法 將每條手術(shù)巾的長邊先折成3層 短邊折成2層 然后疊放 制成23cm 23cm 15cm的測試包標(biāo)準(zhǔn)生物測試包或生物PCD的制作方法 將至少一個標(biāo)準(zhǔn)指示菌片裝入滅菌小紙袋內(nèi)或至少一個自含式生物指示劑 置于標(biāo)準(zhǔn)試驗包的中心部位即完成標(biāo)準(zhǔn)生物測試包或生物PCD的制作 培養(yǎng)方法 經(jīng)一個滅菌周期后 在無菌條件下取出標(biāo)準(zhǔn)試驗包的指示菌片 投入溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中 經(jīng)56 1 培養(yǎng)7d 自含式生物指示物按產(chǎn)品說明書執(zhí)行 觀察培養(yǎng)結(jié)果 結(jié)果判定 陽性對照組培養(yǎng)陽性 陰性對照組培養(yǎng)陰性 試驗組培養(yǎng)陰性 判定為滅菌合格 陽性對照組培養(yǎng)陽性 陰性對照組培養(yǎng)陰性 試驗組培養(yǎng)陽性 則滅菌不合格 同時應(yīng)進一步鑒定試驗組陽性的細菌是否為指示菌或是污染所致 自含式生物批示物不需要做陰性對照 干熱滅菌的效果監(jiān)測 方法 物理監(jiān)測法 化學(xué)監(jiān)測法 生物監(jiān)測法 標(biāo)準(zhǔn)生物測試管的制作方法 標(biāo)準(zhǔn)指示菌株 枯草桿菌黑色變種芽孢 菌片含菌及抗力符合國家有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)生物測試管的制作方法 將標(biāo)準(zhǔn)指示菌片分別裝入滅菌中試管內(nèi) 1片 管 監(jiān)測方法 將標(biāo)準(zhǔn)生物測試管 置于滅菌器最難滅菌的部位 即滅菌器與每層門把手對角線內(nèi) 外角處放置2個含菌片的試管 試管帽置于試管旁 關(guān)好柜門 經(jīng)一個滅菌周期后 待溫度降至80 時 加蓋試管帽后取出試管 并設(shè)陽性對照和陰性對照 培養(yǎng)方法 在無菌條件下 加入普通營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基 5mL 管 36 1 培養(yǎng)48h 觀察初步結(jié)果 無菌生長管繼續(xù)培養(yǎng)至第7d 結(jié)果判定 陽性對照組培養(yǎng)陽性 陰性對照組培養(yǎng)陰性 若每個指示菌片接種的肉湯管均澄清 判為滅菌合格 若陽性對照組培養(yǎng)陽性 陰性對照組培養(yǎng)陰性 而指示菌片之一接種的肉湯管混濁 判為不合格 對難以判定的肉湯管 取0 1mL接種于營養(yǎng)瓊脂平板 用滅菌L棒或接種環(huán)涂勻 置于36 1 培養(yǎng)48h 觀察菌落形態(tài) 并做涂片染色鏡檢 判斷是否指示菌生長 若有指示菌生長 判為滅菌不合格 若無指示菌生長 判為滅菌合格 醫(yī)療器械采樣及檢查方法 無菌檢驗的定義 指檢查經(jīng)滅菌的敷料 縫線 一次性使用的醫(yī)療用品 無菌器械以及適用于無菌室的其他品種是否無菌的一種方法 無菌檢驗應(yīng)在潔凈度為100級單向流空氣區(qū)域內(nèi)進行應(yīng)嚴格遵守?zé)o菌操作 避免微生物污染對單向流空氣區(qū)域及工作臺面 必須進行潔凈度驗證 醫(yī)療器械采樣及檢查方法 采樣時間在滅菌處理后 存放有效期內(nèi)采樣 醫(yī)療器械采樣及檢查方法 采樣方法縫合針 針頭 刀片等小件醫(yī)療器械 取5件直接浸入6管需 厭氧培養(yǎng)管 其中一管作陽性對照 與4管霉菌培養(yǎng)管 培養(yǎng)基用量為15ml 管 醫(yī)療器械采樣及檢查方法 注射器 取5付注射器 在5ml洗脫液中反復(fù)抽吸5次 洗下管內(nèi)細菌 混和后接種需厭氧菌培養(yǎng)管 共6管 其中1管作陽性對照 與霉菌培養(yǎng)管 共4管 接種量為1ml注射器0 5ml 2ml注射器1ml 5 10ml注射器2ml 20 50ml注射器5ml 培養(yǎng)基用量為接種量2ml以下15ml 管 接種量5ml為40ml 管 醫(yī)療器械采樣及檢查方法 手樣鉗 鑷子等大件醫(yī)療器械 取2件用蘸有無菌洗脫液的棉拭子反復(fù)涂抹采樣 將棉拭子投入5ml無菌洗脫液中 將采樣液混勻 接種于需氧 厭氧培養(yǎng)管 共6管 其中1管作陽性對照 與霉菌培養(yǎng)基 共4管 接種量為1ml 管 培養(yǎng)基用量為15ml 管 醫(yī)療器