高效液相色譜實驗遇到的問題.doc

/knowledge/d311729.html高效液相色譜基線的各種問題 L、基線漂移原因 解決方法 1、柱溫波動。（即使是很小的溫度變化都會引起基線的波動。通常影響示差檢測器、電導(dǎo)檢測器、較低靈敏度的紫外檢測器或其它光電類檢測器。） 1、控制好柱子和流動相的溫度，在檢測器之前使用熱交換器圖2、流動相不均勻。（流動相條件變化引起的基線漂移大于溫度導(dǎo)致的漂移。）2、使用HPLC級的溶劑，高純度的鹽和添加劑。流動相在使用前進(jìn)行脫氣，使用中使用氦氣。 3、流通池被污染或有氣體3、用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸。（不要用鹽酸） 4、檢測器出口阻塞。（高壓造成流通池窗口破裂，產(chǎn)生噪音基線）4、取出阻塞物或更換管子。參考檢測器手冊更換流通池窗。 5、流動相配比不當(dāng)或流速變化5、更改配比或流速。為避免這個問題可定期檢查流動相組成及流速。 6、柱平衡慢，特別是流動相發(fā)生變化時6、用中等強(qiáng)度的溶劑進(jìn)行沖洗，更改流動相時，在分析前用10-20倍體積的新流動相對柱子進(jìn)行沖洗。7、流動相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成7、檢查流動相的組成。使用高品質(zhì)的化學(xué)試劑及HPLC級的溶劑 8、樣品中有強(qiáng)保留的物質(zhì)（高K值）以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現(xiàn)出一個逐步升高的基線。8、使用保護(hù)柱，如有必要，在進(jìn)樣之間或在分析過程中，定期用強(qiáng)溶劑沖洗柱子。 9、使用循環(huán)溶劑，但檢測器未調(diào)整。9、重新設(shè)定基線。當(dāng)檢測器動力學(xué)范圍發(fā)生變化時，使用新的流動相。 10、檢測器沒有設(shè)定在最大吸收波長處。10、將波長調(diào)整至最大吸收波長處 M、基線噪音（規(guī)則的）原因 解決方法 1、在流動相、檢測器或泵中有空氣1、流動相脫氣。沖洗系統(tǒng)以除去檢測器或泵中的空氣。 2、漏液 圖 2、見第三部分。檢查管路接頭是否松動，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要，更換泵密封。 3、流動相混合不完全 3、用手搖動使混合均勻或使用低粘度的溶劑 4、溫度影響（柱溫過高，檢測器未加熱）4、減少差異或加上熱交換器 5、在同一條線上有其他電子設(shè)備5、斷開LC、檢測器和記錄儀，檢查干擾是否來自于外部，加以更正。 6、泵振動 6、在系統(tǒng)中加入脈沖阻尼器 N、基線噪音（不規(guī)則的）原因 解決方法 1、漏液 圖 1、見第三部分。檢查接頭是否松動，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要，更換密封。檢查流通池是否漏液。 2、流動相污染、變質(zhì)或由低質(zhì)溶劑配成2、檢查流動相的組成。 3、流動相各溶劑不相溶 3、選擇互溶的流動相 4、檢測器/記錄儀電子元件的問題4、斷開檢測器和記錄儀的電源，檢查并更正。 5、系統(tǒng)內(nèi)有氣泡 5、用強(qiáng)極性溶液清洗系統(tǒng) 6、檢測器內(nèi)有氣泡 6、清洗檢測器，在檢測器后面安裝背景壓力調(diào)節(jié)器 7、流通池污染（即使是極少的污染物也會產(chǎn)生噪音。）7、用1N的硝酸（不能用磷酸）清洗流通池 8、檢測器燈能量不足 8、更換燈 9、色譜柱填料流失或阻塞 9、更換色譜柱 10、流動相混合不均勻或混合器工作不正常10、維修或更換混合器，在流動相不走梯度時，建議不使用泵的混合裝置 O、寬峰原因 解決方法 1、流動相組成變化 1、重新制備新的流動相 2、流動相流速太低 2、調(diào)節(jié)流速 3、漏液（特別是在柱子和檢測器之間）3、見section 3。檢查接頭是否松動、泵是否漏液、是否有鹽析出以及不正常的噪音。如果必要更換密封。 4、檢測器設(shè)定不正確 4、調(diào)整設(shè)定 5、柱外效應(yīng)影響a、柱子過載b、檢測器對反應(yīng)時間或池體積響應(yīng)過大c、柱子與檢測器之間的管路太長或管路內(nèi)徑太大d、記錄儀響應(yīng)時間太長5、 a、 小體積進(jìn)樣（例如：10ul而不是100ul）以1：10或1：100的比例稀釋樣品b、減少響應(yīng)時間或使用更小的流通池c、 使用內(nèi)徑為0.007-0.01的短管路d、減少響應(yīng)時間 6、緩沖液濃度太低 6、增加濃度 7、保護(hù)柱污染或失效 7、更換保護(hù)柱 8、更換同樣類型的色譜柱。如果新柱子可以提供對稱的色譜峰，則用強(qiáng)溶劑沖洗舊柱子。 9、柱入口塌陷 9、打開柱入口，填補(bǔ)塌陷或更換柱子 10、呈現(xiàn)兩個或多個未被完全分離的物質(zhì)的峰10、選擇其它類型的色譜柱以改善分離效果 11、柱溫過低 11、提高柱溫。除非特殊情況，溫度不宜超過75 12、檢測器時間常數(shù)太大 12、使用較小的時間常數(shù) P、分離度降低原因 解決方法 1、流動相污染或變質(zhì)（引起保留時間變化）1、重新配置流動相 2、保護(hù)柱或分析柱阻塞圖 2、去掉保護(hù)柱進(jìn)行分析。如果必要則更換保護(hù)柱。如果分析柱阻塞，可進(jìn)行反沖。如果問題仍然存在色譜柱可能被強(qiáng)保留的污染物損壞，建議使用恰當(dāng)?shù)脑偕绦颉Ｈ绻麊栴}仍然存在，進(jìn)口可能阻塞了，更換入口處的篩板或更換色譜柱。 Q、所有的峰面積都太小原因 解決方法 1、檢測器衰減設(shè)定過高 1、減少衰減的設(shè)定 2、檢測器時間常數(shù)設(shè)定太大2、設(shè)定較小的時間常數(shù) 3、進(jìn)樣量太少 3、增大進(jìn)樣量 4、記錄儀連接不當(dāng) 4、使用正確的連接 R、所有的峰面積都太大原因 解決方法 1、檢測器衰減設(shè)定過低 1、采取較大的衰減 2、進(jìn)樣過多 2、減少進(jìn)樣量 3、記錄儀連接不正確 3、正確連接記錄儀 HPLC日常維護(hù)辦法之四：進(jìn)樣閥的問題 以下問題在使用進(jìn)樣閥過程中有可能發(fā)生。A、手動進(jìn)樣閥，轉(zhuǎn)動不靈原因 解決方法 1、轉(zhuǎn)子密封損壞 1、更換或調(diào)整轉(zhuǎn)子密封 2、轉(zhuǎn)子太緊 2、調(diào)整轉(zhuǎn)子的松緊度 B、手動進(jìn)樣閥，載樣困難原因 解決方法 1、進(jìn)樣閥安裝不當(dāng) 1、重新安裝 2、定量環(huán)阻塞 2、清洗或更換定量環(huán) 3、進(jìn)樣器污染 3、清洗或更換進(jìn)樣器 4、管路阻塞 4、清洗或更換管路 C、自動進(jìn)樣閥，不能轉(zhuǎn)動原因 解決方法 1、無壓力（或電源） 1、提供恰當(dāng)?shù)膲毫Γ娫矗?2、轉(zhuǎn)子太緊 2、調(diào)整轉(zhuǎn)子的松緊度 3、進(jìn)樣閥安裝不當(dāng) 3、重新安裝 D、自動進(jìn)樣閥，其它問題原因 解決方法 1、阻塞 1、清洗或更換阻塞部件 2、機(jī)械故障 2、見隨機(jī)維修手冊 3、控制器故障 3、維修或更換控制器液相色譜基線有很多的毛刺，但總體上還是水平的，問這是什么原因?qū)е碌模繎屹p分：5 - 解決時間：2006-7-20 21:14 液相色譜基線有很多的毛刺，但總體上還是水平的，問這是什么原因?qū)е碌模?問題補(bǔ)充：我所用的是液相色譜，配紫外檢測器，色譜柱是新的，儀器也沒有振動。毛刺是因信號頻率的波動而引起，是比色譜峰的有效值頻率更高的基線擾動。毛刺的存在并不影響色譜峰的分辨，但對檢測限有一定影響。規(guī)則的毛刺還算是正常，你把基線放寬，就相當(dāng)于靈敏度變高。先給儀器充分的穩(wěn)定時間再看看。如果真的是色譜系統(tǒng)出了問題，一般是這幾個方面的（不管是氣相還是液相都有用）：1.氫氣，空氣，載氣純度不高會影響。2.玻璃襯管是否臟3.色譜柱是否臟，處理一下或換一個新的試一試4.檢測器清洗一下，可能有未燃燒完的雜質(zhì)5.是否漏氣6.進(jìn)樣口是否該換一個墊子7.儀器是否產(chǎn)生較大振動8.信號接收器是否已懷或者接觸不良甚至還有過因為工作站出問題導(dǎo)致的毛刺小弟初次使用液相色譜，基線波動非常厲害怎么回事小弟科室一臺電化學(xué)液相色譜閑置兩年沒人用過，今天小弟初次使用時調(diào)節(jié)流速為0.5 mLmin 工作電壓設(shè)為+ 700 mV ，濾波0。1 Hz ，增益5nA發(fā)現(xiàn)基線抖得很厲害，很有規(guī)律，就是每當(dāng)泵“篤”一聲時就出現(xiàn)一個波峰，大概0.8nA高，也不出現(xiàn)基線向上向下漂移，很影響測量，請問是怎么回事，謝謝 / / / _/ _/ _/ _可能是色譜柱進(jìn)了氣泡，又或者色譜柱還未被流動相跑平衡 （如果是柱子進(jìn)氣泡的話，會出現(xiàn)一組很有規(guī)律的峰）其實基線的波動是難免的，只要波動在允許的范圍之內(nèi)的話，就不會影響測量你問題說的很詳細(xì)，但是你還是沒說：你的柱子有沒有恒溫箱。首先我懷疑柱溫波動。（即使是很小的溫度變化都會引起基線的波動。通常影響示差檢測器、電導(dǎo)檢測器、較低靈敏度的紫外檢測器或其它光電類檢測器。） 解決方法：控制好柱子和流動相的溫度。其次，我懷疑是流動相，流動相有氣泡。流動相條件變化引起的基線波動大于溫度導(dǎo)致的波動。解決方法：使用HPLC級的溶劑流動相在使用前進(jìn)行脫氣，有條件可以在線脫氣。如果你的泵壓也波動的話，檢查系統(tǒng)是否漏液，如果不漏液，就基本上是確定是有氣泡了。其他原因 解決方法1、在流動相、檢測器或泵中有空氣 1、流動相脫氣。沖洗系統(tǒng)以除去檢測器或泵中的空氣