液體菌種培訓(xùn)教材(四)液體菌種的制作過程及方法.doc

液體菌種培訓(xùn)教材(節(jié)選四)2010年4月10日三、液體菌種的制作過程及方法（一）試管種的生產(chǎn)：液體菌種對試管的純度要求很高。所以要自己會(huì)做試管種。試管種的制作其實(shí)很簡單，在我們要用種的前三個(gè)月，到市場上去看哪個(gè)菇符合要求，就買回來（也可以用自己保存的試管種均可）。在接種箱內(nèi)進(jìn)行常規(guī)氣霧（最好是高錳酸鉀和甲醛）消毒，30分鐘后，開始分離。分離時(shí)先將用具消毒，然后用手把菇體分開，用鑷子夾一小塊菇肉（不同的菇取種位置不同），放到試管里。塞上棉塞就行了。這樣的成功率一般在80%以上。在菌絲生長階段，要經(jīng)常觀察菌絲的生長情況。對菌絲生長不整齊的，有污染的，全部淘汰。只留下沒什么問題的，長滿試管后，再取特定部位進(jìn)行轉(zhuǎn)管（見實(shí)操）。菌絲長到*cm時(shí)，從菌絲生長的尖端提取一小塊，一般地認(rèn)為，取*大小就可以了，不過從試驗(yàn)上看，提得*效果越好。平菇一般提二次就可以了，提到五次，基本上與脫毒菌種效果差不多。別的品種要多些，最多不超過五次，都可以達(dá)到提純的目的。（二）三角瓶專用母種生產(chǎn)：專用母種分固體和液體兩種。從生產(chǎn)技術(shù)上看，液體專用母種要難一些，是用電磁攪拌器或搖瓶機(jī)進(jìn)行生產(chǎn)。整個(gè)過程要4-7天時(shí)間，生產(chǎn)的液體種稍經(jīng)加工就可以直接使用。液體菌種專用母種的配方就是用PDA加富配方去掉瓊脂。用三角瓶盛裝，在高壓鍋里121保持30分鐘就行了。待三角瓶的溫度降到30以下時(shí)，在超凈工作臺(tái)或接種箱內(nèi)進(jìn)行接種。馬上就可以進(jìn)行攪拌或搖瓶了。固體種生產(chǎn)時(shí)間要長些，保存的時(shí)間也長，而且方便運(yùn)輸。固體專用母種一般污染要嚴(yán)重一些，有的人污染率要達(dá)到20-30左右。固體專用母種我們現(xiàn)在一般不用，污染率太高，而且不好發(fā)現(xiàn)，最糟糕的是容易堵槍。配方是把木屑過20-40目的篩，用去掉瓊脂的PDA配方拌料，在121高壓下滅菌2小時(shí)，待溫度下降到30度以下時(shí)，在超凈工作臺(tái)或接種箱內(nèi)進(jìn)行常規(guī)接種。一般20多天可以長好。具有運(yùn)輸和貯存方便等特點(diǎn)。攪拌器是應(yīng)用磁性材料N、S極的異性吸引，同性相斥的原理制成的。工作時(shí)，機(jī)械的磁轉(zhuǎn)子轉(zhuǎn)動(dòng)時(shí)，瓶內(nèi)的磁轉(zhuǎn)子在瓶內(nèi)跟著轉(zhuǎn)，帶動(dòng)液體旋轉(zhuǎn)，為液體供氧。液體菌種培養(yǎng)基本條件是有一定的氧氣、菌絲、水份和營養(yǎng)，幾個(gè)因素溶合才能使菌絲快速繁殖。由于轉(zhuǎn)子的高速旋轉(zhuǎn)，產(chǎn)生的菌絲被剪切成菌絲片段。搖瓶機(jī)就是通過搖動(dòng)液體，使空氣與水溶合，增加液體中的氧氣含量。通過搖動(dòng)，液體在瓶內(nèi)翻滾，使菌絲滾動(dòng)成菌球。我們用液體專用母種。 （三）發(fā)酵罐生產(chǎn) 生產(chǎn)時(shí)要先進(jìn)行培養(yǎng)料的配制。配料時(shí)先將土豆去皮切片，與麩皮混合后用不銹鋼鍋煮熟并取汁，再將輔料KH2PO4、MgSO4等溶入，混勻后裝入罐中，也可將免煮培養(yǎng)基或公司提供的專用培養(yǎng)基直接加入到罐內(nèi)加熱滅菌，125維持40分鐘到一小時(shí)進(jìn)行滅菌，滅菌結(jié)束后用冷水冷卻至30以下。將并瓶后的三角瓶專用種在火焰的保護(hù)下接到罐內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)根據(jù)不同的菌種，設(shè)定適宜的溫度。 培養(yǎng)期間應(yīng)注意觀察菌球出現(xiàn)的時(shí)間、顏色和排出氣體的氣味等，壓力控制在*Mpa。如遇到停電，關(guān)閉排氣閥來保持罐中處于正壓狀態(tài)。來電后重新啟動(dòng)，并打開排氣閥繼續(xù)培養(yǎng)。培養(yǎng)過程中，可隨時(shí)采樣分析，幾天后待菌球密度符合要求時(shí)（從視鏡或排料觀察），即可接種。（四）接種液體菌種生產(chǎn)結(jié)束后，在檢測合格的情況下，就要進(jìn)行接種。接種前要先將接種槍、連接管道用棉花塞上，放到高壓鍋里進(jìn)行滅菌。1212