ABO和Rh (D) 血型鑒定操作規(guī)程(鹽水法).doc

ABO和Rh (D) 血型鑒定操作規(guī)程（鹽水法）一目的 規(guī)范ABO/Rh (D) 血型鑒定的操作流程；保證臨床用血的安全性及有效性。二職責(zé) 血庫技術(shù)人員負(fù)責(zé)ABO和Rh (D) 血型鑒定。三適用范圍 適用于血庫ABO和Rh（D）血型鑒定血標(biāo)本。四所需材料和設(shè)備1.材料 抗-A、抗-B、抗-D試劑、A、B、O型反定型試劑紅細(xì)胞、生理鹽水、小試管、滴管、患者血標(biāo)本。2.設(shè)備 普通離心機(jī)、顯微鏡、血型血清學(xué)專用離心機(jī)。五操作步驟 1.將標(biāo)本2000r/分鐘離心2分鐘，使標(biāo)本血漿/血清與紅細(xì)胞分離，并吸取紅細(xì)胞配制3%懸液。 2.取小試管3支，分別標(biāo)明-A、抗-B、抗-D，用滴管分別加抗-A、抗-B、抗-D試劑各2滴于試管底部，再以滴管分別加入受檢者3%紅細(xì)胞懸液1滴，混勻。 3.另取小試管3支，分別標(biāo)明A、B、O細(xì)胞，用滴管分別加入受檢者血清2滴于試管底部，再分別以滴管加入3% A、B、O型試劑紅細(xì)胞懸液1滴，混勻。 4.以1000r/分鐘離心1分鐘。5.將試管輕輕搖動，使沉于管底的紅細(xì)胞浮起，先以肉眼觀察有無凝集（或溶血）現(xiàn)象，如肉眼不見凝集，應(yīng)將反應(yīng)物倒在玻片上，再以顯微鏡檢查。6. ABO血型結(jié)果判定（見下表）：ABO血型結(jié)果判斷分型試劑+受檢者紅細(xì)胞（正定型） 受檢者血清+試劑紅細(xì)胞（反定型） 抗-A 抗-B A細(xì)胞 B細(xì)胞 O細(xì)胞 血型AB注：“” 凝集；“” 不凝集7. Rh（D）血型判定： 紅細(xì)胞與抗-D試劑凝集為Rh (D) 陽性無凝集為Rh陰性。 8.凝集強(qiáng)度判斷標(biāo)準(zhǔn)：4+ 紅細(xì)胞凝集成一大塊，背景清晰透明；3+ 紅細(xì)胞凝集成數(shù)小塊，背景尚清晰；2+ 紅細(xì)胞凝塊分散成許多小塊，背景可見到游離紅細(xì)胞；1+ 肉眼可見大顆粒，周圍有較多游離紅細(xì)胞； 鏡下可見數(shù)個紅細(xì)胞凝集在一塊，周圍有許多游離紅細(xì)胞；混合外觀凝集（Mixed Field, MF）是指鏡下可見少數(shù)紅細(xì)胞凝集，而絕大多數(shù)紅細(xì)胞仍分散分布； （陰性） 鏡下未見凝集，紅細(xì)胞均勻分布。六注意事項(xiàng) 1.單克隆抗體試劑和試劑細(xì)胞（除譜細(xì)胞外）每次使用前必須與相對應(yīng)的紅細(xì)胞和血清做陽性、陰性對照，以檢測其活性。 2.觀察結(jié)果時既要看有無凝集或溶血現(xiàn)象，更要注意凝集強(qiáng)度，此有助于A、B亞型、類B或Cis（順式）AB的發(fā)現(xiàn)。 3.人紅細(xì)胞ABO血型檢驗(yàn)結(jié)果是根據(jù)紅細(xì)胞的抗原和血清/血漿中的抗體反應(yīng)結(jié)果所決定，因此正反定型的結(jié)果應(yīng)該一致。正反定型起到一個互相驗(yàn)證和質(zhì)控的作用。只有正反定型結(jié)果相符才能正確判定ABO血型。 4.反定型對ABO亞型的發(fā)現(xiàn)特別有幫助。原因是亞型患者細(xì)胞上A或B 抗原很弱，通過正反定型易于發(fā)現(xiàn)二者結(jié)果不一致，從而引起警惕。 5.如果正反定型不一致，則需進(jìn)一步鑒定?？稍谡ㄐ驮囼?yàn)中增加抗-A1、抗-AB及抗-H；反定型試驗(yàn)中增加A2、O及自身細(xì)胞。正定型試驗(yàn)中的抗-AB是用來確認(rèn)弱A和弱B抗原，抗-A1用來鑒定A亞型，抗-H用于鑒定亞型及孟買型；反定型試驗(yàn)中的A2細(xì)胞用于鑒定A2亞型，O型細(xì)胞用于鑒定是否存在ABO系統(tǒng)以外的同種抗體影響型，自身對照用于鑒定是否存在自身抗體影響定型。如果是O型細(xì)胞或自身對照為陽性，則定型結(jié)果不可靠，必須進(jìn)一步進(jìn)行血型鑒定。 6.ABO正反定型不一致的原因： （1） 新生兒尚未形成ABO同種抗體，所以三個月內(nèi)的新生兒只要求做正定型確定ABO血型。（2） 漏加試劑，試劑污染或失效、血標(biāo)本和試劑搞錯等，均可造成假陰性、假陽性結(jié)果。（3） 器材不潔可產(chǎn)生假陽性結(jié)果。（4） 分型血清效價太低，親和力不強(qiáng)等均可使凝集反應(yīng)強(qiáng)度減弱，易誤定血型。（5） 紅細(xì)胞懸液過濃或過淡，導(dǎo)致抗原抗體比例不適當(dāng)，出現(xiàn)前帶或后帶現(xiàn)象，易誤判為假陰性。（6） 受檢者紅細(xì)胞上抗原位點(diǎn)過少（如亞型）或抗原性減弱（見于白血病或某些惡性腫瘤）以及類B或CisAB等，均可使凝集反應(yīng)強(qiáng)度減弱。（7） 受檢者血清蛋白紊亂（如巨球蛋白血癥）或?qū)嶒?yàn)溫度過高，常引起細(xì)胞呈緡線狀排列。（8）受檢者血清中缺乏應(yīng)有的抗-A或抗-B，如丙種球蛋白缺乏癥，可引起正、反定型不符。（9）各種原因引起的紅細(xì)胞溶血，誤判為不凝集；部分溶血時，可溶性血型物質(zhì)中和了相應(yīng)的抗體，或者患者血清中血型物質(zhì)過多，中和了相應(yīng)抗體，可導(dǎo)致假陰性結(jié)果。（10）由細(xì)菌污染或遺傳因素引起多凝集或全凝集往往是正反定 型不符的原因。近期曾輸過異型血，使患者血液標(biāo)本成為不同型別的紅細(xì)胞混合物，定型時顯示“混合外觀凝聚”現(xiàn)象。（11）嵌合體血型體內(nèi)有兩群紅細(xì)胞，定型時顯示“混合外觀凝集”現(xiàn)象。（12）獲得性類B 由于革蘭陰性桿菌的作用，紅細(xì)胞可獲得“類B”的活性。（13）藥物等因素藥物、右旋糖及靜脈注射某些造影劑聚集而類似凝集。（14）血清中有意外抗體，如自身抗-I，常干擾定型。（15）老年人血清中抗體水平大幅度下降，影響反定型結(jié)果。7.如果無法找到正反定型不一致的原因，患者又需要緊急輸血，則只能給患者輸注Rh（D）同型的O型紅細(xì)胞（O型紅細(xì)胞須正反定型相符），同時可請中心血站協(xié)助鑒定患者血型。8.舊性血標(biāo)本，紅細(xì)胞要用生理鹽水洗滌2至3次，配制懸液再行鑒定。9.含有冷凝集素的患者血清，可采用37生理鹽水洗滌3次，如果37還顯弱凝集，再用42或45生理鹽水洗滌1次，再進(jìn)行血型鑒定。 10.自身免疫性溫抗體產(chǎn)生的非特異性凝集患者，采用遞增溫度223745的生理鹽水洗滌紅細(xì)胞后作血型鑒定，或者采用放散的方法將紅細(xì)胞上吸附的抗體釋放后再進(jìn)行血型鑒定。11.Rh（D）血型鑒定原則：對受血者常規(guī)只測Rh（D）抗原，而對獻(xiàn)血者不僅要