定量分析的內(nèi)標(biāo)法與外標(biāo)法.doc

色譜法不僅是一種分離方法，而且通過(guò)被分離組分分別進(jìn)入檢測(cè)器，能精確測(cè)的各組分在樣品中的含量。定性分析：通常用與標(biāo)準(zhǔn)樣比較保留時(shí)間進(jìn)行定性，即保留時(shí)間相同可能是同樣的組分；保留時(shí)間不同，肯定不是同樣的組分。液相色譜定量分析的基本原理定量分析是在定性分析的基礎(chǔ)上，需要純物質(zhì)作為標(biāo)準(zhǔn)樣品。液相色譜的定量是相對(duì)的定量方法，即：由已知的標(biāo)準(zhǔn)樣品推算出被測(cè)樣品的量。液相色譜法定量的依據(jù)：被測(cè)組分的量(W)與響應(yīng)值(A)（峰高或峰面積）成正比,W=fA。 定量校正因子(f)：是定量計(jì)算公式的比例常數(shù)，其物理意義時(shí)單位響應(yīng)值（峰面積）所代表的被測(cè)組分的量。由已知標(biāo)準(zhǔn)樣品的量和其響應(yīng)值可以求得定量校正因子。測(cè)定未知組分的響應(yīng)值，通過(guò)定量校正因子即可求得該組分的量。定量分析常用術(shù)語(yǔ)：樣品（sample）含有帶測(cè)物，供色譜分析的溶液。分為標(biāo)樣和未知樣。標(biāo)樣（standard）濃度已知的純品。未知樣（unknow）濃度待測(cè)的混合物。樣品量（sample weight）待測(cè)樣品的原始稱樣量。稀釋度（dilution）未知樣的稀釋倍數(shù)。組分（componance）欲做定量分析的色譜峰，即含量未知的被測(cè)物。組分的量（amount）被測(cè)物質(zhì)的含量（或濃度）。積分（integerity）由計(jì)算機(jī)對(duì)色譜峰進(jìn)行的峰面積測(cè)量的計(jì)算過(guò)程。校正曲線（calibration curve）組分含量對(duì)響應(yīng)值的線性曲線，由已知量的標(biāo)準(zhǔn)物建立，用于測(cè)定待測(cè)物的未知含量。常用的定量方法標(biāo)準(zhǔn)曲線法，分為外標(biāo)法和內(nèi)標(biāo)法。外標(biāo)法在液相色譜中用的最多。內(nèi)標(biāo)法準(zhǔn)確但是麻煩，在標(biāo)準(zhǔn)方法中用的最多。 外標(biāo)法用被測(cè)化合物的純品作為標(biāo)準(zhǔn)樣品，配制成一系列的已知濃度的標(biāo)樣。注入色譜柱的到其響應(yīng)值（峰面積）。在一定范圍內(nèi)，標(biāo)樣的濃度與響應(yīng)值之間存在較好的線性關(guān)系，即W=fA，制成標(biāo)準(zhǔn)曲線。在完全相同的實(shí)驗(yàn)條件下，注入未知樣品，得到欲測(cè)組分的響應(yīng)值。根據(jù)已知的系數(shù)f，即可求出欲測(cè)組分的濃度。外標(biāo)法的優(yōu)點(diǎn)：操作、計(jì)算簡(jiǎn)單，是一種常用的定量方法。 無(wú)需各組分都被檢出、洗脫。需要標(biāo)樣。標(biāo)樣及未知樣品的測(cè)定條件要一致。進(jìn)樣體積要準(zhǔn)確。外標(biāo)法缺點(diǎn)：實(shí)驗(yàn)條件要求高，如檢測(cè)器的靈敏度，流速、流動(dòng)相組成的不能發(fā)生變化；每次進(jìn)樣體積要有好的重復(fù)性。 內(nèi)標(biāo)法操作：將已知量的內(nèi)標(biāo)樣加入標(biāo)準(zhǔn)樣品，制成混合標(biāo)樣，并配制一系列的已知濃度的工作標(biāo)樣。混合標(biāo)樣中標(biāo)樣與內(nèi)標(biāo)樣的摩爾比不變。注入色譜柱，以（標(biāo)樣峰面積/內(nèi)標(biāo)樣峰面積）為響應(yīng)值。根據(jù)響應(yīng)值與工作標(biāo)樣濃度之間存在的線性關(guān)系，即W=fA，制成標(biāo)準(zhǔn)曲線。將已知量的內(nèi)標(biāo)樣加入未知樣品，注入色譜柱，得到欲測(cè)組分的響應(yīng)值。根據(jù)已知的系數(shù)f，即可求出欲測(cè)組分的濃度。內(nèi)標(biāo)法的特點(diǎn)：操作過(guò)程中樣品和內(nèi)標(biāo)是混合在一起注入色譜柱的，因此只要混合溶液中被測(cè)組分與