微藻工廠化培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)分享(附單胞藻的培養(yǎng)配方)

微藻工廠化培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)分享（附單胞藻的培養(yǎng)配方）大家好，很高興今天能跟大家交流一下微藻的規(guī)模培育。規(guī)模培育在水產(chǎn)養(yǎng)殖方面現(xiàn)在主要運(yùn)用于大棚生物餌料方面(一定地點(diǎn)建立車(chē)間、濃縮之后近距離管道運(yùn)輸?shù)金B(yǎng)殖區(qū)域)、提取色素添加在飼料中，至于土塘潑灑，如何控制量、增氧和開(kāi)口餌料這方面正在摸索，需要大家一起總結(jié)出經(jīng)驗(yàn)。今天我跟大家主要跟大家分享一下藻種的工廠化規(guī)模化培育。群里面應(yīng)該很多人都培育過(guò)藻，大家都知道藻種的培育分為一級(jí)、二級(jí)、三級(jí)培養(yǎng)，今天我是簡(jiǎn)單從一級(jí)、二級(jí)、三級(jí)培養(yǎng)過(guò)程可能中遇到的問(wèn)題、日常管理、接種、藻種營(yíng)養(yǎng)配方這些方面做一下簡(jiǎn)單的交流。因各地環(huán)境氣候、溫度、光照、水質(zhì)條件不同。不同季節(jié)、藻種性質(zhì)不同，單位水體養(yǎng)殖品種的需求量也不同。所以培養(yǎng)條件、營(yíng)養(yǎng)鹽配方等各有不同。今天我主要是以金藻為例，引申出其他藻種的營(yíng)養(yǎng)配方，讓大家學(xué)習(xí)一下其中的相似點(diǎn)。國(guó)內(nèi)大部分水產(chǎn)育苗企業(yè)，在育苗生產(chǎn)中都是自備微藻養(yǎng)殖設(shè)施，自行生產(chǎn)各類(lèi)餌料用微藻。但是一般育苗場(chǎng)都普遍缺乏相應(yīng)的專(zhuān)業(yè)技術(shù)力量，只能利用各自的藻池和天然水體粗放培養(yǎng)，在餌料微藻種質(zhì)、生產(chǎn)技術(shù)和應(yīng)用方法上都各自為正，導(dǎo)致微藻種質(zhì)混亂、供應(yīng)不穩(wěn)定、營(yíng)養(yǎng)成分不平衡、餌料效價(jià)低、缺乏多品種集約化生產(chǎn)應(yīng)用技術(shù)；同時(shí)，受限于微藻高密度養(yǎng)殖、采收技術(shù)和濃縮液保藏技術(shù)的限制，國(guó)內(nèi)幾乎沒(méi)有統(tǒng)一的、專(zhuān)業(yè)化的餌料微藻質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和集中供應(yīng)點(diǎn)。所以工廠化育苗需要及時(shí)的補(bǔ)充藻種，開(kāi)口餌料非常重要。首先從工藝流程上來(lái)說(shuō)一級(jí)培養(yǎng)：主要用于保種，主要用的儀器是錐形瓶，其能夠完全消毒，所以應(yīng)用在保種上面特別多。二級(jí)培養(yǎng)：主要是用塑料白桶（聚丙烯材料），生產(chǎn)上也用20L的飲水桶，但是瓶口小，操作不方便，消毒也不徹底；而用氧氣袋又易破裂。在南方經(jīng)常可以見(jiàn)到用玻璃制作的大型魚(yú)缸和氧氣袋?；貜?fù)舉報(bào)|來(lái)自Android客戶(hù)端2樓2016-03-03 08:04 xiazaiba06知名人士10三級(jí)培養(yǎng)：主要有小型的10 m3、20 m3、30m3左右的室內(nèi)水泥池，采光良好，白色透明玻璃鋼瓦或塑料薄膜于車(chē)間頂部用于培育藻種。接下來(lái)我主要簡(jiǎn)單的講一下容器和工具的洗滌、消毒。培藻過(guò)程中所有的容器和工具，比如錐形瓶、礦泉水桶、攪拌棒等必須經(jīng)過(guò)去污漬、肥皂等刷洗，之后再用消毒后的蒸餾水沖洗3-4遍。消毒的方法一般有加熱消毒法、化學(xué)試劑消毒法、紫外線(xiàn)消毒法。一般小型儀器用加熱消毒法，比如錐形瓶，方法是在錐形瓶瓶口放一培養(yǎng)皿，瓶中加水，煮沸，煮沸完之后，用牛皮紙或紗布包住，備用，這種方法能殺死營(yíng)養(yǎng)體的部分芽孢。大型儀器、工具、培養(yǎng)池用化學(xué)藥品消毒（漂白粉、酒精、高錳酸鉀、鉻酸洗液等），漂白粉的有效氯含量一般是30-35%，漂白精的有效氯的含量是漂白粉的2倍，消毒時(shí)按1/10000-3/10000的含量配成水溶液，浸泡容器、工具半小時(shí)，再用消毒水沖洗3-4次（消毒水既是煮沸、沉淀、過(guò)濾其中的水）。水泥池的消毒可配成高濃度的漿糊狀漂白溶液，淋灑池壁，半小時(shí)后用消毒水沖洗干凈。也可以用較低含量的漂白粉進(jìn)行全池浸泡后，用消毒水沖洗，停放12小時(shí)后才可使用。酒精消毒一般用于人為操作，如在活化藻種、搖瓶或者攪拌的時(shí)候，涂抹手，消毒小的儀器上使用。酒精一般是配置成70-75%左右，殺菌效果是最顯著的，使生物蛋白脫水變性凝固，故有殺菌效果。海水的消毒，一般海水的消毒有過(guò)濾和加入化學(xué)消毒劑法。因?yàn)楹Ｋ局饕糜谌?jí)培養(yǎng)，三級(jí)大規(guī)模培養(yǎng)時(shí)候主要用于殺滅有害生物，處理水必須無(wú)毒，對(duì)培養(yǎng)藻類(lèi)的生長(zhǎng)繁殖影響不大。水消毒必須簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)、易行，不然大規(guī)模運(yùn)水特別多的時(shí)候培藻成本會(huì)加大。補(bǔ)充：消毒海水時(shí)可根據(jù)培養(yǎng)的目的和方式選用以下方法之一。1、加熱消毒法：經(jīng)沉淀、過(guò)濾的海水，一般加溫至90左右維持5分鐘或達(dá)到沸騰即可。由于海水中的一些對(duì)藻類(lèi)生長(zhǎng)有促進(jìn)作用的有機(jī)物在高溫時(shí)易遭破壞，所以加溫時(shí)間不宜太長(zhǎng)。2、過(guò)濾除菌法：把經(jīng)沉淀的海水先經(jīng)砂濾，把大型生物和非生物雜質(zhì)去除，再用陶瓷過(guò)濾罐過(guò)濾，除去微小生物。3、次氯酸鈉消毒法：按每立方米海水20毫克有效氯的量加入次氯酸鈉溶液，充氣10分鐘后停氣，經(jīng)67小時(shí)消毒后，按每立方米水體25克的量加入硫代硫酸鈉，強(qiáng)充氣46小時(shí)，用硫酸-碘化鉀-淀粉溶液測(cè)試，若無(wú)余氯即可使用。4、紫外線(xiàn)消毒：有成型的紫外線(xiàn)消毒器可供選用。但此法不易殺滅較大的浮游動(dòng)物。最好和過(guò)濾法結(jié)合使用。加熱消毒我們就不解釋了。主要是過(guò)濾除菌消毒，沉淀后的海水經(jīng)過(guò)紗慮池紗慮大型的生物及非生物雜質(zhì)出去，再經(jīng)陶瓷過(guò)濾罐過(guò)濾，除去微小生物，也可兩次紗慮，兩次紗慮也可以起到比較好的效果。漂白粉和漂白液消毒的時(shí)候，向水中加入漂白粉和漂白液，用硫代硫酸鈉中和余氯，中和余氯的過(guò)程以及操作流程的具體步驟如下：氯含量測(cè)定方法一硫代硫酸鈉滴定法需要的物品:1%碘化鉀溶液 (1 g溶于100ml水中)1.58%硫代硫酸鈉溶液 (1.58g溶于100ml水中 )HCI 37%樣品溶于一定數(shù)量的水中的溶液（即稀釋一定倍數(shù)）程序在滴定瓶中加50ml碘化鉀溶液，0.25ml HCI 和1ml樣品溶液，這時(shí)候瓶中溶液應(yīng)該變?yōu)楹稚昧虼蛩徕c滴定，直到瓶中溶液變?yōu)槌吻澹](méi)有顏色）。每ml硫代硫酸鈉可以中和3.55ppt的氯樣品溶液的氯濃度 = 硫代硫酸鈉的毫升數(shù)3.55 100/1000(%) 樣品的氯含量=樣品溶液的氯濃度樣品稀釋倍數(shù)方法二1 試劑（1）KI溶液：10%。（2）淀粉溶液：0.5%。 稱(chēng)取0.5克可溶性淀粉于小燒杯中，用少量水?dāng)噭蚝蠹尤?100ml的沸水中，加入后不斷攪拌，并煮沸至溶液透明為止。加熱時(shí)間不易過(guò)長(zhǎng)且應(yīng)迅速冷卻，以免降低淀粉指示劑的靈敏性能。如需久存，可加入少量的HgI2或ZnCl2等防腐劑。（3）H2SO4溶液：2 mol/L。（4）K2Cr2O7標(biāo)準(zhǔn)溶液：0.1000 mol/L。將K2Cr2O7在150-180烘干2小時(shí)，放入干燥器中冷卻至室溫。準(zhǔn)確稱(chēng)取1.2258克于100ml燒杯中，加蒸餾水溶解后轉(zhuǎn)入250ml容量瓶中，用水稀釋至刻度充分搖勻。（5）Na2S2O3溶液：0.1 mol/L。將12.5克Na2S2O3 5H2O溶解在500毫升新煮沸冷卻后的水中，加入0.1克碳酸鈉，儲(chǔ)于棕色瓶中并搖勻，保存于暗處一周后標(biāo)定使用。（低濃度的溶液需稀釋?zhuān)?）丙二酸：20%溶液。2 實(shí)驗(yàn)步驟（1） 硫代硫酸鈉溶液的標(biāo)定用25毫升移液管吸取0.1000 mol/L重鉻酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液三份，分別置于250毫升碘量瓶中，加入5毫升6N鹽酸、5毫升20%KI，搖勻后在暗處放置約5min，待反應(yīng)完全，用100毫升水稀釋。用硫代硫酸鈉溶液滴定至溶液由棕色到綠黃色，加入2毫升0.5%淀粉指示劑，繼續(xù)滴定至溶液由藍(lán)色至亮綠色即為終點(diǎn)。根據(jù)消耗的硫代硫酸鈉溶液的毫升數(shù)計(jì)算其濃度。（低濃度的溶液標(biāo)定類(lèi)似）（2） 有效氯含量的測(cè)定取10毫升待測(cè)消毒溶液，置于250毫升碘量瓶中，加入2 mol/L 硫酸 10毫升，10%碘化鉀溶液10毫升，此時(shí)溶液出現(xiàn)棕色。蓋上蓋并振搖混勻后加蒸餾水?dāng)?shù)滴于碘量瓶蓋緣，在暗處放置約5min。打開(kāi)蓋，讓蓋緣蒸餾水流入瓶?jī)?nèi)。用硫代硫酸鈉溶液（裝于25毫升棕色滴定管中）滴定游離碘，邊滴邊搖勻，待溶液呈淺棕黃色時(shí)，加入10滴0.5%淀粉指示劑，溶液立即變藍(lán)色，繼續(xù)滴定至溶液由藍(lán)色至無(wú)色即為終點(diǎn)。記錄消耗的硫代硫酸鈉溶液的毫升數(shù)（V，ml）。重復(fù)測(cè)3次，取3次平均值進(jìn)行以下計(jì)算。 因1 mol/L硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液營(yíng)養(yǎng)鹽接下來(lái)說(shuō)一下?tīng)I(yíng)養(yǎng)鹽的加法。以金藻為例，金藻的生長(zhǎng)繁殖過(guò)程中必須每個(gè)營(yíng)養(yǎng)元素都有一個(gè)最低量，如果低于這個(gè)最低量，生長(zhǎng)繁殖則會(huì)受到抑制，如果某種營(yíng)養(yǎng)的含量過(guò)高也會(huì)對(duì)藻類(lèi)產(chǎn)生毒害作用，甚至死亡，因?yàn)楹窟^(guò)高會(huì)破壞滲透壓系統(tǒng)，讓藻脫水死亡。今天我跟大家說(shuō)一下金藻的營(yíng)養(yǎng)鹽，一般主要的營(yíng)養(yǎng)鹽配方是F/2，營(yíng)養(yǎng)鹽有大量元素、微量元素以及維生素，大量元素一般都是硝酸鈉（NaNO3）、磷酸二氫鈉（ NaH2PO4），微量元素有鋅（Zn）、錳（Mn）、鉬（Mo）、鈷（Co）、銅（Cu）、鐵(Fe)，維生素有維生素B1（VB1）：主要是輔助糖類(lèi)代謝，對(duì)能量起到積極的作用、維生素B12（VB12）：有利于鐵的利用，促進(jìn)代謝等發(fā)育成熟、維生素B6（VB6）：活化多種酶，有助于VB12的吸收等、生物素（VBH）：脂肪和蛋白正常代謝不可或缺的物質(zhì)，是一種維持生長(zhǎng)、繁殖的營(yíng)養(yǎng)素。培藻過(guò)程中如果是人工繁殖時(shí)，在光照、營(yíng)養(yǎng)鹽、PH適合的情況它會(huì)非常大規(guī)模的繁殖。此時(shí)，水體中的二氧化碳會(huì)成為藻類(lèi)繁殖的限制因子。現(xiàn)在金藻和其它藻在人工繁殖的時(shí)候，碳源的補(bǔ)充是非常重要的，因?yàn)槠渌鼱I(yíng)養(yǎng)鹽可以通過(guò)正交分解得出最優(yōu)的含量，而在藻體繁殖過(guò)程中光合作用需要大量的二氧化碳，從而導(dǎo)致碳源的需求量增大，這時(shí)根據(jù)情況人為補(bǔ)充碳源的話(huà)會(huì)起到非常好的繁殖效果，可通過(guò)氣石、攪拌等方式補(bǔ)充二氧化碳。培藻過(guò)程中如果是人工繁殖時(shí)，在光照、營(yíng)養(yǎng)鹽、PH適合的情況它會(huì)非常大規(guī)模的繁殖。此時(shí)，水體中的二氧化碳會(huì)成為藻類(lèi)繁殖的限制因子。現(xiàn)在金藻和其它藻在人工繁殖的時(shí)候，碳源的補(bǔ)充是非常重要的，因?yàn)槠渌鼱I(yíng)養(yǎng)鹽可以通過(guò)正交分解得出最優(yōu)的含量，而在藻體繁殖過(guò)程中光合作用需要大量的二氧化碳，從而導(dǎo)致碳源的需求量增大，這時(shí)根據(jù)情況人為補(bǔ)充碳源的話(huà)會(huì)起到非常好的繁殖效果，可通過(guò)氣石、攪拌等方式補(bǔ)充二氧化碳。培養(yǎng)金藻的時(shí)候，一般一、二級(jí)用康維方，康維方一般基于F/2配方基礎(chǔ)上的一個(gè)配方，而三級(jí)培養(yǎng)的時(shí)候用金藻培養(yǎng)液。金藻培養(yǎng)液：硝酸鈉溶液：磷酸二氫鉀溶液:檸檬酸鐵氨=100：10：1，1000ml滅菌海水。在三級(jí)培養(yǎng)的時(shí)候，營(yíng)養(yǎng)鹽的添加都是1:1000的添加，就是1毫升的營(yíng)養(yǎng)鹽添加到1L的水體中。在生產(chǎn)時(shí)可以為了生產(chǎn)等便利，可以放大配方比例，在大規(guī)模的培養(yǎng)中1：10000的添加也是可以的。實(shí)驗(yàn)結(jié)果當(dāng)然是1:1000最好，但是實(shí)驗(yàn)和實(shí)際生產(chǎn)中肯定有一定的誤差，在實(shí)際生產(chǎn)中1:10000也可以正常的培育出高密度的金藻。當(dāng)然在大規(guī)模的培養(yǎng)中1：10000的添加，起到的效果稍微差一點(diǎn)，但也不會(huì)差到哪里去。接種接下來(lái)就是接種，接種其實(shí)也是一個(gè)很簡(jiǎn)單的操作，接下來(lái)我簡(jiǎn)單說(shuō)明下。金藻在二級(jí)培養(yǎng)（高密度擴(kuò)大培養(yǎng)的時(shí)候），能達(dá)到700800萬(wàn)個(gè)cell/ML，扁藻能達(dá)到100150萬(wàn)個(gè)cell/ML，小球藻也能達(dá)到1000萬(wàn)個(gè)cell/ML。接種就是把作為藻種的藻液接入新配好的培養(yǎng)液中，進(jìn)行豐富培養(yǎng)。接種的過(guò)程雖然簡(jiǎn)單，但要注意藻種的質(zhì)量、藻種的密度、接入藻液的數(shù)量以及接種的時(shí)間等問(wèn)題。藻種的質(zhì)量我們可以根據(jù)藻細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、附壁、沉淀、鏡檢顏色，觀察它的質(zhì)量好壞。金藻是金褐色，硅藻是呈黃褐色，綠藻是鮮綠色，有運(yùn)動(dòng)能力會(huì)上浮，沒(méi)有運(yùn)動(dòng)能力均勻漂浮在水中。附壁和沉淀：好的藻種一般沒(méi)有明顯的附壁，如果藻種受到環(huán)境因子等各方面的不適宜條件的時(shí)候，會(huì)大量的聚集沉淀。鏡檢的時(shí)候一般都是觀察顏色和運(yùn)動(dòng)，有無(wú)雜藻，有無(wú)大的原生動(dòng)物和蟲(chóng)子，水體中的藻種是否過(guò)關(guān)。接藻的時(shí)候，金藻培育從二級(jí)向三級(jí)接的時(shí)候，金藻藻細(xì)胞達(dá)到250萬(wàn)/毫升的時(shí)候就可以接種了。一級(jí)培養(yǎng)或小型培養(yǎng)可以是1:2或者1:3的接種，二級(jí)培養(yǎng)或生產(chǎn)培養(yǎng)可以是1:10、1:20、1:40的接種也可以正常生長(zhǎng)。剛說(shuō)的這些，1:20不清楚，我舉一些簡(jiǎn)單的例子，假設(shè)5000Ml的錐形瓶，培養(yǎng)5000ML的藻液，可以接種1個(gè) 20L的礦泉水桶，3個(gè)20L的礦泉水桶可以接種1m3的保種池，1m3米的保種池可以接種2個(gè)5m3的生產(chǎn)池。接種時(shí)間一般選擇在早上的8:0010:00，這時(shí)候選擇接種是因?yàn)樵弩w的活性隨著光照、環(huán)境溫度的上升，活性是最好的，接種的時(shí)候它能夠快速的進(jìn)入到指數(shù)生長(zhǎng)期。培養(yǎng)工藝，金藻培養(yǎng)有一次性施肥、混合營(yíng)養(yǎng)鹽的施肥和碳酸氫鈉分批次的施肥。金藻在國(guó)內(nèi)現(xiàn)在應(yīng)該是開(kāi)放式半連續(xù)培養(yǎng)。日常管理日常管理是非常重要的一塊，跟消毒一樣。比如你培養(yǎng)了30m3的水池，如果你培養(yǎng)時(shí)從顏色等感覺(jué)還行，突然之間有可能全部死亡，可能是你日常管理不規(guī)范、不細(xì)致，引起雜菌繁殖和無(wú)法探知的原因?qū)е屡囵B(yǎng)的藻體全部死亡。2.2 亞心形扁藻培養(yǎng)液NaNO3 0.05克KH2PO4 0.005克FeC6H5O7 (1%溶液) 0.2毫升維生素B1 200微克維生素B12 200毫微克人尿 2毫升海水 1000毫升3、硅藻培養(yǎng)液配方3.1、湛江水產(chǎn)學(xué)院硅藻培養(yǎng)液NaNO3 0.08克KH2PO4 0.008克FeC6H5O7 (1%溶液) 0.2毫升Na2SiO3 0.02克維生素B1 200微克維生素B12 200毫微克人尿 1.5毫升海水 1000毫升培養(yǎng)三角褐指藻、小新月菱形藻、鈣質(zhì)角毛藻、牟氏角毛藻。3.2、中肋骨條藻培養(yǎng)液KNO3 0.4克Na2HPO4 2H2O 0.04克K2SiO3 0.02克Fe(SO4)3 7H2O 0.014克土壤提取液 15毫升“920”植物生長(zhǎng)激素 45國(guó)際單位海水 1000毫升3.3 牟氏角毛藻配方NH4NO3 520毫克KH2PO4 0.51毫克FeC6H5O7 3H20 0.52毫克海水 1000毫升4、金藻培養(yǎng)液配方4.1 “f /2”培養(yǎng)液NaNO3 74.8毫克NaH2PO4 4.4毫克Na2SiO3 9H2O 8.416.7毫克f /2微量元素溶液 1毫升f /2維生素溶液 1毫升海水 1000毫升4.2 等鞭金藻OA-3011培養(yǎng)液（陳椒芬等）NaNO3 0.06克K2HPO4 0.004克FeC6H5O7 0.5毫克Na2SiO3 0.005克維生素B1 100500微克維生素B12 0.51.5毫克NaHCO3 1克海水 1000毫升二、微量元素溶液配方1、A5-B6微量元素溶液配方A5：H3BO3 2.86克MnCl2.4H2O 1.81克ZnSO4.7H2O 0.22克CuSO4.5H2O 0.08克Na2MoO4 0.021克純水 1000毫升H2SO4 （濃） 1滴B6NH4VO3 229.6毫克Cr2(SO4)4.24H2O 960.2毫克NiSiO4.6H2O 447.8毫克Co(NO3)2.6H2O 493.8毫克Ti溶液 20毫升0.2摩爾/升 H2SO4 1000毫升Ti溶液配法：把736.6克草酸鈦溶解于少量純水中，加入氫氧化銨