微生物學(xué)檢驗--操作流程及評分標準.doc

1、顯微鏡的使用操作流程及評分標準項目內(nèi)容分值扣分標準扣分目的掌握顯微鏡的使用方法及注意事項用物準備光學(xué)顯微鏡、載玻片、擦鏡紙、香柏油、脫油劑素質(zhì)要求讓學(xué)生能夠熟練使用顯微鏡操作步驟1.安放：把顯微鏡放在自己前面略偏左的桌面上，這樣便于用左眼觀察物像，用右眼看著畫圖。安放時鏡筒向前，鏡臂向后。2.對光：轉(zhuǎn)動轉(zhuǎn)換器，使低倍物鏡正對通光孔，并使物鏡前端與載物臺有兩厘米左右的距離。然后把反光鏡對著光源，但是反光鏡不能直接對著太陽。只要視野的光亮程度合適，光就對好了。3.觀察：對好光后，把顯微鏡玻片標本放在載物臺上，并使玻片上的標本對著通光孔的中心，再用壓片夾夾住。然后慢慢地轉(zhuǎn)動調(diào)焦螺旋，直到接近玻片為止

2、。接著，用左眼向目鏡內(nèi)注視，同時反方向轉(zhuǎn)動調(diào)焦螺旋，直到看清物像為止。4.再放大：選好一個放大目標，再把要放大的部分移到視野正中心，如果物像不清楚，再轉(zhuǎn)動調(diào)焦螺旋。如果還觀察不清楚，就必須換用高倍物鏡。用高倍物鏡觀察時，高倍物鏡頂端離玻片很近，稍不小心，鏡頭就會壓到玻片，所以要特別小心。5.在顯微鏡里看到的物像是倒像，因此，要使物像向上移動，就要向下移動玻片；要使物像向左移動，就要向右移動玻片。注意事項1.先用低倍鏡觀察，用低倍鏡能看清的，就不再用高倍鏡。2.必須保護好鏡頭。3.載物臺要保持清潔干燥。4.轉(zhuǎn)動調(diào)焦螺旋不要用力過猛，以防損傷機件。5.取用顯微鏡要輕拿輕放，要用右手握鏡臂，左手托鏡

3、座。6.使用完畢，要把顯微鏡外表擦干凈，并把鏡筒旋下至最低處。最后把顯微鏡放入鏡箱，送回原處保存。細菌的形態(tài)學(xué)檢驗操作流程及評分標準項目內(nèi)容分值扣分標準扣分目的掌握革蘭染色的基本原理和操作方法用物準備革蘭染色液、生理鹽水、載玻片、接種環(huán)、酒精燈、顯微鏡、香柏油、蠟筆、擦鏡紙、脫油劑素質(zhì)要求能夠熟練對細菌標本進行染色，觀察結(jié)果，對細菌進行分類操作步驟（1）涂片：取清潔無油跡的載玻片1張，用蠟筆劃線將其分成左右兩格。用接種環(huán)先挑取生理鹽水12環(huán)于載玻片每格中央，再分別挑取大腸桿菌和葡萄球菌少許菌落與生理鹽水研勻，涂成直徑約1.5cm的菌膜。（2）干燥：讓涂片自然干燥，也可在酒精燈火焰較遠處微微加熱

4、烘干，但切勿靠近火焰。（3）固定：干燥后的標本片在酒精燈火焰上來回通過3次（以鐘擺的速度），冷卻后染色。固定的目的在于殺死細菌，并使菌膜與玻片牢固粘附，避免染色過程中被水沖洗掉，通過固定還可凝固細胞質(zhì)，改變細菌對染料的通透性，使細菌易與染料結(jié)合而著色。（4）染色：結(jié)晶紫-盧戈碘液-95乙醇-稀釋石炭酸復(fù)紅-待干、鏡檢（初染）-（媒染）-（脫色）-（復(fù)染）注意事項1.革蘭氏染色成敗的關(guān)鍵是酒精脫色時間。2.染色過程中勿使染色液干涸。3.選用幼齡的細菌。G+菌培養(yǎng)12h-16h，E.coli培養(yǎng)24h?；A(chǔ)培養(yǎng)基的制備與滅菌操作流程及評分標準項目內(nèi)容分值扣分標準扣分目的掌握基礎(chǔ)基礎(chǔ)培養(yǎng)基的配制流程

5、、滅菌的方法及注意事項用物準備牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、瓊脂粉、1mol/LNaOH、1mol/LHCl 試管、吸管、平皿、錐形瓶、量筒、吸管、精密PH試紙、天平、濾紙素質(zhì)要求要求熟練操作培養(yǎng)基的配制和滅菌操作步驟一、培養(yǎng)基的配制1.配制溶液2.調(diào)節(jié)pH值3.過濾4.分裝二、培養(yǎng)基的滅菌1.開蓋2.通電3.加水4.放樣5.設(shè)定溫度和時間注意事項1 調(diào)節(jié)PH值時，要邊滴氫氧化鈉邊攪拌，不能一次加太多2 加熱時間控制好，否則培養(yǎng)基會煮糊。3 滅菌是要注意將滅菌鍋里的空氣排干凈。4 注意滅菌的時間和溫度的控制。細菌的接種培養(yǎng)法操作流程及評分標準項目內(nèi)容分值扣分標準扣分目的掌握細菌的接種方法及操作流程用

6、物準備溫箱、酒精燈、接種環(huán)、接種針、L形玻棒、打火機、記號筆素質(zhì)要求能夠熟練操作各種接種方法操作步驟（一）平板劃線接種法（又稱分離培養(yǎng)法）燒灼接種環(huán)，殺滅環(huán)上殘留細菌，待冷，從薄膜處取菌作連續(xù)平行劃線，約占平板表面1/5左右，再次燒灼接種環(huán)，等三次平行劃線以同樣方法作第四次，第五次劃線，將平板表面劃完。劃線完畢，蓋上平皿蓋，底面向上，用標簽或臘筆注明菌名檢驗號碼，接種者信息等，置37孵育培養(yǎng)24小時后觀察結(jié)果。（二）斜面培養(yǎng)基接種法試管口部于火焰上往返通過23次滅菌，將滅菌白金環(huán)伸入有菌試管中，取少量細菌，然后移至準備接種的試管中。接種方法是自管底向上連續(xù)平劃線，若以保存菌為目的時可自管底上劃

7、一粗直線即可。取出接種環(huán)，將試管上部再經(jīng)火焰滅菌，塞好棉塞，接種環(huán)滅菌后放回原處。（三）半固體培養(yǎng)基穿刺培養(yǎng)法滅菌穿刺針沾取細菌后，垂直刺入半固體培養(yǎng)基中央直達近管底處，再沿原穿刺線抽出即可。注意事項1選擇適合其生長需要的培養(yǎng)基2防止污染。培養(yǎng)基和一切用具必須徹底滅菌；操作時必須靠近火焰；操作完畢后，禁止再讓培養(yǎng)基接觸外界空氣。3防止接種器械過熱，很容易殺死分離培養(yǎng)的細菌。細菌的分布操作流程及評分標準項目內(nèi)容分值扣分標準扣分目的熟悉細菌在自然界和人體的分布，了解外界因素對細菌的影響用物準備待測水樣、泥土、無菌吸管，平皿，無菌生理鹽水素質(zhì)要求讓學(xué)生熟悉細菌在自然界和人體的分布情況操作步驟1.空氣

8、中細菌的檢查（1）方法：取普通平板（或血平板）1個，選室內(nèi)或室外的一處空間，在離地面1m左右高度的桌面（或臺面）上，打開平板蓋，讓培養(yǎng)基暴露于空氣中，10min之后，迅速蓋好蓋子，在底部寫上標記，放35培養(yǎng)1824h，觀察結(jié)果。（2）結(jié)果觀察2水中細菌檢查（1）方法：1）用無菌三角燒瓶以無菌的方法采集水樣。2）用無菌吸管吸取1ml水樣以無菌技術(shù)加入無菌平皿中。3）趁熱（不燙手為宜），傾注約15ml的普通瓊脂，立即在臺面上輕輕轉(zhuǎn)動平皿使其混勻。待瓊脂凝固后，將其放入35，培養(yǎng)1824h。（2）結(jié)果觀察報告。3人體咽喉部細菌檢查（1）方法：1）采樣持無菌棉拭1根，待受試者張大嘴巴后，迅速伸入對方懸

9、臃垂后的咽喉部，輕輕揩取咽喉壁上的分泌物。2）接種以無菌方法用棉簽在瓊脂平板的一角(1/4處)來回劃線，去掉棉拭，然后用接種環(huán)在原劃線上過23下，接著往下劃線分離。3）培養(yǎng)寫上標記，將平板放35，1824h培養(yǎng)。注意事項1.注意無菌操作，防止空氣或人體上的細菌污染。2倒入的培養(yǎng)基溫度大約在45左右（熱而不燙手為宜），太熱，太冷都不行。細菌對抗藥物敏感試驗操作流程及評分標準項目內(nèi)容分值扣分標準扣分目的掌握藥敏試驗的方法、原理、結(jié)果判讀、臨床意義用物準備供試菌種、普通瓊脂培養(yǎng)基、藥敏紙片、培養(yǎng)起、平皿、鑷子、試管、酒精燈、涂布棒素質(zhì)要求要求學(xué)生熟練操作紙片擴散法操作步驟1 配制培養(yǎng)基2.配制菌懸液

10、3.涂布于瓊脂平板的表面4.室溫下干燥3-5分鐘5.貼藥敏紙片6.35培養(yǎng)16-18小時7.測量抑菌圈直徑，參照相關(guān)標準判讀結(jié)果。注意事項1.培養(yǎng)基的質(zhì)量2.藥敏紙片的質(zhì)量,含藥量和保存方式3.接種菌量正確與否是影響結(jié)果的重要因素之一,取決于麥氏比濁標準的配制,正確使用和保存5孵育條件,溫度和時間6抑菌圈測量工具的精度7質(zhì)控菌種本身的藥敏特性是否合格,有無變異。糖發(fā)酵試驗操作流程及評分標準項目內(nèi)容分值扣分標準扣分目的熟悉葡萄糖發(fā)酵試驗的原理和操作方法。用物準備大腸桿菌，糖發(fā)酵管素質(zhì)要求熟悉大腸桿菌對葡糖糖的發(fā)酵情況。操作步驟1. 取兩支HL葡萄糖培養(yǎng)基，置沸水中水浴10分鐘。2. 冷卻，將待檢

11、細菌接種到2支培養(yǎng)基中。3. 取其中一支加滅菌的液體石蠟，使其與空氣隔絕，另一管不加液體石蠟4. 35培養(yǎng)18-24小時，觀察結(jié)果注意事項配制糖發(fā)酵管內(nèi)裝的小倒管在接種細菌前應(yīng)是無氣泡存在的，否則不能進行接種甲基紅試驗操作流程及評分標準項目內(nèi)容分值扣分標準扣分目的熟悉甲基紅試驗的原理和操作方法。用物準備菌種、葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)基，甲基紅素質(zhì)要求能利用甲基紅試驗對大腸桿菌進行鑒定操作步驟1. 將待檢的細菌接種于葡萄糖蛋白胨水中2. 35培養(yǎng)18-24小時3. 滴加甲基紅試劑4. 結(jié)果：呈紅色為陽性，黃色為陰性。注意事項1.注意無菌操作2.注意觀察指示劑的變化病毒的分離培養(yǎng)操作流程及評分標準項目內(nèi)容

12、分值扣分標準扣分目的了解雞胚培養(yǎng)常見的幾種接種方法；掌握雞胚尿囊腔接種的操作技術(shù)。用物準備受精卵、孵卵器，檢卵燈，齒鉆，磨殼器，鋼針，蛋座木架，注射器，25%碘酒，70%酒精，鑷子，剪刀，封蠟（固體石蠟加 1/4凡士林，溶化），滅菌培養(yǎng)皿，滅菌蓋玻片等。素質(zhì)要求要求能夠?qū)Σ煌牟《就ㄟ^雞胚進行培養(yǎng)操作步驟一、準備蛋胚二、接種1.絨毛尿囊膜接種將孵育1012天的蛋胚放在檢卵燈上，選擇血管較少的地方做一記號，并在記號處的卵殼上磨開一三角形小窗，用小鑷子揭去所開小窗處的卵殼，小心地劃破殼膜，用針尖刺破氣室小孔處的殼膜，用注射器通過窗口的殼膜窗孔滴 005 01ml病毒液于絨毛尿囊膜上。涂上半凝固的石蠟，將雞卵保持人工氣室在上方的位置37培養(yǎng)，4896小時觀察結(jié)果。2. 尿囊腔接種將蛋胚在檢卵燈上照視，并在絨毛尿囊膜血管較少的地方作記號。用碘酒消毒氣室蛋殼，并用鋼針在記號處鉆一小孔。用帶18mm長針頭的1ml注射器吸取病毒液，針頭刺入孔內(nèi)，經(jīng)絨毛尿囊膜入尿囊腔，注入01ml病毒液。用石蠟封孔后于37孵卵器孵育72小時。3.羊膜腔接種將孵育1011天的蛋胚照視，畫出氣室范圍，并在胚胎最靠近卵殼的一側(cè)做記號。用齒