二苯胺試劑鑒定DNA

1、.二苯胺試劑:鑒定DNA。 二苯胺試劑的配制 A液:1.5 g二苯胺溶于100 mL 冰醋酸中,再加15 mL濃硫酸,用棕色瓶保存。如冰醋酸呈結晶狀態(tài),則需加溫后待其熔化,再使用。 B液:乙醛的體積分數(shù)為0.2%的溶液。 配制:將0.1 mL B液加入到10 mL A液中,現(xiàn)配現(xiàn)用。 DNA的粗提取與鑒定 實驗原理 1. DNA在NaCl溶液中的溶解度，是隨著NaCl的濃度的變化而改變的。 當NaCl的物質(zhì)的量濃度為0.14 molL時,DNA的溶解度最低。利用這一原理，可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。 2.DNA不溶于酒精溶液，但是細胞中的某些物質(zhì)則可以溶于酒精溶液。利用這一原理，可

2、以進一步提取出含雜質(zhì)較少的DNA。 3.DNA遇二苯胺（沸水?。境伤{色，因此，二苯胺可以作為鑒定DNA的試劑。 注意事項 1.步驟3析出含DNA的黏稠物中，蒸餾水要沿燒杯內(nèi)壁緩緩加入，不能一次快速倒入。 2.實驗中有多個步驟都要用玻璃棒進行攪拌，但是在不同的步驟中玻璃棒的用法不同。 實驗用具 雞血細胞液（510 mL）；體積分數(shù)為95的冷酒精，蒸餾水，質(zhì)量濃度為0.1 gmL的檸檬酸鈉溶液，物質(zhì)的量濃度分別為2 molL和0015 molL的NaCl溶液，二苯胺試劑；燒杯（100 mL，1個， 50 mL， 500 mL，各2個），漏斗，試管（20 mL，2個），玻璃棒，滴管，量筒（100

3、 mL，1個），紗布，鑷子，濾紙，鐵架臺，鐵環(huán)，三角架，酒精燈，石棉網(wǎng)，載玻片，試管夾。 實驗原理： 1.析出溶解在NaC1溶液中的DNA。 2.用冷酒精提取出含雜質(zhì)較少的DNA。 3.DNA在沸水浴時被二苯胺染成藍色。 方法步驟： 1提取細胞核物質(zhì)：順時針方向攪拌，稍快，稍重。 5 min 2溶解DNA： 3析出含DNA的黏稠物：蒸餾水300mL，逆時針方向攪拌，緩慢 4過濾：取黏稠物 5再溶解：順時針方向攪拌，較慢。3 min 6過濾：取濾液。 7提取出含雜質(zhì)較少的DNA，逆時針方向攪拌，稍慢。5 min 8DNA的鑒定：沸水浴5min 【實驗十二】DNA的粗提取與鑒定 實驗原理 DNA在

4、氯化鈉溶液中的溶解度，是隨著氧化鈉的濃度的變化而改變的。當氯化鈉的物質(zhì)的量濃度為 2 molL時，DNA的溶解度最大，濃度為 014 molL時，DNA的溶解度最低。利用這一原理，可以使溶解在氯化鈉溶液中的DNA析出。 DNA不溶于95%的酒精溶液，但是細胞中的某些物質(zhì)則可以溶于酒精溶液。利用這一原理，可以進一步提取出含雜質(zhì)較少的DNA。 DNA中含有脫氧核糖，能與二苯胺（沸水?。┓磻伤{色物質(zhì)，因此，二苯胺可以作為鑒定DNA的試劑。 目的要求1. 學會DNA的粗提取和鑒定的方法。2. 觀察提取出來的DNA物質(zhì)的顏色和形狀。 材料用具 材料：活雞或鮮血雞血。 儀器：離心機、恒溫水裕鍋、載玻片

5、，玻璃棒，濾紙，滴管，量簡（100 mL，l個），燒杯（100 mL，l個，50 mL、500 mL各 2個），試管（20 mL，2個），漏斗，試管夾，紗布。 試劑：酒精的體積分數(shù)為95的溶液（實驗前置于冰箱內(nèi)冷卻24 h），蒸餾水，檸檬酸鈉的質(zhì)量濃度為 01gmL的溶液，氯化鈉的物質(zhì)的量濃度分別為 2 molL和0015 mol/L的溶液，二苯胺試劑。 方法步驟 實驗前需要制備雞血細胞液（由教師完成），制備的方法是：取檸檬酸鈉的質(zhì)量濃度為 01 gmL的溶液（抗凝劑）100 mL，置于500 mL燒杯中。將宰殺活雞流出的雞血（約180 mL）注入燒杯中，同時用玻璃棒攪拌，使血液與檸檬酸鈉溶液

6、充分混合，以免凝血。然后，將血液倒入離心管內(nèi)，用 1000 rmin的離心機離。2min，此時血細胞沉淀于離心管底部。實驗時，用吸管除去離。心管上部的澄清液，就可以得到雞血細胞液。 1提取雞血細胞的細胞核物質(zhì) 將制備好的雞血細胞液5 mL10mL，注入到50 mL燒杯中。向燒杯中加入蒸餾水20 mL，同時用玻璃棒充分攪拌5 min，使血細胞加速破裂。然后，用放有紗布的漏斗將血細胞液過濾至500mL。取其濾液。 2溶解細胞核內(nèi)的DNA 將氯化鈉的物質(zhì)的量濃度為 2 mol的溶液40mL加入到濾液中，并搖動燒杯，使其混合均勻，這時DNA在溶液中呈溶解狀態(tài)。 3析出含DNA的粘稠物 沿燒杯內(nèi)壁緩緩加

7、入蒸餾水，同時用玻璃棒不停地輕輕攪拌，這時燒杯中有絲狀物出現(xiàn)，注意觀察絲狀物呈什么顏色。繼續(xù)加入蒸餾水，溶液中出現(xiàn)的粘稠物會越來越多。當粘稠物不再增加時停止加入蒸餾水（這時溶液中氯化鈉的物質(zhì)的量濃度相當于0.14 molL）。 4濾取含DNA的粘稠物 用放有多層紗布的漏斗，過濾步驟3中的溶液至 500mL的燒杯中，含 DNA的粘稠物被留在紗布上。 5將DNA的粘稠物再溶解 取 1個 50 mL燒杯，向燒杯內(nèi)注入氯化鈉的物質(zhì)的量濃度為 2 molL的溶液 20mL。用鈍頭鑷子將紗布上的粘稠物夾至氯化鈉溶液中，用玻璃擇不停地攪拌，使粘稠物盡可能多地溶解于溶液中。 6過濾含有DNA的氯化鈉溶液 取1

8、個100 mL燒杯，用放有兩層紗布的漏斗過濾步驟5中的溶液。取其濾液，DNA溶于濾液中。 7提取含雜質(zhì)較少的DNA 在上述濾過的溶液中，加入冷卻的、酒精的體積分數(shù)為 95的溶液 50mL（使用冷卻的酒精，對DNA的凝集效果較佳），并用玻璃棒攪拌，溶液中會出現(xiàn)含雜質(zhì)較少的絲狀物。用玻璃棒將絲狀物卷起，并用濾紙吸取上面的水分。這種絲狀物的主要成分就是DNA 。注意觀察絲狀物是什么顏色的。 8DNA的鑒定 取兩支20 mL的試管，各加入氯化鈉的物質(zhì)的量濃度為0015 molL的溶液5 mL，將絲狀物放入其中一支試管中，用玻璃棒攪拌，使絲狀物溶解。然后，向兩支試管中各加入4mlL的二苯胺試劑?；旌暇鶆蚝螅瑢⒃嚬苤糜诜兴屑訜?5 min，待試管冷卻后，觀察并且比較兩支試管中溶液顏色的變化。將觀察的結果填寫在實驗報告冊上。 結論 步驟8的2支試管中溶液顏色的變化說明了什么？