復(fù)方丹參片檢驗方法確認(rèn)方案

1、復(fù)方丹參片檢驗方法確認(rèn)方案文件編號：文件審定部門簽名日期起草人審核人批準(zhǔn)人浙江優(yōu)康制藥有限公司1. 概述：復(fù)方丹參片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為已驗證的法定標(biāo)準(zhǔn)，含量測定方法為HPLC法，其它項目為實驗室日常測試步驟。根據(jù)2010年版藥品質(zhì)量管理規(guī)范的要求，需要對含量測定檢驗方法進(jìn)行確認(rèn)，包括專屬性、精密度、準(zhǔn)確度三個方面。2. 目的：確認(rèn)復(fù)方丹參片含量測定檢驗方法在我公司質(zhì)量控制實驗室的適用性。3. 適用范圍：復(fù)方丹參片含量測定檢驗方法4. 條件： 4.1. 檢驗操作規(guī)程齊全 4.2. 設(shè)備相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程齊全 4.3. 檢驗、檢測儀器均已校驗5. 確認(rèn)時間計劃：從 年 月 日開始至 年 月 日完成。6. 含

2、量測定含丹參以丹參酮IIA計檢測方法確認(rèn) 6.1 確認(rèn)要求及標(biāo)準(zhǔn) 6.1.1. 色譜條件系統(tǒng)適用性試驗(在專屬性試驗時一并進(jìn)行)：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水-（7327）為流動相；檢測波長為270nm。理論板數(shù)以丹參酮IIA峰計算應(yīng)不低于2000，分離度大于1.5。 6.1.2. 專屬性 空白樣品溶液在與丹參酮IIA對照品溶液相同的保留時間處色譜峰峰面積小于對照品峰面積的3%。 6.1.3. 精密度 RSD應(yīng)不得超過2.0% 6.1.4. 準(zhǔn)確度 丹參酮IIA的加樣回收率98.0%102%，回收率的RSD小于2.0%。 6.2. 材料和分析方法 6.2.1. 試劑： 對照品 ：

3、丹參酮IIA 批號 ： 來源： 樣品 ：復(fù)方丹參片 批號 ： 來源： 試劑名稱：甲醇 批號 ： 來源： 空白對照物：按復(fù)方丹參片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制法自制（缺丹參） 6.2.2. 儀器： 高效液相色譜儀型號： 編號： 色譜柱編號： 分析天平型號 ： 編號： 超聲處理器型號： 編號： 6.2.3溶液配置： 6.2.3.1.對照品溶液配置 取丹參酮IIA對照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1ml含40微克的溶液即得。 6.2.3.2供試品溶液 取復(fù)方丹參片20片，除去糖衣片，精密稱定，研細(xì)，取約1g，精密稱定后置具塞棕色瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞稱定重量，超聲處理15分鐘，放冷，再稱定重量

4、并補(bǔ)足，搖勻濾過取續(xù)濾液置棕色瓶中即得。 6.2.3.3. 空白物溶液 取空白物20片，除去糖衣片，精密稱定，研細(xì)，取約1g，精密稱定后置具塞棕色瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞稱定重量，超聲處理15分鐘，放冷，再稱定重量并補(bǔ)足，搖勻濾過取續(xù)濾液置棕色瓶中即得。 6.2.3.4.儲備液A 精密稱取丹參酮IIA對照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1ml含120微克的溶液即得。 6.2.4 分析方法： 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水-（7327）為流動相；檢測波長為270nm；進(jìn)樣量為10 ul。 6.3.檢驗方法的確認(rèn) 6.3.1專屬性 6.3.1.1 色譜條件與系統(tǒng)適用

5、性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水-（7327）為流動相；檢測波長為270nm。理論丹參酮IIA峰計算應(yīng)不低于2000，分離度大于1.5。 6.3.1.2. 測定 分別精密吸取對照品溶液與空白樣品溶液各10l，注入液相色譜儀，測定，記錄色譜圖。 6.3.1.3. 確認(rèn)合格標(biāo)準(zhǔn) 空白樣品溶液在與丹參酮IIA對照品溶液相同的保留時間處色譜峰峰面積小于對照品峰面積的3%。 6.3.2.精密度 6.3.2.1重復(fù)性 6.3.2.1.1. 取同一濃度的對照品溶液及供試品溶液分別連續(xù)進(jìn)樣6針（10ul），記錄色譜圖。6.3.2.1.2. 確認(rèn)合格標(biāo)準(zhǔn) 6針對照品溶液、供試品溶液峰面積的RS

6、D應(yīng)不得超過2.0%。 6.3.2.2中間精密度 6.3.2.2.1. 在不同的日期和不同的儀器，不同檢驗員（3人）按6.2.3.2的方法重新制備樣液，分別計算含量。 6.3.2.2.2. 確認(rèn)合格標(biāo)準(zhǔn) 每人RSD應(yīng)不得超過2.0%，3人RSD應(yīng)不得超過2.0%。 6.3.3準(zhǔn)確度表1溶液編號加入儲備液A（ml）加入空白對照物（g）容量瓶（ml）進(jìn)樣濃度（ugml）16.012528.827.012533.636.00.8203648.012538.457.00.8204269.012543.2710.012548811.012552.899.00.82054 6.3.3.1溶液19:將表2中

7、規(guī)定量的儲備液A 和空白對照物置于規(guī)定量的具塞棕色容量瓶中，用甲醇補(bǔ)足至25ml，密塞稱定重量，超聲處理15分鐘，放冷，再稱定重量并補(bǔ)足，搖勻濾過取續(xù)濾液置棕色瓶中即得。 6.3.3.2精密吸取9份樣液各10ul，注入液相色譜儀，測定，計算回收率。計算公式： 回收率（%）= 測得值100% 加入的對照品量 6.3.3.3確認(rèn)合格標(biāo)準(zhǔn) 丹參酮IIA的加樣回收率收率98.0%102%，回收率的RSD小于2.0%。 7. 含量測定含丹參以丹酚酸B計檢測方法確認(rèn) 7.1 確認(rèn)要求及標(biāo)準(zhǔn) 7.1.1. 色譜條件系統(tǒng)適用性試驗(在專屬性試驗時一并進(jìn)行)：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈甲醇甲酸水（1

8、0：30：1：59）為流動相；檢測波長為286nm。理論板數(shù)以丹酚酸B峰計算應(yīng)不低于4000。 7.1.2. 專屬性 空白樣品溶液在與丹酚酸B對照品溶液相同的保留時間處色譜峰峰面積小于對照品峰面積的3%。 7.1.3. 精密度 RSD應(yīng)不得超過2.0% 7.1.4. 準(zhǔn)確度 丹參酮IIA的加樣回收率大于收率98.0%102%，回收率的RSD小于2.0%。 7.2. 材料和分析方法 7.2.1. 試劑： 對照品 ：丹參酮IIA 批號 ： 來源： 樣品 ：復(fù)方丹參片 批號 ： 來源： 試劑名稱：乙腈 批號 ： 來源： 試劑名稱：甲酸 批號 ： 來源： 試劑名稱：甲醇 批號 ： 來源： 空白對照物：

9、按復(fù)方丹參片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制法自制（缺丹參） 7.2.2. 儀器： 高效液相色譜儀型號： 編號： 色譜柱編號： 分析天平型號 ： 編號： 超聲處理器型號： 編號： 7.2.3溶液配置： 7.2.3.1.對照品溶液配置 取丹酚酸B對照品適量，精密稱定，加水制成每1ml含60微克的溶液即得。 7.2.3.2供試品溶液 取復(fù)方丹參片20片，除去糖衣片，精密稱定，研細(xì)，取約0.15g，精密稱定后置50ml具塞量瓶中，加水適量，超聲處理30分鐘，放冷，加水至刻度，搖勻離心取上清夜即得。 7.2.3.3. 空白物溶液 取空白對照物20片，除去糖衣片，精密稱定，研細(xì)，取約0.15g，精密稱定后置50ml具塞量瓶中

10、，加水適量，超聲處理30分鐘，放冷，加水至刻度，搖勻離心取上清夜即得。 7.2.4 分析方法： 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈甲醇甲酸水（10：30：1：59）為流動相；檢測波長為286nm；進(jìn)樣量為10 ul。 7.3.檢驗方法的確認(rèn) 7.3.1專屬性 7.3.1.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈甲醇甲酸水（10：30：1：59）為流動相；檢測波長為286nm。理論板數(shù)以丹酚酸B峰計算應(yīng)不低于4000。 7.3.1.2. 測定 分別精密吸取對照品溶液與空白樣品溶液各10l，注入液相色譜儀，測定，記錄色譜圖。 7.3.1.3. 確認(rèn)合格標(biāo)準(zhǔn) 空白樣品

11、溶液在與丹酚酸B對照品溶液相同的保留間處色譜峰峰面積小于對照品峰面積的3%。 7.3.2.精密度 7.3.2.1重復(fù)性 7.3.2.1.1. 取同一濃度的對照品溶液及供試品溶液分別連續(xù)進(jìn)樣6針（10ul），記錄色譜圖。7.3.2.1.2. 確認(rèn)合格標(biāo)準(zhǔn) 6針對照品溶液、供試品溶液峰面積的RSD應(yīng)不得超過2.0%。 7.3.2.2中間精密度 7.3.2.2.1. 在不同的日期和不同的儀器，不同檢驗員（3人）按7.2.3.2的方法重新制備樣液，分別計算含量。 7.3.2.2.2. 確認(rèn)合格標(biāo)準(zhǔn) 每人RSD應(yīng)不得超過2.0%，3人RSD應(yīng)不得超過2.0%。 7.3.3準(zhǔn)確度 7.3.3.1取丹酚酸B

12、對照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加水制成每1ml含60微克的溶液。取上述（7.2.3.2）研細(xì)的復(fù)方丹參片樣品0.09g，精密稱定10份，分別置于50ml具塞量瓶中，并分別加入對照品溶液0、10、10、10、20、20、20、30、30、30ml，加入適量水超聲處理30分鐘，放冷后用水補(bǔ)足至刻度，搖勻離心取上清夜即得。 7.3.3.2精密吸取10份樣液各10ul，注入液相色譜儀，測定，計算回收率。計算公式： 回收率（%）=測得值-樣品中的量100% 加入的對照品量 7.3.3.3確認(rèn)合格標(biāo)準(zhǔn) 丹酚酸B的加樣回收率收率98.0%102%，回收率的RSD小于2.0%。8. 含量測定含三七以人參

13、皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷R1、人參皂苷Re計檢測方法確認(rèn) 8.1 確認(rèn)要求及標(biāo)準(zhǔn) 8.1.1. 色譜條件系統(tǒng)適用性試驗(在專屬性試驗時一并進(jìn)行)：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動相A，以水為流動相B，按表1的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫檢測波長為203nm。理論板數(shù)以人參皂苷Rg1峰計算應(yīng)不低于6000，人參皂苷Rg1與人參皂苷Re的分離度應(yīng)大于1.8.表2時間（分鐘）流動相A（）流動相B（）0351981355519298171557029717010029407160 8.1.2. 專屬性 空白樣品溶液在與對照品溶液相同的保留時間處色譜峰峰面積小于對照品峰面積的3%。 8.1.

14、3. 精密度 RSD應(yīng)不得超過2.0% 8.1.4. 準(zhǔn)確度 參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷R1、人參皂苷Re的加樣回收率大于收率98.0%102%，回收率的RSD小于2.0%。 8.2. 材料和分析方法 8.2.1. 試劑： 對照品 ：丹參酮IIA 批號 ： 來源： 樣品 ：復(fù)方丹參片 批號 ： 來源： 試劑名稱：乙腈 批號 ： 來源： 試劑名稱：甲醇 批號 ： 來源： 空白對照物：按復(fù)方丹參片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制法自制（缺三七） 8.2.2. 儀器： 高效液相色譜儀型號： 編號： 色譜柱編號： 分析天平型號 ： 編號： 超聲處理器型號： 編號： 8.2.3溶液配置： 8.2.3.1.對照品溶

15、液配置 精密稱取人參皂苷Rg1對照品、人參皂苷Rb1對照品、人參皂苷R1對照品、人參皂苷Re對照品適量，加70%甲醇制成每1ml含參皂苷Rg1及人參皂苷Rb1各0.2mg、人參皂苷R1及人參皂苷Re各0.05mg的混合溶液即得。 8.2.3.2供試品溶液 取復(fù)方丹參片10片，除去糖衣片，精密稱定，研細(xì)，取約1g，精密稱定后置50ml具塞量瓶中，加70%甲醇50ml并稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，稱定重量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻濾過，取續(xù)濾液即得。 8.2.3.3. 空白物溶液 取空白物10片，除去糖衣片，精密稱定，研細(xì)，取約1g，精密稱定后置50ml具塞量瓶中，加70%甲醇50m

16、l并稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，稱定重量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻濾過，取續(xù)濾液即得。 8.2.4 分析方法： 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動項A，以水為流動項B，按表1的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫，進(jìn)樣量為20 ul。 8.3.檢驗方法的確認(rèn) 8.3.1專屬性 8.3.1.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動相A，以水為流動相B，按表2的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫檢測波長為203nm。理論板數(shù)以人參皂苷Rg1峰計算應(yīng)不低于6000，人參皂苷Rg1與人參皂苷Re的分離度應(yīng)大于1.8. 8.3.1.2. 測定 分別精密吸

17、取對照品溶液與空白樣品溶液各20l，注入液相色譜儀，測定，記錄色譜圖。 8.3.1.3. 確認(rèn)合格標(biāo)準(zhǔn) 空白樣品溶液在與對照品溶液相同的保留間處色譜峰峰面積小于對照品峰面積的3%。 8.3.2.精密度 8.3.2.1重復(fù)性 8.3.2.1.1. 取同一濃度的對照品溶液及供試品溶液分別連續(xù)進(jìn)樣6針，記錄色譜圖。8.3.2.1.2. 確認(rèn)合格標(biāo)準(zhǔn) 6針對照品溶液、供試品溶液峰面積的RSD應(yīng)不得超過2.0%。 8.3.2.2中間精密度 8.3.2.2.1. 在不同的日期和不同的儀器，不同檢驗員（3人）按8.2.3.2的方法重新制備樣液，分別計算含量。 8.3.2.2.2. 確認(rèn)合格標(biāo)準(zhǔn) 每人RSD應(yīng)不得超過2.0%，3人RSD應(yīng)不得超過2.0%。 8.3.3準(zhǔn)確度 8.3.3.1精密稱取人參皂苷Rg1對照品、人參皂苷Rb1對照品、人參皂苷R1對照品、人參皂苷Re對照品適量，加70%甲醇制成每1ml含參皂苷Rg1及人參皂苷Rb1各0.2mg、人參皂苷R1及人參皂苷Re各0.05mg的對照