植物組織培養(yǎng)實習報告工作報告

1、植物組織培養(yǎng)實習報告工作報告篇一：植物組織培養(yǎng)實驗報告 植物組織培養(yǎng)實驗報告 一、實驗目的 1掌握無菌操作的植物組織培養(yǎng)方法； 2通過配置ms培養(yǎng)基母液，掌握母液的配置和保存方法； 3通過誘導豌豆根、莖、葉形成愈傷組織 學_愈傷組織的建立方法； 4通過誘導豌豆莖、葉形成愈傷組織 學_愈傷組織的建立方法； 5了解植物細胞通過分裂、增殖、分化、發(fā)育, 最終長成完整再生植株的過程, 加深對植物細胞的全能性的理解。 二、實驗原理 （一）植物組織培養(yǎng) 植物組織培養(yǎng)是把植物的器官，組織以至單個細胞，應用無菌操作使其在人工條件下，能夠繼續(xù)生長，甚至分化發(fā)育成一完整植株的過程。植物的組織在培養(yǎng)條件下，原來已經(jīng)

2、分化停止生長的細胞，又能重新分裂，形成沒有組織結(jié)構(gòu)的細胞團，即愈傷組織。這一過程稱為“脫分化作用”，已經(jīng)“脫分化”的愈傷組織，在一定條件下，又能重新分化形成輸導系統(tǒng)以及根和芽等組織和器官，這一過程稱“再分化作用”。 （二）植物細胞的全能性 植物細胞的全能性即是每個植物的本細胞或性細胞都具有該植物的全套遺傳基因，在一定培養(yǎng)條件下每個細胞都可發(fā)育成一個與母體一樣的植株。 （三）組織的分化與器官建成 外植體誘導出愈傷組織后，經(jīng)過繼代培養(yǎng)，可以在愈傷組織內(nèi)部形成一類分生組織即具有分生能力的小細胞團，然后，再分化成不同的器官原基。有些情況下，外植體不經(jīng)愈傷組織而直接誘導出芽、根。 （四）培養(yǎng)基的組成 培

3、養(yǎng)基中各成分的比例及濃度與細胞或組織的生長或分化所需要的最佳條件相近，似成功地使用該培養(yǎng)基進行組織培養(yǎng)的主要條件。營養(yǎng)培養(yǎng)基一般由無機營養(yǎng)、碳源和能源、維生素、植物激素（生長調(diào)節(jié)劑）和包括有機氮、酸和復雜物質(zhì)的添加劑組成。 三、實驗器材 高壓滅菌鍋、超凈工作臺、烘箱、培養(yǎng)室 鑷子、記號筆、橡皮筋、玻 璃器皿、三角燒瓶、燒杯、量筒、剪刀、棉塞、繩子、牛皮紙、酒精燈、噴霧器等。 四、實驗材料 豌豆種子 五、實驗藥品 藥品 、70% 酒精、 0.1% 升汞、ms培養(yǎng)基、蒸餾水、naoh、 84消毒液、蔗糖、瓊脂等。 六、實驗步驟 （一）培養(yǎng)基母液的配制 表1.ms培養(yǎng)基個成分的含量（單位：mg/l）

4、 表2.ms培養(yǎng)基所需母液以及擴大倍數(shù) 名稱 大量元素 微量元素 ca鹽 mg鹽 fe鹽 有機 肌醇 激素 擴大倍數(shù) 50 50 50 50 50 100 100 100 定容體積(ml) 500 500 500 500 500 200 200 50 吸取毫升數(shù)/l 20 20 20 20 20 10 10 5 （注：吸取毫升數(shù)為每升培養(yǎng)基所吸取的母液的體積） 表3.配制母液所需的藥品及稱取量 （注：根據(jù)表1與表2計算各物質(zhì)的稱取量） 藥品名稱 nh4no3 kno3 kh2po4 稱取量（mg） 41250 47500 4250 藥品名稱 ki na2mno45h2o 稱取量（mg） 20.

5、75 6.25 0.625 cacl26h2o 0.625 mgso44h2o 695 甘氨酸 40 na-edta 932.5 鹽酸硫胺素 8 mnso47h2o 215 煙酸 10 h3bo3 155 （1） ms大量元素母液的配制 參考表3稱取一定量的下列藥品用蒸餾水溶解，定容至500ml存放于冰箱中備用。 名稱 重量（mg） 名稱 重量(mg) nh4no3 kno3 41250 47500 kh2po4 cacl22h2o 4250 11000 （2） ms微量元素母液 參考表3稱取一定量的下列藥品用蒸餾水溶解，定容至500ml存放于冰箱中備用。 名稱 ki h3bo3 mnso47

6、h2o znso47h2o 重量(mg) 20.75 155 557.5 215 名稱 na2moo42h2o cuso45h2o cocl26h2o 重量(mg) 6.25 0.625 0.625 （3） ms有機母液 參考表3稱取一定量的下列藥品用蒸餾水溶解，定容至200ml存放于冰箱中備用。 名稱 肌醇 煙酸 鹽酸吡哆醇 重量(mg) 名稱 鹽酸硫胺素 甘氨酸 重量(mg) _ 10 10 8 40 （4） ms鐵鹽母液的配制 參考表3稱取一定量的下列藥品用蒸餾水溶解，定容至500ml存放于冰箱中備用。 名稱 edta二鈉 重量(mg) 932.5 名稱 feso44h2o 重量(mg)

7、 695 （5） ms鈣鹽母液的配制 參考表3稱取11000mg的cacl27h2o用蒸餾水溶解定容至500ml，保存于冰箱備用。 （7） ms肌醇母液的配制 參考表3稱取_mg的肌醇用蒸餾水溶解定容至200ml，保存于冰箱備用。 （8） ms激素母液的配制 各種生長素和細胞分裂素要單獨配制，不能混合在一起，生長素類一般要先用少量95%的酒精或1當量的naoh溶解，細胞分裂素一般要先用1當量的鹽酸溶解，然后再加蒸餾水定容。一般取100mg配成100ml母液。 （二）培養(yǎng)基的配制 以配制1l的ms培養(yǎng)基為例進行如下操作： （1） 取1l的大燒杯，加入適量的蒸餾水在電磁爐上加熱至沸騰； （2） 分

8、別取（一）中配制的8種母液放入小燒杯中，然后加入，邊加邊攪拌； （3） 稱取30g蔗糖加入，邊加邊攪拌； （4） 稱取8g瓊脂加入，邊加邊攪拌，知之瓊脂粉溶解； （5） 定容至1l，加入激素母液，用naoh調(diào)ph6.0左右； （6） 將培養(yǎng)基分別分裝于洗好的三角瓶中，塞上棉塞包上牛皮紙用繩子扎緊； （7） 放入消毒滅菌鍋滅菌，滅菌20分鐘左右； （8） 滅菌后從滅菌鍋中取出培養(yǎng)基，平放在實驗臺上令其冷卻凝固。 （三）高壓蒸汽滅菌鍋的使用方法 具體操作步驟： （1） 高壓鍋放水至平把架； （2） 把包扎好的培養(yǎng)基裝入高壓鍋； （3） 蓋上熱壓鍋蓋,上緊螺帽(注意對角擰緊螺帽)關上氣閥和安全閥；

9、（4） 然后接通電源； （5） 壓力計升至0.05mpa時，打開放氣閥,排除冷空氣(此步很重要)； （6） 排除冷空氣后,關閉放氣閥，待壓力升到0.11mpa位置時，開始計算滅菌時間，具體方法：當壓力鍋指針升至0.12mpa時，關閉電源，待指針下降至0.11mpa時接通電源，不斷重復此操作過程，維持20分鐘； （7） 滅菌時間達到20分鐘后，除去電源，打開放氣閥(注意要逐漸放氣)待 篇二：植物組織培養(yǎng)教學實_項目總結(jié) 植物組織培養(yǎng)教學實_項目總結(jié) 作物生產(chǎn)技術(shù)101班 姓名：馬一良 一：目的意義 植物的組織培養(yǎng)是根據(jù)植物細胞具有全能性這個理論，近幾十年來發(fā)展起來的一項無性繁殖的新技術(shù)。植物的組

10、織培養(yǎng)廣義又叫離體培養(yǎng)，指從植物體分離出符合需要的組織.器官或細胞，原生質(zhì)體等，通過無菌操作，在人工控制條件下進行培養(yǎng)以獲得再生的完整植株或生產(chǎn)具有經(jīng)濟價值的其他產(chǎn)品的技術(shù)。狹義是指組培指用植物各部分組織，如形成層.薄壁組織.葉肉組織.胚乳等進行培養(yǎng)獲得再生植株，也指在培養(yǎng)過程中從各器官上產(chǎn)生愈傷組織的培養(yǎng)，愈傷組織再經(jīng)過再分化形成再生植物。 運用植物組織培養(yǎng)技術(shù)的意義：1、快速繁殖優(yōu)良種苗。2、無病毒苗的培養(yǎng)。 3、在育種上的應用4、工廠化育苗。5：保存種質(zhì)資源。6：基因工程的運用 二：工作內(nèi)容 1：學_組培相關知識 2：了解相關的實驗室及其設備 3：試管苗快速繁衍技術(shù) 4：植物脫毒技術(shù) 5

11、：植物組織培養(yǎng)技術(shù)的一般培養(yǎng)方法 6：種質(zhì)立體培養(yǎng) 7：ms培養(yǎng)基的制備 8：滅菌技術(shù) 9：無菌操作技術(shù) 10：試管苗的煉苗與移栽 培養(yǎng)步驟 第一步，將采來的植物材料除去不用的部分，將需要的部分仔細洗干凈，如用適當?shù)乃⒆拥人⑾础０巡牧锨懈畛蛇m當大小，即滅菌容器能放入為宜。置自來水龍頭下流水沖洗幾分鐘至數(shù)小時，沖洗時間視材料清潔程度而宜。易漂浮或細小的材料，可裝入紗布袋內(nèi)沖洗。流水沖洗在污染嚴 重時特別有用。洗時可加入洗衣粉清洗，然后再用自來水沖凈洗衣粉水。洗衣粉可除去輕度附著在植物表面的污物，除去脂質(zhì)性的物質(zhì)，便于滅菌液的直接接觸。當然，最理想的清洗物質(zhì)是表面活性物質(zhì)吐溫。 第二步是對材料的表

12、面浸潤滅菌。要在超凈臺或接種箱內(nèi)完成，準備好消毒的燒杯、玻璃棒、70%酒精、消毒液、無菌水、手表等。用70%酒精浸1030秒。由于酒精具有使植物材料表面被浸濕的作用，加之70%酒精穿透力強，也很易殺傷植物細胞，所以浸潤時間不能過長。有一些特殊的材料，如果實、花蕾、包有苞片、苞葉等的孕穗，多層鱗片的休眠芽等等，以及主要取用內(nèi)部的材料，則可只用70%酒精處理稍長的時間。處理完的材料在無菌條件下，待酒精蒸發(fā)后再剝除外層，取用內(nèi)部材料。 第三步是用滅菌劑處理。表面滅菌劑的種類較多，可根據(jù)情況選取12種使用見表。第四步是用無菌水涮洗，涮洗要每次3min左右，視采用的消毒液種類，涮洗3-l0次左右。無菌水

13、涮洗作用是免除消毒劑殺傷植物細胞的副作用注意：酒精滲透性強，幼嫩材料易在酒精中失綠，所以浸泡時間要短，防止酒精殺死植物細胞。老熟材料，特別是種子等可以在酒精中浸泡時間長一些，如種子可以浸泡5分鐘。升汞的滲透力弱，一般浸泡10分鐘左右，對植物材料的殺傷力不大。漂白粉容易導致植物材料失綠，所以對于幼嫩材料要慎用。在消毒液中加入濃度為0.080.12%的吐溫20或80（一種濕潤劑），可以降低植物材料表面張力，達到更好的消毒效 配制培養(yǎng)基 （ 1 ）愈傷組織誘導培養(yǎng)基： ms 培養(yǎng)基（蔗糖含量為 10 g/l ， 2,4 d 含量為 2 mg/l ，瓊脂10 g/l ）。 （ 2 ）試驗培養(yǎng)基：在 m

14、s 培養(yǎng)基中加入 iaa 和 6ba 。 吲哚乙酸（iaa)先用少量 0.1 mol/l naoh 溶解， 6- 芐基氨基腺嘌呤先用少量 0.1 mol/l hcl 溶解，然后用蒸餾水稀釋，再加入培養(yǎng)基中。 儀器設備 培養(yǎng)室，高壓滅菌鍋，水浴鍋，解剖刀，三角燒瓶（ 100ml ）， 燒杯，量筒，組培瓶，組培蓋或封口膜，棉線，接種箱或超凈工作臺，分析天平，長鑷子，剪刀，容量瓶，移液管，牛皮紙 培養(yǎng)基滅菌 將配好的培養(yǎng)基加入瓊脂加熱溶解，調(diào)至 ph 5.8 ，趁熱分裝于 100 ml組培瓶中，每瓶約 20 ml 。待培養(yǎng)基冷卻凝固后，蓋上組培蓋，或蓋上封口膜并用棉線扎牢，然后在高壓滅菌鍋中 121

15、 （ 1 kg/cm 2 ）下滅菌 20 min 。取出組培瓶放在臺子上，冷卻后備用。接種操作所需的一切用具（如長鑷子、解剖刀、剪刀等）及滅菌水，需同時滅菌。 三：體會 植物組織培養(yǎng)的特點：1、占用空間小，不受地區(qū)、季節(jié)限制。2、培養(yǎng)脫毒作物。3、培養(yǎng)周期短。4、可用組培中的愈傷組織制取特殊的生化制品。5、可短時間大量繁殖，用于拯救瀕危植物。6、可誘導之分化成需要的器官，如根和芽。7、解決有些植物產(chǎn)種子少或無的難題。8、不存在變異，可保持原母本的一切遺傳特征。9、投資少，經(jīng)濟效益高。10、繁殖方式多，試用品種多 11、培養(yǎng)條件可以人為控制。 植物組織培養(yǎng)技術(shù)的前景與發(fā)展：世界上一些先進國家園藝

16、植物組織培養(yǎng)技術(shù)的迅速發(fā)展從60年代就巳經(jīng)開始，并隨著生長、分化規(guī)律性探索逐步深化，到了70年代僅花卉業(yè)就已在蘭花、百合、矮牽牛等二十幾種花卉幼苗生產(chǎn)上建立起大規(guī)模試管苗商品化生產(chǎn)，到1984年世界花卉幼苗產(chǎn)業(yè)的生產(chǎn)總值已達二十億美元，其中美國花卉幼苗市場總值為六億多美元。由于組織培養(yǎng)技術(shù)的應用，加快了花卉新品種的推廣。以前靠常規(guī)方法推廣一個新品種要幾年甚至十多年，而現(xiàn)在快的只要l2年就可在世界范圍內(nèi)達到普及和應用。 我國采用快速繁殖技術(shù)，也使優(yōu)良品種達到迅速的推廣和應用。如廣東切花菊“黃秀風”的應用，使菊花變大，長勢加強，花色鮮艷，抗病力增強，打開了進入香港市場的渠道，使三十多種觀葉植物的推

17、廣很快遍及全國，豐富了人們的生活；并將自然界的幾百個野生金錢蓮品種繁種馴化，培養(yǎng)了一批園林垂直綠化的材料，促進了園林業(yè)的發(fā)展。 植物組織培養(yǎng)也存有一定的困難，首先是繁殖效率與商品需要量的矛盾，有些作 物由于繁殖方法尚未解決，因而無法滿足生產(chǎn)的需要，其次是在培養(yǎng)過程中如何減少變異株的發(fā)生。更重要的是應降低組培苗工廠化生產(chǎn)的成本，只有降低成本，才能更好的投產(chǎn)應用。總之，隨著組織培養(yǎng)這一技術(shù)的發(fā)展及各種培養(yǎng)方法的廣泛應用，使這一技術(shù)在遺傳育種、品種繁育等方面表現(xiàn)出了巨大的潛力，特別是生物工程和工廠化育苗實施以后，它將以新興產(chǎn)業(yè)的面目在技術(shù)革命中發(fā)揮重大作用。篇三：植物組織培養(yǎng)總結(jié) 1 緒論 1.1

18、植物組織培養(yǎng)的一般概念 gamborg曾根據(jù)所培養(yǎng)的植物材料的不同，把組織培養(yǎng)分為懸浮細胞培養(yǎng)、器官培養(yǎng)(胚、花藥、子房、根和莖的培養(yǎng)等)、莖尖分生組織培養(yǎng)和原生質(zhì)體培養(yǎng)。其中愈傷組織培養(yǎng)是一種最常見的培養(yǎng)形式。 培養(yǎng)以外，其他幾種培養(yǎng)形式最終也都要經(jīng)歷愈傷組織才能產(chǎn)生再生植株，此外，愈傷組織還常常是懸浮培養(yǎng)的細胞和原生質(zhì)體的來源。 體。 有關全能性的肯定實驗證據(jù)是steward等人(1958)在以胡蘿卜根組織為外植體的組織培 養(yǎng)實驗中得到的。當他們把栽培胡蘿卜次生韌皮部薄片培養(yǎng)在一種含有椰子汁的固體培養(yǎng)基上時，產(chǎn)生了由簡單的薄壁細胞組成的愈傷組織。把這些愈傷組織轉(zhuǎn)入到成分相同的液體培養(yǎng)基中并

19、不斷振蕩，又產(chǎn)生了由單個細胞和小細胞團組成的懸浮液。 只是一種可能性，由以上的介紹我們可以看到，滿足兩個條件：一是要把這些細胞從植物體其余部分的抑制性影響下解脫出來，也就是 生狀態(tài)的過程。 芽和根是在愈傷組織的不同部位分別獨立形成的，形成的時間可能也不一致，它們?yōu)閱螛O性結(jié)構(gòu)，里面各有維管束與愈傷組織相連，但在不定芽和不定根之間并沒有共同的維管束把二者連在一起，另一種是胚胎發(fā)生方式，即在愈傷組織表面或內(nèi)部形成很多胚狀體，或稱體細胞胚，它們經(jīng)歷的發(fā)育階段與合子胚相似，成熟胚狀體的結(jié)構(gòu)也與合子胚相同。胚狀體是雙極性的，有共同的維管束貫穿兩極，可脫離愈傷組織在無激素培養(yǎng)基上獨立萌發(fā)。 的單細胞來源的培

20、養(yǎng)物。我們稱之為胚狀體。 最根本的特征是具有兩極性，在發(fā)育的早期階段，從其方向相反的兩端分化出莖端和根端，而不定芽或不定根都為單向極性。 胚狀體的維管組織與外植體的維管組織無解剖結(jié)構(gòu)上的聯(lián)系，而不定芽或不定根往往總是與愈傷組織的維管組織相聯(lián)系。 胚狀體的維管組織的分布是獨立的“v”字形，而不定芽的維管組織無此現(xiàn)象。 通過胚狀體途徑產(chǎn)生再生植株有3個顯著的優(yōu)點， 狀體數(shù)目往往比不定芽的數(shù)目多(例如在一個離體培養(yǎng)的煙草花藥上可以產(chǎn)生200個以上的胚狀體);其次，胚狀體形成的速度快，第三，胚狀體結(jié)構(gòu)完整，一旦形成，一般都可直接萌發(fā)形成小植株，因此成苗率較高。 12 植物組織培養(yǎng)的發(fā)展簡史 從那時起到

21、現(xiàn)在，組織培養(yǎng)的發(fā)展過程大致可以分為三個階段： 121 探索階段(二十世紀初至30年代中) 是已經(jīng)高度分化了的細胞，第二，所用的培養(yǎng)基過于簡單，特別是培養(yǎng)基中沒有包含誘導成熟細胞分裂所必需的生長激素，這是因為生長激素在當時還沒有發(fā)現(xiàn)。然而，做為植物組織培養(yǎng)的先驅(qū)者，haberlandt的貢獻不僅在于首次進行了離體細胞培養(yǎng)的實驗，而且在其1902年發(fā)表的“植物離體細胞培養(yǎng)實驗”的報告中，還提出了胚囊液在組織培養(yǎng)中的作用和看護培養(yǎng)法等科學的預見。 養(yǎng)基上培養(yǎng)至成熟，從而證明了胚培養(yǎng)在植物遠緣雜交中利用的可能性； 122 奠基階段(30年代中至50年代末) 導致這兩個發(fā)現(xiàn)的主要是white和gaut

22、heret的實驗。1934年，white由番茄根建立了第 一個活躍生長的無性系，使根的離體培養(yǎng)實驗首次獲得了真正的成功。起初，他在實驗中使用的培養(yǎng)基包含無機鹽、酵母浸出液和蔗糖。后來(1937)，他用3種b族維生素，即吡哆醇，硫胺素和煙酸，取代酵母浸出液獲得成功。 由于這些實驗揭示了b族維生素和生長素的重要意義，又直接導致了1939年gautheret 連續(xù)培養(yǎng)胡蘿卜根形成層獲得首次成功。同年，white由煙草種間雜種的瘤組織， nobecourt由胡蘿卜，也建立了類似的連續(xù)生長的組織培養(yǎng)物。 這些實驗結(jié)果導致了激動素的發(fā)現(xiàn)和以后利用激動素和生長素在組織培養(yǎng)中控制器官 分化工作的開展。 50年代開始以后，植物組織培養(yǎng)的研究日趨繁榮，10年當中引入注目的進展就有以下6 項：1952年，morel和martin首次證實，通過莖尖分生組織的離體培養(yǎng)，可以由已受病毒侵染的大麗花中獲得無毒植株。 1955年，milier等由鯡魚精子dna中分離出一種首次為人所知的細胞分裂素，并把它定 名為激動素(kinetin)?，F(xiàn)在，具有和激動素類似活性的合成的或天然的化合物已有多種，它們總稱為細胞分裂素(cytokin