專題4酶的研究與應(yīng)用.ppt

1、專題4 酶的研究與應(yīng)用,商南縣鹿城中學(xué) 朱建國,生物技術(shù)實(shí)踐,酶是生物催化劑，具有高效、專一和所需反應(yīng)條件溫和的優(yōu)點(diǎn)。目前，酶已廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)療、環(huán)保和化工等各個(gè)行業(yè)，取得了良好的經(jīng)濟(jì)效益。本專題是在必修課的基礎(chǔ)上，通過實(shí)驗(yàn)研究影響酶活性的因素以及酶在日常生活和工業(yè)生產(chǎn)上的應(yīng)用,嘗試?yán)妹富盍y定的一般原理和方法,課題1探討酶在食品制造和洗滌等方面的應(yīng)用 課題1、課題2嘗試制備和應(yīng)用固相化酶 課題3通過本專題的學(xué)習(xí)，學(xué)生應(yīng)該掌握測定酶活力的簡單方法；能夠研究影響酶活性的因素；理解固定化酶和固定化細(xì)胞的原理和方法；探討酶在生產(chǎn)生活中的應(yīng)用,本專題的技術(shù)操作難度不高，涉及的主要技術(shù)歸納如下。

2、1.制備果泥的技術(shù)。 2.海藻酸鈉溶液的制備。 3.固定化酵母細(xì)胞的制備,設(shè)備條件 完成本專題需要配置果汁攪拌器、水浴鍋、注射器等,課題1 果膠酶在果汁生產(chǎn)中的作用,一、課題目標(biāo) 簡述果膠酶的作用；檢測果膠酶的活性；探究溫度和pH對(duì)果膠酶活性的影響以及果膠酶的最適用量；搜集有關(guān)果膠酶應(yīng)用的資料,二、課題重點(diǎn)與難點(diǎn) 課題重點(diǎn)：溫度和pH對(duì)果膠酶活性的影響。 課題難點(diǎn)：果膠酶的最適用量,知識(shí)要點(diǎn)： 1.果膠酶的作用； 2.酶的活性的定義； 3.影響酶活性的因素； 4.果膠酶的用量,在實(shí)際的操作過程中，還需要注意下列事項(xiàng)。 1與其他工業(yè)用酶基本相同，果膠酶的適宜溫度范圍也比較寬泛，因此，可以選用10

3、 作為溫度梯度，設(shè)置的具體溫度為10 、20 、30 、40 、50 和60 等，也可以嘗試以5 作為溫度梯度。 2蘋果、橙子和葡萄等水果都可以作為反應(yīng)物，水果不用去皮。如用蘋果為原材料，一般可按每個(gè)中等大小的蘋果加水100200 mL的比例進(jìn)行攪拌，獲得稀的蘋果泥。 3果泥的用量可以采用5 mL左右，果膠酶的用量可采用質(zhì)量濃度為2%的果膠酶溶液2 mL。 4水浴時(shí)間可以為2030 min。 5過濾果汁時(shí)，漏斗中應(yīng)放置濾紙,6探究pH對(duì)果膠酶活性的影響，只須將溫度梯度改成pH梯度，并選定一個(gè)適宜的溫度進(jìn)行水浴加熱。反應(yīng)液中的pH可以通過體積分?jǐn)?shù)為0.1%的氫氧化鈉或鹽酸溶液進(jìn)行調(diào)節(jié)。 探究果膠

4、酶的用量是建立在探究最適溫度和pH對(duì)果膠酶活性影響的基礎(chǔ)之上的。此時(shí)，研究的變量是果膠酶的用量，其他因素都應(yīng)保持不變。實(shí)驗(yàn)時(shí)可以配制不同濃度的果膠酶溶液，也可以只配制一種濃度的果膠酶溶液，然后使用不同的體積即可。需要注意的是，反應(yīng)液的pH必須相同，否則將影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,課題成果評(píng)價(jià) 本課題評(píng)價(jià)的重點(diǎn)應(yīng)放在對(duì)學(xué)生探究報(bào)告的評(píng)價(jià)上。報(bào)告的主要內(nèi)容應(yīng)該包括：根據(jù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)繪制出的溫度和pH對(duì)果膠酶活性影響的曲線圖；不同果膠酶用量對(duì)出汁量影響的曲線圖（在濃度和體積相同的條件下）；并最終得到果膠酶最適溫度、pH以及果膠酶的最適用量,答案和提示,1為什么在混合蘋果泥和果膠酶之前，要將果泥和果膠酶分裝在

5、不同的試管中恒溫處理？ 提示：將果泥和果膠酶分裝在不同的試管中恒溫處理，可以保證底物和酶在混合時(shí)的溫度是相同的，避免了果泥和果膠酶混合時(shí)影響混合物的溫度，從而影響果膠酶活性的問題。 2在探究溫度或pH的影響時(shí)，是否需要設(shè)置對(duì)照？如果需要，又應(yīng)該如何設(shè)置？為什么？ 提示：需要設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)，不同的溫度梯度之間或不同的pH梯度之間就可以作為對(duì)照，這種對(duì)照稱為相互對(duì)照,3A同學(xué)將哪個(gè)因素作為變量，控制哪些因素不變？為什么要作這樣的處理？B同學(xué)呢？ 提示：A同學(xué)將溫度或pH作為變量，控制不變的量有蘋果泥的用量、果膠酶的用量、反應(yīng)的時(shí)間和過濾的時(shí)間等。只有在實(shí)驗(yàn)中保證一個(gè)自變量，實(shí)驗(yàn)結(jié)果才能說明問題。B同

6、學(xué)對(duì)于變量的處理應(yīng)該與A同學(xué)相同，只是觀察因變量的角度不同。 4想一想，為什么能夠通過測定濾出的蘋果汁的體積大小來判斷果膠酶活性的高低？ 提示：果膠酶將果膠分解為小分子物質(zhì)，小分子物質(zhì)可以通過濾紙，因此蘋果汁的體積大小反應(yīng)了果膠酶的催化分解果膠的能力。在不同的溫度和pH下，果膠酶的活性越大，蘋果汁的體積就越大。 5當(dāng)探究溫度對(duì)果膠酶活性的影響時(shí)，哪個(gè)因素是變量，哪些因素應(yīng)該保持不變？ 提示：溫度是變量，應(yīng)控制果泥量、果膠酶的濃度和用量、水浴時(shí)間和混合物的pH等所有其他條件不變。只有這樣才能保證只有溫度一個(gè)變量對(duì)果膠酶的活性產(chǎn)生影響,練習(xí) 大規(guī)模生產(chǎn)與實(shí)驗(yàn)室制備的主要不同點(diǎn)是： 1.有兩次瞬間高

7、溫滅菌； 2.酶處理的時(shí)間相對(duì)較長； 3.有離心分離步驟和濃縮步驟,課題2 探討加酶洗衣粉的洗滌效果,一、課題目標(biāo) 說出加酶洗衣粉的洗滌原理； 探討溫度對(duì)加酶洗衣粉洗滌的影響； 探討不同種類的加酶洗衣粉對(duì)同一污物和不同污物洗滌效果的區(qū)別,課題重點(diǎn)與難點(diǎn) 課題重點(diǎn)：區(qū)別不同種類的加酶洗衣粉對(duì)同一 污物和不同污物的洗滌效果。 課題難點(diǎn)：實(shí)驗(yàn)過程中各種變量的控制,課題背景分析,本課題探究的是加酶洗衣粉與普通洗衣粉洗滌效果的區(qū)別，以及不同的加酶洗衣粉對(duì)不同污漬洗滌效果的區(qū)別。本課題與學(xué)生的生活比較接近，因此，具有較強(qiáng)的現(xiàn)實(shí)意義，同時(shí)，因?yàn)樘骄康慕Y(jié)果可用于指導(dǎo)日常生活中衣物的洗滌，所以很容易激發(fā)學(xué)生的學(xué)

8、習(xí)興趣。教師在引導(dǎo)學(xué)生開展本課題的研究時(shí)，不要只注重基本原理，而忽視了本課題在現(xiàn)實(shí)生活中的作用,知識(shí)要點(diǎn)： 1.蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶和 纖維素酶的作用； 2.影響酶活性的因素,子課題一 探究不同溫度對(duì)加酶洗衣粉洗滌效果的影響 1.變量的分析和控制 閱讀課本資料一、資料二，結(jié)合已有的生活經(jīng)驗(yàn)可以知道，影響加酶洗衣粉洗滌效果的因素有水溫、水量、水質(zhì)、洗衣粉的用量，衣物的質(zhì)料、大小及浸泡時(shí)間和洗滌的時(shí)間等。在這些因素中，水溫是我們要研究的對(duì)象，而其他因素應(yīng)在實(shí)驗(yàn)中保持不變。 選擇什么樣的水溫進(jìn)行實(shí)驗(yàn)最符合實(shí)際情況呢？這就需要實(shí)驗(yàn)者根據(jù)當(dāng)?shù)匾荒曛械膶?shí)際氣溫變化來確定水溫，這既是確定實(shí)驗(yàn)變量的基本原則

9、，也可以引導(dǎo)學(xué)生將課堂學(xué)習(xí)與現(xiàn)實(shí)生活相聯(lián)系。通常情況下，冬季、春季、秋季和夏季可分別選取5 、15 、25 和35 的水溫，因?yàn)檫@4個(gè)水溫是比較符合實(shí)際情況的，對(duì)現(xiàn)實(shí)也有指導(dǎo)意義。教師可以引導(dǎo)學(xué)生通過實(shí)驗(yàn)分析：“在自然條件下，什么季節(jié)適合使用加酶洗衣粉”，“在什么樣的水溫下不適合使用加酶洗衣粉”，等等,第二個(gè)問題是洗滌方式和材料的選擇。在洗滌方式中有機(jī)洗和手洗兩種方式，應(yīng)考慮其中哪一種比較科學(xué)？哪一種更有利于控制變量？再有，洗衣機(jī)又可以分為半自動(dòng)和全自動(dòng)兩種，相比之下，采用全自動(dòng)洗衣機(jī)比較好，并且應(yīng)該盡量使用同一型號(hào)小容量的洗衣機(jī)，其機(jī)械攪拌作用相同。關(guān)于洗滌材料的選擇也有一些講究。用衣物作實(shí)

10、驗(yàn)材料并不理想，這是因?yàn)樽鳛閷?shí)驗(yàn)材料的衣物，其大小、顏色、潔凈程度等應(yīng)該完全一致，而這并不容易做到；此外，人為地在衣物上增加污物，如血漬、油漬等，也令人難以接受。因此，選用布料作為實(shí)驗(yàn)材料比較可行。在作對(duì)照實(shí)驗(yàn)時(shí)，可以控制布料的大小、顏色以及污物的量，使其相同；同時(shí)，也便于洗滌效果的比較,第三個(gè)問題是水量、水質(zhì)和洗衣粉用量的問題。水的用量和布料的大小是成正比的。做實(shí)驗(yàn)用的布料不易過大，水量不易過多，但應(yīng)該讓布料充分浸泡在水中。水量和洗衣粉的用量可以參考表4-1。實(shí)驗(yàn)時(shí)可根據(jù)表中的數(shù)據(jù)換算出實(shí)際用量。如果在實(shí)驗(yàn)中使用手洗的方法，如課本中圖4-4所示，使用1 000 mL的燒杯作為容器，可以用50

11、0 mL的水，洗衣粉的用量可以用1 g或1.5 g,水量和洗衣粉用量的參考表,洗滌方式 機(jī)洗 手洗 水量 0.5 L 0.5 L 洗衣粉量 0.5 g 1 g或1.5 g,實(shí)驗(yàn)方案的設(shè)計(jì) 教師應(yīng)該要求學(xué)生寫出完整的實(shí)驗(yàn)方案，方案中應(yīng)包括實(shí)驗(yàn)材料、方法步驟等各個(gè)方面。下面的實(shí)驗(yàn)方案供參考： 實(shí)驗(yàn)材料：添加了復(fù)合酶的洗衣粉，大小相同的白棉布4塊（在上面分別滴加4滴同種的植物油，放置至干燥）。 水溫、水質(zhì)及水量：水溫的溫度梯度為5 、15 、25 和35 （其中5 可以通過冰箱冷藏室來控制，其他溫度可以通過水浴控制）；水質(zhì)為自來水；水量為500 mL。 實(shí)驗(yàn)儀器：1 000 mL的燒杯、玻璃棒等,子

12、課題二不同種類的洗衣粉對(duì)同一污漬或不同污漬洗滌效果的比較,比較子課題一與子課題二：在子課題一中，水溫是變量，其他因素在實(shí)驗(yàn)中保持不變；而在子課題二中，水溫則應(yīng)保持不變。在實(shí)施子課題二時(shí)，通常應(yīng)采用當(dāng)?shù)氐某?，如果是冬季水溫過低，就應(yīng)采用水浴的方法，使溫度達(dá)到25 35 。 市場中的洗衣粉有多種類型，應(yīng)選擇不同種類的加酶洗衣粉和普通洗衣粉。污物的選擇也應(yīng)該多樣化，只有這樣才具有實(shí)踐指導(dǎo)意義。表4-2的選擇供參考，表中的“”號(hào)表示可以進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。此外，學(xué)生也可以針對(duì)污漬相同、布料（如化纖或棉布）的不同情況，探究不同種類洗衣粉的洗滌效果,不同種類的洗衣粉對(duì)同一污漬或不同污漬洗滌效果的列表比較,污染物

13、蛋白酶洗衣粉 復(fù)合酶洗衣粉 普通洗衣粉 油漬 血漬 奶漬 果汁漬,課題成果評(píng)價(jià),本課題的評(píng)價(jià)可以分為三個(gè)方面：一是設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)方案是否思路清晰、科學(xué)性和操作性強(qiáng)；二是實(shí)驗(yàn)報(bào)告是否全面，是否涵蓋了本課題所要求達(dá)到的目標(biāo)；三是能否根據(jù)自己的探究成果，結(jié)合生活中的實(shí)際情況，設(shè)計(jì)一份宣傳板報(bào)或有關(guān)加酶洗衣粉的使用說明材料，供家人或本校的教職員工參考。學(xué)生完成課題后，應(yīng)該得出以下三方面的結(jié)論。 1加酶洗衣粉與普通洗衣粉洗滌效果的比較分析。 2各種不同品牌的加酶洗衣粉對(duì)油漬、血漬和奶漬等污物的不同的洗滌效果分析。 3使用加酶洗衣粉時(shí)應(yīng)注意的一些事項(xiàng),答案和提示 1查閱資料，看看普通洗衣粉中包含哪些化學(xué)成分？

14、 提示：普通洗衣粉中通常包含有：表面活性劑、水軟化劑、堿劑、漂白劑等成分，有的洗衣粉中還含有增白劑、香精和色素，以及填充劑等 2在本課題中你打算使用什么方法和標(biāo)準(zhǔn)判斷洗滌效果？ 提示：可在洗滌后比較污物的殘留狀況，如已消失、顏色變淺、面積縮小等，最好能進(jìn)行定量的比較,練習(xí)1.答：列表比較如下。 普通洗衣粉加酶洗衣粉 相同點(diǎn)表面活性劑可以產(chǎn)生泡沫，可以將油脂分子分散開；水軟化劑可以分散污垢；等等。 不同點(diǎn)酶可以將大分子有機(jī)物分解為小分子有機(jī)物，小分子有機(jī)物易于溶于水，從而與纖維分開,2.答：不合適。因?yàn)榻z綢的主要成分是蛋白質(zhì)，它會(huì)被加酶洗衣粉中的蛋白酶分解，損壞衣物,參考資料 1家用洗衣粉的成分

15、及作用 表面活性劑 表面活性劑是洗衣粉的主要成分。表面活性劑有陰離子、陽離子、非離子和兩性離子等四大類，但用于洗滌的表面活性劑則以陰離子和非離子為主。最普通、最傳統(tǒng)的陰離子表面活性劑就是人類使用了幾百年的肥皂（高級(jí)脂肪酸鈉）。合成洗滌工業(yè)問世之后，使用最普遍的是十二烷基苯磺酸鈉，非離子表面活性劑應(yīng)用最廣泛的是聚氧乙烯醚類。 水軟化劑 水軟化劑可防止水中的鈣、鎂離子造成的陰離子表面活性劑失活，提高表面活性劑利用率。三聚磷酸鈉是最為常用的一種水軟化劑，它具有軟化水質(zhì)、分散污垢、緩沖堿劑及抗結(jié)塊性能等特點(diǎn)，三聚磷酸鈉廣泛應(yīng)用于各種洗衣粉中，無磷洗衣粉中不含有三聚磷酸鈉。 堿劑 在適當(dāng)?shù)膲A度下，纖維和

16、污垢可被最大限度地離子化，更易于污垢的水解和分散。一般洗衣粉配方中都含有純堿和硅酸鈉，其中硅酸鈉還具有使污垢顆粒懸浮、防止再沉積的作用,漂白劑 某些洗衣粉中含有過硼酸鈉一類的漂白劑，可以延緩衣物的泛黃程度，但對(duì)衣物有一定的損傷。 酶 洗衣粉中一般添加了蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶和纖維素酶等。酶是一種專一性的生物催化劑，蛋白酶可以催化水解肉、蛋和奶漬，淀粉酶可以催化水解醬、粥等污漬，脂肪酶可以催化水解各類動(dòng)植物油脂和人體皮脂腺分泌物及化妝品污垢，纖維素酶可使織物增艷（新）、去除顆粒性污垢，但過量使用，也能損傷棉、麻等天然纖維織物。 增白劑 絲、棉、毛類等天然纖維的淺色衣物容易變黃，加入增白劑后，它能

17、夠留存在衣物上，吸收陽光中的紫外線，反射出與黃光互補(bǔ)的藍(lán)色光線，從而掩蓋了衣物上的黃色。 香精和色素 改善洗衣粉的氣味和外觀，給人清新愉悅的感受，并掩蓋某些化學(xué)成分的異味,2加酶洗衣粉 加酶洗衣粉就是在合成洗衣粉中，加入0.20.5的酶制劑制成的。在洗衣粉中添加的酶的種類很多，如蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶和纖維素酶等。我國在洗衣粉中添加的酶最主要的是堿性蛋白酶。這種酶能耐堿性條件，而且耐貯存，對(duì)皮膚、衣物沒有刺激和損傷作用。堿性蛋白酶能使蛋白質(zhì)水解成可溶于水的多肽和氨基酸。衣物上附著的血漬、汗?jié)n、奶漬、醬油漬等污物，都會(huì)在堿性蛋白酶的作用下，結(jié)構(gòu)松弛、膨脹解體，稍加搓洗，污跡就會(huì)從衣物上脫落。 使

18、用加酶洗衣粉時(shí)必須注意以下幾點(diǎn)：（1）堿性蛋白酶能使蛋白質(zhì)水解，因此，蛋白質(zhì)類纖維（羊毛、蠶絲等）織物就不能用加酶洗衣粉來洗滌，以免使纖維受到破壞；（2）使用加酶洗衣粉時(shí)，必須注意洗滌用水的溫度。堿性蛋白酶在35 50 時(shí)活性最強(qiáng)，在低溫下或70 以上就會(huì)失效；（3）加酶洗衣粉也不宜長期存放，存放時(shí)間過長會(huì)導(dǎo)致酶活力損失；（4）加酶洗衣粉不宜與三聚磷酸鹽共存，否則酶的活性將會(huì)喪失；（5）添加了堿性蛋白酶的洗衣粉可以分解人體皮膚表面蛋白質(zhì)，而使人患過敏性皮炎、濕疹等，因此，應(yīng)避免與這類洗衣粉長時(shí)間地接觸,課題3 酵母細(xì)胞的固定化,一、課題目標(biāo) 1說出固定化酶和固定化細(xì)胞的作用和原理。 2嘗試制備

19、固定化酵母細(xì)胞，并利用固定化酵母細(xì)胞進(jìn)行酒精發(fā)酵,二、課題重點(diǎn)與難點(diǎn) 1課題重點(diǎn)：制備固定化酵母細(xì)胞。 2課題難點(diǎn)：制備固定化酵母細(xì)胞,三、課題背景分析 課題背景簡單介紹了從酶到固定化酶、再到固定化細(xì)胞的發(fā)展過程。這一過程體現(xiàn)了科學(xué)技術(shù)的發(fā)展是不斷地提出問題和解決問題的動(dòng)態(tài)過程。教師在教學(xué)中，可以參考課題背景提供的素材，聯(lián)系生產(chǎn)實(shí)踐和學(xué)生已有的認(rèn)識(shí)，引導(dǎo)學(xué)生認(rèn)同上述觀點(diǎn)，并進(jìn)而認(rèn)識(shí)到：科學(xué)知識(shí)既來源于科學(xué)實(shí)驗(yàn)，也來源于生產(chǎn)生活實(shí)踐，知識(shí)的學(xué)習(xí)應(yīng)該與生產(chǎn)實(shí)踐相聯(lián)系；人們?cè)谏a(chǎn)實(shí)踐中所發(fā)現(xiàn)的問題能夠促進(jìn)科學(xué)技術(shù)的發(fā)展,一）固定化酶的應(yīng)用實(shí)例 知識(shí)要點(diǎn)： 1.利用固定化酶技術(shù)生產(chǎn)高果糖漿的實(shí)例； 2

20、.固定化酶的反應(yīng)柱示意圖； 3.固定化酶在生產(chǎn)實(shí)踐中的優(yōu)點(diǎn)。 課程標(biāo)準(zhǔn)中要求學(xué)生嘗試制備和應(yīng)用固定化酶，但考慮到制作固定化酶的技術(shù)要求比較高，中學(xué)生難以掌握，因此只要求學(xué)生制作技術(shù)難度較低的固定化酵母細(xì)胞，對(duì)于固定化酶的作用、原理及其在生產(chǎn)中的應(yīng)用，主要是讓學(xué)生通過生產(chǎn)實(shí)例來了解。教師在教學(xué)時(shí)可以采用讓學(xué)生閱讀自學(xué)的方式，并在閱讀之前，布置一些思考題讓學(xué)生思考。例如，在葡萄糖的異構(gòu)反應(yīng)中，如果不將葡萄糖異構(gòu)酶固定化，而是直接使用葡萄糖異構(gòu)酶，會(huì)對(duì)生產(chǎn)過程產(chǎn)生哪些影響,二）固定化細(xì)胞技術(shù) 知識(shí)要點(diǎn)：1.將酶或細(xì)胞固定化的方法； 2.固定化酶和固定化細(xì)胞的聯(lián)系與區(qū)別； 3.固定化酶和固定化細(xì)胞常用

21、的載體材料。 固定化酶和固定化細(xì)胞通常采用包埋法、化學(xué)結(jié)合法和物理吸附法。教師在教學(xué)過程中，可以通過提問的方式，引導(dǎo)學(xué)生認(rèn)識(shí)這三種方法的特點(diǎn)與適用范圍。此外，教師還可以引導(dǎo)學(xué)生思考課本中提出的問題，引導(dǎo)學(xué)生理解固定化細(xì)胞和固定化酶這兩種技術(shù)的區(qū)別與聯(lián)系，辯證地認(rèn)識(shí)這兩種技術(shù)的優(yōu)勢與不足。例如，固定化細(xì)胞操作容易、對(duì)酶活性的影響更小、可以催化一系列的反應(yīng)、容易回收等，但由于大分子物質(zhì)難以自由通過細(xì)胞膜，因此固定化細(xì)胞的應(yīng)用也受到限制,在具體的操作過程中，還應(yīng)該注意下列問題。 （一）酵母細(xì)胞的活化。在缺水的狀態(tài)下，微生物會(huì)處于休眠狀態(tài)。活化就是讓處于休眠狀態(tài)的微生物重新恢復(fù)正常的生活狀態(tài)。酵母細(xì)胞所需要的活化時(shí)間較短，一般需要0.51 h，教師需要提前做好準(zhǔn)備。此外，酵母細(xì)胞活化時(shí)體積會(huì)變大，因此活化前應(yīng)該選擇體積足夠大的容器，以避免酵母細(xì)胞的活化液溢出容器外,二）加熱使海藻酸鈉溶化是操作中最重要的一環(huán)，涉及到實(shí)驗(yàn)的成敗，教師一定要提醒學(xué)生按照教材的提示進(jìn)行操作。海藻酸鈉的濃度涉及到固定化細(xì)胞的質(zhì)量。如果海藻酸鈉濃度過高，將很難形