雙層瓊脂擴散法篩選抗菌活性菌株應用課件_第1頁
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文檔簡介

1、雙層瓊脂擴散法篩選抗菌活性菌株應用,1,一 教學要求,1）學習抗菌活性菌株的篩選方法。 （2）掌握雙層瓊脂擴散法篩選抗菌活性菌株的操作方法,實驗三 雙層瓊脂擴散法篩選放線菌活性菌株的,雙層瓊脂擴散法篩選抗菌活性菌株應用,2,二 實驗原理,抗菌活性菌株是指那些在生長過程中能夠產(chǎn)生抑菌或殺菌活性物質(zhì)的微生物，通常利用抗生素測定的方法給予檢出?？咕股氐臏y定主要有稀釋法、比濁法和擴散法。擴散法是利用藥物在瓊脂中擴散使其周圍的指示菌生長受到抑制而形成抑菌圈，根據(jù)抑菌圈的大小來判斷抗菌活性。擴散法包括了紙片法、管碟法、點滴法等多種方法。本實驗采用的雙層瓊脂擴散法是一種抗菌活性菌株快速簡便的初步篩選方，

2、既直接在瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)供測菌，產(chǎn)生的抗生素在瓊脂中擴散，加入指示菌后測量抑菌圈直徑和菌落直徑比值（Di/Dc)，根據(jù)比值的大小檢出活性菌株,雙層瓊脂擴散法篩選抗菌活性菌株應用,3,三 材料與器材,菌種：鏈霉菌, 枯草桿菌，大腸桿菌. 培養(yǎng)基：高氏1號培養(yǎng)基，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基. 培養(yǎng)皿，移液管等,雙層瓊脂擴散法篩選抗菌活性菌株應用,4,四 實驗步驟,1）倒平板：在無菌培養(yǎng)皿中，倒入高氏一號培養(yǎng)基，凝固后待用。 （2）接種：用接種環(huán)挑取供測菌，在平板上涂抹成直徑約0.3cm的接種點，每個平板接種46點。倒置，28培養(yǎng)7天。 （3）覆蓋指示菌：取熔解并冷卻至約55 的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，加入枯草桿菌或大腸桿菌的菌懸液，搖勻，終濃度約為106細胞/ml。在接種鏈霉菌7d后的平板上，倒入含指示菌的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，每皿1012ml，凝固后30 或37 培養(yǎng)24 h。 （4）抑菌圈大小測定：測量抑菌圈和菌落直徑，根據(jù)抑菌圈和菌落直徑比值（Di/Dc)檢出活性菌株，比值大一般抗菌活性較強,雙層瓊脂擴散法篩選抗菌活性菌株應用,5,五 注意事項,1）供測菌接種時應直徑大小盡量一致 （2）指示菌加入培養(yǎng)液時的溫度不能太高，以免殺死指示菌。溫度也不能太低，以免指示菌覆蓋不均,雙

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