《免疫分析法進(jìn)展》PPT課件

1、免疫分析法進(jìn)展,制作：莊目德,自六十年代競(jìng)爭(zhēng)分析原理提出，定量免疫獲得巨大的進(jìn)展,一、抗體與免疫分析,免疫分析實(shí)際上是一種特殊的試劑分析，起點(diǎn)是抗體成為分析試劑。 1.抗體的結(jié)構(gòu)與功能 抗體泛指與待測(cè)分子特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)分子，包括免疫球蛋白（immunoglobulin）, 受體（receptor）和其他結(jié)合蛋白質(zhì)，主要是免疫球蛋白，常用的是IgG分子,IgG分子由四條以二硫鍵相連的多肽鏈構(gòu)成，有三個(gè)功能區(qū)?？贵w在Fab區(qū)結(jié)合抗原分子，同時(shí)通過(guò)hi區(qū)的轉(zhuǎn)動(dòng)以適應(yīng)不同距離的抗原決定簇。與抗原結(jié)合后，IgG分子構(gòu)象改變，暴露出Fc上的活性位點(diǎn)，從而表現(xiàn)出固定和激活補(bǔ)體以及粘結(jié)單核細(xì)胞等親細(xì)胞反應(yīng)

2、的功能,2抗體作為分析試劑的評(píng)價(jià),抗體的特異性是無(wú)與倫比的不需或只需要簡(jiǎn)單的預(yù)處理。有較高的穩(wěn)定性。這兩點(diǎn)奠定了分析免疫高度靈敏和高度專一的基礎(chǔ)。此外，抗體還有一個(gè)獨(dú)特的性質(zhì)：每個(gè)抗體分子有兩個(gè)抗原的結(jié)合點(diǎn)，即多價(jià)性。然而抗體缺乏高靈敏試劑應(yīng)具備的分析信號(hào)反差。 3傳統(tǒng)免疫分析與標(biāo)記免疫分析,傳統(tǒng)的免疫分析借助抗體的多價(jià)性和激活補(bǔ)體反應(yīng)特性，可設(shè)計(jì)免疫沉淀分析（沉淀法與凝集法）和脂質(zhì)體溶解分析法。 而標(biāo)記分析法則屏棄抗體自身具備的分析性能，依靠在分析體系中引入探針系統(tǒng)進(jìn)行檢測(cè)。提高了靈敏度與檢測(cè)范圍，但帶來(lái)了檢測(cè)相與過(guò)量的標(biāo)記試劑的分離問(wèn)題。所以它又分為勻相免疫分析與非均相免疫分析?，F(xiàn)在一個(gè)成

3、績(jī)卓著的發(fā)展方向是傳統(tǒng)與標(biāo)記的結(jié)合,4標(biāo)記分析的原理：三方式與四環(huán)節(jié),a非競(jìng)爭(zhēng)方式（標(biāo)記抗體）；b。標(biāo)記抗體的競(jìng)爭(zhēng)方式；c。標(biāo)記抗原的競(jìng)爭(zhēng)方式。非均相可用任意方式。均相目前用的是標(biāo)記抗原的分析方式,四環(huán)節(jié)為：抗體生產(chǎn)、標(biāo)記試劑制備、分析方式設(shè)計(jì)、分析信號(hào)檢測(cè)。免疫分析按不同的標(biāo)記物分為放射免疫分析（RIA）、酶免疫分析（EIA）、熒光免疫分析（FIA）、發(fā)光免疫分析（LIA）等,標(biāo)記物的生產(chǎn),二、現(xiàn)代免疫分析概述,1抗體。多克隆抗體是第一代應(yīng)用的抗體。目前廣泛應(yīng)用的是第二代單克隆抗體，性能更優(yōu)越，而且來(lái)源連續(xù)穩(wěn)定。近年來(lái)，第三代抗體基因工程抗體，使人們能在基因水平上設(shè)計(jì)與改造抗體。 2標(biāo)記物與

4、標(biāo)記方法。如下表。常用的是：放射性同位素、酶及其底物、熒光分子、化學(xué)和生物發(fā)光系統(tǒng)。自80年代，放射性同位素標(biāo)記比例下降，酶標(biāo)記占主導(dǎo)地位，生物素-親合素的多重標(biāo)記法已廣泛應(yīng)用,3信號(hào)檢測(cè)。與相應(yīng)的標(biāo)記物對(duì)應(yīng)。主要為吸光光度法、熒光（包括時(shí)間分辨熒光）光度法、發(fā)光檢測(cè)法,三、免疫分析的特點(diǎn)與趨勢(shì),1、基因工程抗體 （1） 從被免疫的動(dòng)物血清中獲得的是多克窿抗體，缺點(diǎn)是抗體不均勻，來(lái)源間斷。單克窿克服上述缺點(diǎn),2） 抗獨(dú)特型抗體。其特點(diǎn)是結(jié)合位置是獨(dú)特型抗體的抗原結(jié)合點(diǎn)，反應(yīng)性質(zhì)類似抗原?？纱婵乖?，且來(lái)源豐富，易標(biāo)記，水溶性好。 （3） 雙特異性抗體。具有兩個(gè)不同的抗原結(jié)合點(diǎn)。一個(gè)Fab端結(jié)合

5、代測(cè)的抗原，另一端可結(jié)合標(biāo)記物。 2應(yīng)用生物素-親合素體系的多重標(biāo)記 小分子探針不存在空阻效應(yīng)，可增加抗體或抗原的標(biāo)記率，提高靈敏度。來(lái)源廣泛易于提取，生物分子易于活化。這標(biāo)記體系,這標(biāo)記體系采用分別標(biāo)記方法（生物素抗體,探針親合素）。 3 時(shí)間分辨熒光免疫分析 用一束超短脈沖的光激發(fā)樣品，樣品中熒光分子受激發(fā)射，但背景熒光短壽命，很快衰減為零，只剩下長(zhǎng)壽命的銪螯合物標(biāo)記的熒光。這就克服了背景熒光的影響。 目前，較好的時(shí)間分辨熒光免疫分析方法有,4 多元免疫分析和環(huán)境組分免疫分 析 由于抗體的特異性，在進(jìn)行多元分析時(shí)得同時(shí)使用多種抗體。有兩種設(shè)計(jì)方法。 第一是多探針標(biāo)記法。較成功的有雙鎂標(biāo)記法和雙熒光探針標(biāo)記分析法。要求是有相容的分析條件和顯著的信號(hào)差別。 第二是多組分定位包被空間分辨分析法。固相非均勻免疫分析，只一種探針，不同的待測(cè)物被分別定位于各自的分析點(diǎn)，經(jīng)過(guò)普通的免疫分析程序，通過(guò)掃描測(cè)定完成理論,上任意多組分的同時(shí)分析。缺點(diǎn)是要在固相上檢測(cè)，且定位包被與檢測(cè)技術(shù)有一定的難度。雙探針標(biāo)記多元環(huán)境組分免疫分析同時(shí)使用兩種探針，濃度測(cè)定不依賴樣品體積,5 自動(dòng)和實(shí)用免疫分析法 包括自動(dòng)化免疫分析儀、免疫分析傳感器、大眾化免疫分析,acs180全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)免疫分析