歐美楊107莖尖脫毒及組培快繁研究

1、歐美楊 107 莖尖脫毒及組培快繁研究歐美楊 107（populus euramericanacv. “Neva”）是中國(guó)林科院張綺文研究員于 1984 年從意大利引入我國(guó)的楊樹新品種, 該品種具有樹形美、 干形直、尖削度小、樹冠窄小、病蟲危害少、生長(zhǎng)迅速等優(yōu)點(diǎn), 已經(jīng)成為了我國(guó)北方地區(qū)廣泛栽培的楊樹優(yōu)良品種之一。近年來, 由于歐美楊 107 長(zhǎng)期采用無性繁殖方式繁殖苗木 , 導(dǎo)致許多真菌、細(xì)菌及病毒的出現(xiàn), 使得歐美楊 107 種性慢慢退化 , 植株抗逆性 , 速生性明顯降低。為恢復(fù)歐美楊 107 優(yōu)良種性 , 并對(duì)其品種進(jìn)行苗木復(fù)壯。本研究便采用歐美楊 107 大田莖段、莖尖、葉片、根及其

2、瓶苗莖段、頂芽、瓶苗葉片為實(shí)驗(yàn)材料,進(jìn)行脫毒實(shí)驗(yàn)及其檢測(cè)比較。還采用選育出的 2 株歐美楊 107 優(yōu)良單株進(jìn)行組培擴(kuò)繁等。 以期建立一套操作簡(jiǎn)單、快速高效且效果穩(wěn)定完善的脫毒快繁技術(shù)體系, 旨在恢復(fù)歐美楊107 良種種性 , 為楊樹良種的長(zhǎng)期推廣具有積極的指導(dǎo)意義。主要結(jié)論如下 :1 、采用帶有頂芽或腋芽的兩株優(yōu)良單株的大田莖段為外植體材料 , 切取長(zhǎng) 1cm且每段帶有一個(gè)頂芽或腋芽的莖段, 接于誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基培養(yǎng),最后得到大量?jī)?yōu)良單株組培苗。2、取經(jīng)組織快繁培養(yǎng)得到的優(yōu)良單株瓶苗莖段進(jìn)行分化增殖正交實(shí)驗(yàn) , 篩選最適宜的分化增殖配方。結(jié)果為1/2MS+6-BA0.45mgL-1+NAA0.

3、05mgL-1+GA1.0mgL-1 的培養(yǎng)基分化增殖效果最好, 最高增殖數(shù)達(dá) 26。3、用優(yōu)良單株繼代增值的不定芽 , 接種于生根培養(yǎng)基 , 篩選最適合的生根配方 , 實(shí)驗(yàn)表明 , 生根效果最理想的培養(yǎng)基為1/2MS+NAA0.02mgL-1+IBA0.05mgL-1, 生根率 100%,平均生根數(shù) 5.9 條。4、歐美楊 107 莖尖脫毒培養(yǎng) , 成功獲得 4 個(gè)脫毒株系。通過采用（ELISA）檢測(cè)技術(shù)對(duì) 4 個(gè)株系進(jìn)行檢測(cè) , 結(jié)果顯示 , 莖尖培養(yǎng)得到的 4 個(gè)株系中楊樹煙草脆裂病毒（TRV）完全脫除 , 被檢測(cè)脫毒株系 OD值均小于病毒臨界值（ CUTOFF）0.2395;而被測(cè) 4

4、 個(gè)株系中楊樹花葉病毒（PV-1）未完全脫除 , 其中一個(gè)株系被檢測(cè)OD值大于病毒臨界值（ CUT OFF）0.2175 。5、為更好脫去歐美楊107 的病毒 , 對(duì)歐美楊 107 采用變溫?zé)崽幚斫Y(jié)合莖尖脫毒 , 熱處理過程中瓶苗生長(zhǎng)迅速 , 同時(shí)伴有葉變黃 , 皺縮、落地現(xiàn)象發(fā)生 , 瓶苗耐受時(shí)間最長(zhǎng)為 24d, 熱處理結(jié)束后被剝離的莖尖生長(zhǎng)快 , 褐化現(xiàn)象明顯減少甚至沒有 , 保存率比較高。將熱處理培養(yǎng)成的幼苗進(jìn)行檢測(cè) , 結(jié)果表明 , 楊樹煙草脆裂病毒（TRV）和楊樹花葉病毒（ PV-1）兩種病毒在被檢測(cè)植株體內(nèi)都不存在 , 被檢測(cè)植株 OD值均小于兩種病毒臨界值 , 說明熱處理與莖尖結(jié)合能夠有效同時(shí)脫除 TRV和 PV-1 兩種病毒。6、歐美楊 107 化學(xué)結(jié)合莖尖處理脫毒, 檢測(cè)結(jié)果說明 , 當(dāng)添加病毒唑15mgL-1 、20mgL-1 、25mgL-1 時(shí)能夠同時(shí)將 TRV和 PV-1 兩種病毒脫除 , 添加這三種濃度被檢測(cè)植株的OD值均小于兩種病毒的臨界值 ; 而低于 15mgL-1 時(shí)兩種病毒均不能脫出。但在實(shí)驗(yàn)過程中 15mgL-1 、20mgL-1 、25mgL-1病毒唑處理對(duì)試管苗生長(zhǎng)均有抑制作用, 濃度越高抑制作用越強(qiáng) ,15mgL-1 繼代多次后 , 抑制作用減輕或降為零 , 瓶苗保存率比較高 , 而 20mgL-1 、