菌種擴(kuò)大和培養(yǎng).ppt

1、2. 生物工業(yè)菌種與種子擴(kuò)大培養(yǎng),2.1 工業(yè)生產(chǎn)常用的微生物及要求 2.2 工業(yè)微生物菌種的衰退、復(fù)壯與保藏 2.3 工業(yè)微生物菌種的選育 2.4 生產(chǎn)菌種的改良 2.5 種子擴(kuò)大培養(yǎng),本節(jié)思考題,1、什么是自然選育？自然選育（自然分離）的一般程序是什么,2. 3工業(yè)微生物菌種的選育,一、微生物菌種的自然選育 在生產(chǎn)過程中，不經(jīng)過人工處理，利用菌種的自然突變而進(jìn)行菌種篩選的過程叫做自然選育,自然選育是一種簡(jiǎn)單易行的選育方法，它可以達(dá)到純化菌種，防止菌種衰退、穩(wěn)定生產(chǎn)、提高產(chǎn)量的目的。但是自然選育的最大缺點(diǎn)是效率低、進(jìn)展慢。因此，經(jīng)常把自然選育和誘變育種交替使用，這樣可以收到良好的效果。 自然

2、選育（自然分離）的一般程序，是把菌種制備成單孢子懸浮液，經(jīng)過適當(dāng)?shù)南♂屢院?，在固體平板上進(jìn)行分離，挑取部分單菌落進(jìn)行生產(chǎn)能力的測(cè)定，經(jīng)反復(fù)篩選，以確定生產(chǎn)能力更高的菌株代替原來的菌株,在過去40年間曾篩選出許多產(chǎn)生新的有用的次級(jí)代謝物的菌種。這些菌種多半是以經(jīng)驗(yàn)式的篩選方法獲得的。大多數(shù)的抗生素均由放線菌綱產(chǎn)生,前述介紹放線菌綱為主的分離方法原理和發(fā)展,選擇性分離方法大致可分為五個(gè)步驟： 含微生物材料的選擇；材料的預(yù)處理；所需菌種的分離；培養(yǎng)；菌落的選擇和純化,小結(jié)：菌種的分離簡(jiǎn)介,一、菌種的來源 根據(jù)資料直接向有科研單位、高等院校、工廠或菌種保藏部門索取或購(gòu)買； 從大自然中分離篩選新的微生物

3、菌種,二、分離思路,新菌種的分離是要從混雜的各類微生物中依照生產(chǎn)的要求、菌種的特性，采用各種篩選方法，快速、準(zhǔn)確地把所需要的菌種挑選出來。 實(shí)驗(yàn)室或生產(chǎn)用菌種若不慎污染了雜菌，也必須重新進(jìn)行分離純化。 有了優(yōu)良的菌種，還要有合適的工藝條件和合理先進(jìn)的設(shè)備與之配合,定方案：首先要查閱資料，了解所需菌種的生長(zhǎng)培養(yǎng)特性。 采樣：有針對(duì)性地采集樣品。 增殖：人為地通過控制養(yǎng)分或培養(yǎng)條件，使所需菌種增殖培養(yǎng)后，在數(shù)量上占優(yōu)勢(shì)。 分離：利用分離技術(shù)得到純種。 發(fā)酵性能測(cè)定：進(jìn)行生產(chǎn)性能測(cè)定。這些特性包括形態(tài)、培養(yǎng)特征、營(yíng)養(yǎng)要求、生理生化特性、發(fā)酵周期、產(chǎn)品品種和產(chǎn)量、耐受最高溫度、生長(zhǎng)和發(fā)酵最適溫度、最適

4、pH值、提取工藝等,三、新種分離與篩選的步驟,菌種篩選主要步驟,調(diào)查研究及查閱充分的資料 設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案 確定采集樣品的生態(tài)環(huán)境 采樣 確定特定的增殖條件 增殖培養(yǎng) 確定特殊的選擇培養(yǎng)基及可能的 定性或半定量快速檢出法 平板分離,原種斜面 確定發(fā)酵培養(yǎng)基礎(chǔ)條件 篩選 初篩（1株1瓶） 復(fù)篩（1株35瓶） 結(jié)合初步工藝條件摸索 再?gòu)?fù)篩（1株35瓶） 35株 單株純種分離 生產(chǎn)性能試驗(yàn) 毒性試驗(yàn)菌種鑒定,一）采樣,1、采樣對(duì)象 以采集土壤為主。 一般園田土和耕作過的沼澤土中，以細(xì)菌和放線菌為主；富含碳水化合物的土壤和沼澤地中，酵母和霉菌較多，如一些野果生長(zhǎng)區(qū)和果園內(nèi)。 采樣的對(duì)象也可以是植物，腐敗物

5、品，某些水域等,從自然界篩選,2、采樣季節(jié)：以溫度適中，雨量不多的秋初為好。 3、采土方式：在選好適當(dāng)?shù)攸c(diǎn)后，用小鏟子除去表土，取離地面5-15cm處的土約10g，盛入清潔的牛皮紙袋或塑料袋中，扎好，標(biāo)記，記錄采樣時(shí)間、地點(diǎn)、環(huán)境條件等，以備查考。為了使土樣中微生物的數(shù)量和類型盡少變化，宜將樣品逐步分批寄回，以便及時(shí)分離,二）增殖培養(yǎng),為了容易分離到所需的菌種，讓無關(guān)的微生物至少是在數(shù)量上不要增加，可以通過配制選擇性培養(yǎng)基，選擇一定的培養(yǎng)條件來控制。 例如碳源利用的控制，可選定糖，淀粉、纖維素，或者石油等，以其中的一種為唯一碳源，那么只有利用這一碳源的微生物才能大量正常生長(zhǎng)，而其它微生物就可能死亡或淘汰。這樣對(duì)下階段的純種分離就會(huì)順利得多,三）培養(yǎng)分離,盡管通過增殖培養(yǎng)效果顯著，但還是處于微生物的混雜生長(zhǎng)狀態(tài)。因此還必須分離，純化。在這步，增殖培養(yǎng)的選擇性控制條件還應(yīng)進(jìn)一步應(yīng)用，而且控制得細(xì)一點(diǎn)，好一點(diǎn)。純種分離的方法有劃線分離法、稀釋分離法,平皿劃線分離法 a. 連續(xù)劃線分離法 b. 分區(qū)劃線分離法,四）篩 選,這一步是采用與生產(chǎn)相近的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件，通過三角瓶的容量進(jìn)行小型發(fā)酵試驗(yàn)，以求得適合于工業(yè)生產(chǎn)用菌種,五）毒性試驗(yàn),自然界的一些微生物是在一定條件下產(chǎn)毒的，將其作為生產(chǎn)菌種應(yīng)當(dāng)十分當(dāng)心，尤其與食品工業(yè)有關(guān)的菌種，更應(yīng)慎重。據(jù)有的國(guó)家規(guī)定，微生物中除啤酒酵母、脆壁酵母、