埃博拉病毒的研究進(jìn)展

1、病毒生物學(xué)姓名：樊政宇學(xué)號(hào)： 201300140019埃博拉病毒的研究進(jìn)展樊政宇摘要 埃博拉病毒是能夠?qū)е氯撕挽`長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物埃博拉出血熱的一種高致病率及高致死率病毒。 埃博拉病毒從發(fā)現(xiàn)以來(lái)已經(jīng)造成了數(shù)次大規(guī)模流行，主要集中在非洲地區(qū)。 2014 年在西非地區(qū)暴發(fā)了歷史上最為嚴(yán)重的埃博拉出血熱疫情， 引起了全球的廣泛關(guān)注。 該病毒在人群中主要通過(guò)接觸傳播， 有癥狀的病人才具有傳染性。 未采取正確防護(hù)措施的醫(yī)護(hù)人員、家庭護(hù)理人員及接觸病人血液、體液，或接觸病人血液、體液等污染的物品，或接觸病例尸體的人是高風(fēng)險(xiǎn)感染人群。本病起病急，早期表現(xiàn)為發(fā)熱、厭食、虛弱無(wú)力等非特異性癥狀，可通過(guò)檢測(cè)病毒核酸、抗原、

2、 抗體等方法確診。目前尚無(wú)批準(zhǔn)上市的特效藥和疫苗，以對(duì)癥和支持治療為主。關(guān)鍵詞 埃博拉病毒 感染途徑 治療 預(yù)防一、歷史背景隨著非洲方面疫情的不斷擴(kuò)大，埃博拉病毒進(jìn)入了我們的視野。這種病毒很早便存在，并給人類(lèi)的生活帶去了不小的損失。1976 年 611 月。蘇丹南部，共發(fā)病 284 例，死亡 151 例，病死率為 53%。1976 年 910 月間在剛果周邊地區(qū)，發(fā)現(xiàn) 318 個(gè)病例， 280 例病死，病死率 88%。85 例因共用注射器感染，繼發(fā)者為醫(yī)護(hù)和病人親屬。 1979 年在蘇丹的恩扎拉地區(qū)，發(fā)病 33 例，死亡 22 例，病死率為 67%。1994 年 6 月在加蓬的明克伯、 馬科庫(kù)

3、地區(qū)及熱帶雨林采金區(qū)，發(fā)病 49 例，死亡 31 例，病死率 63%。1995 年 4 月在剛果基奎特市及其周?chē)貐^(qū)發(fā)生，發(fā)病 315 例，死亡 245 例，病死率 77%。繼發(fā)病例多為治療和護(hù)理人員， 占所有病例的 25%。1996 年 2 月 1997年 1 月在加蓬北部，發(fā)病 60 例，死亡 45 例，病死率 75%。2000 年 8 月 2001 年 1 月在烏干達(dá)北部的古盧、 Masindi 及 Mbarara。共發(fā)病425 例，死亡 224 例，病死率 53%。2001 年 10 月 2002 年 3 月在剛果共和國(guó)和加蓬，共發(fā)病 123 例， 97 例病死，病死率為 79%。20

4、02年 12 月 2003 年 4 月底，剛果共和國(guó)共發(fā)生感染病例 143 例，病死 128 例，病死率 89%。2005 年 46 月，在剛果發(fā)病 12 例，發(fā)現(xiàn) 9 例病人均死亡。 2012 年 7 月 31 日，烏干達(dá)發(fā)現(xiàn)三例感染埃博拉病毒病例。截止當(dāng)?shù)貢r(shí)間8 月 3 日，已確診 53 名感染埃博拉病毒的病例，至少 16 人死亡。另有 312 人被懷疑感染埃博拉病毒而被隔離。2014年，肆虐西非國(guó)家?guī)變?nèi)亞、利比里亞、塞拉利昂的埃博拉病毒蔓延速度驚人。病毒至4 月 1 日 已造成 82 人死亡。截至 4 月 14 日在幾內(nèi)亞已出現(xiàn) 168 名感染者，其中108 人死亡。二、埃博拉病毒簡(jiǎn)介埃

5、博拉又譯作伊波拉病毒，是一種十分罕見(jiàn)的病毒。1976 年，埃博拉病毒第一次出現(xiàn)在中部非洲的扎伊爾( 現(xiàn)為剛果民主共和國(guó))和南蘇丹。之后，在中部非洲共出現(xiàn)過(guò)24 次埃博拉病的流行，均出現(xiàn)在遠(yuǎn)離當(dāng)?shù)爻鞘械钠h(yuǎn)地區(qū)【1】。埃博拉病毒是一種能引起人類(lèi)和靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物產(chǎn)生埃博拉出血熱的烈性傳染病病毒，有很高的死亡率， 在50%至 90%之間，致死原因主要為中風(fēng)、心肌梗塞、低血容量休克或多發(fā)性器官衰竭。埃博拉病毒是一種不分節(jié)段的單股負(fù)鏈RNA 病毒，絲狀病毒科絲狀病毒屬，埃博拉病毒形態(tài)多樣，外有脂蛋白組成的包膜，多呈長(zhǎng)絲狀或桿狀，有分支形、 U形、6 形或環(huán)形，分支形的較常見(jiàn)， 直徑 7090 nm，長(zhǎng)度差異

6、較大，長(zhǎng)0.5 1 400 nm ，感染能力較強(qiáng)的病毒一般長(zhǎng) 665805 nm。毒粒表面有刷狀樣整齊排列的突起，長(zhǎng)約7nm，間隔 10nm，內(nèi)含直徑 40nm的內(nèi)螺旋衣殼，染色觀察內(nèi)部有交叉條紋。病毒基因組為非節(jié)段，線狀，單股負(fù)鏈RNA，全長(zhǎng) 18.9kb ，相對(duì)分子質(zhì)量為 4.2 106，基因組反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的正鏈能編碼巨蛋白、核蛋白、2 個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白 VP30 和 VP35、膜關(guān)聯(lián)蛋白或基質(zhì)蛋白 VP24 和 VP40 、糖蛋白以及埃博拉病毒特有的分泌型小糖蛋白 7 個(gè)蛋白和 RNA聚合酶，每種產(chǎn)物由一種單獨(dú)的 mRNA編碼，基因外的兩末端序列具有保守性和高度互補(bǔ)性，含五聚體 3-UAAUU-

7、5，多數(shù)基因被非保守的基因間隔開(kāi)。三、埃博拉病毒的致病原理埃博拉病毒一般通過(guò)黏膜表面、 擦傷的皮膚或污染的針頭進(jìn)入人體。病毒通過(guò)宿主細(xì)胞表面 C-型凝集素 DC-SIGN或其他受體，首先在局部的巨噬細(xì)胞、樹(shù)突細(xì)胞 (DC)等抗原呈遞細(xì)胞 (APC)中復(fù)制，導(dǎo)致 APC失去原有功能，而不能表達(dá)共刺激分子或激活T 細(xì)胞。 VP24與 VP35可阻斷 I 型干擾素的抗病毒作用。已知這兩種蛋白是通過(guò)阻斷宿主細(xì)胞核積聚 STAT1與損壞 IRF-3 、IRF-7 而發(fā)揮作用。 VP35還可阻止干擾素產(chǎn)生所需的依賴(lài)雙鏈 RNA的蛋白激酶活化。由于 DC失能，臨床上出現(xiàn)大量淋巴細(xì)胞凋亡 【3】。埃博拉病毒感

8、染單核細(xì)胞與巨噬細(xì)胞后，大量促炎癥因子釋放， 包括 白細(xì)胞介素 1、1L-2 、1L-6 、1L-10 、腫瘤壞死因子 、單核細(xì)胞趨化蛋白1 等【4】。細(xì)胞因子的大量釋放又可吸引更多 APC至感染部位并增加病毒復(fù)制， 最后出現(xiàn)晚期病變，包括內(nèi)皮細(xì)胞通透性增加、 血管漏出增加， 使感染病毒的 APC 播散至全身多個(gè)器官，包括次級(jí)淋巴器官、肝、肺等。四、埃博拉病毒的類(lèi)型已確定埃博拉病毒分 5 個(gè)亞型，即埃博拉 - 扎伊爾型、埃博拉 - 蘇丹、埃博拉 - 萊斯頓型、埃博拉 - 科特迪瓦型和埃博拉 - 本迪布焦型。不同亞型具有不同的特性， 埃博拉 - 扎伊爾型和埃博拉 - 蘇丹型對(duì)人類(lèi)和非人類(lèi)靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)

9、物的致病性和致死率很高；埃博拉 - 萊斯頓型對(duì)人類(lèi)不致病，對(duì)非人類(lèi)靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物具有致死性作用；埃博拉 - 科特迪瓦型對(duì)人類(lèi)有明顯的致病性，但一般不致死，對(duì)黑猩猩的致死率很高。1、埃博拉病毒扎伊爾型扎伊爾埃博拉毒有高達(dá) 90%的致死率，在流行地區(qū)死亡率 1976 年為 88%、1977 年為 100%、1994 年為 59%、1995 年為 81%、1996 年為 73%、2001 年至 2002 年為 80%，2003 年則是 90%，2007 年平均為83%。1976 年 8 月 26 日首次于剛果北邊城鎮(zhèn)爆發(fā)， 首位個(gè)案紀(jì)錄為 44 歲教師 Mabalo Lokela ，當(dāng)時(shí)他的高燒被診斷為

10、疑似瘧疾感染，并且接受奎寧注射治療， 這位病人每日回醫(yī)院就診觀察， 一周后卻惡化為無(wú)法控制的嘔吐， 帶血腹瀉、頭痛、暈眩伴隨呼吸困難， 并開(kāi)始自口、鼻、直腸等多處開(kāi)始出血，于 9 月 18 日過(guò)世，病程僅約 2 周。不久之后，更多病患帶著相似的癥狀就醫(yī)，包括發(fā)燒、頭痛、肌肉痛、關(guān)節(jié)痛、疲倦、惡心、暈眩等。這些常發(fā)展成帶血腹瀉、嚴(yán)重嘔吐和多發(fā)性出血，初期傳染可能肇因于重復(fù)使用用過(guò)卻未消毒之針筒， 后續(xù)傳染主要?jiǎng)t是照顧病患時(shí)， 在沒(méi)有適當(dāng)安全措施的情況下受到病毒侵襲或傳統(tǒng)埋葬前置作業(yè)的清洗過(guò)程。2. 埃博拉病毒蘇丹型蘇丹埃博拉病毒在 1976 年首次在蘇丹棉花廠工人身上被發(fā)現(xiàn)。研究人員指出，這名工

11、人應(yīng)該是在工廠中或附近接觸到到帶原生物宿主，但在檢測(cè)過(guò)工廠附近的動(dòng)物及昆蟲(chóng)后仍一無(wú)所獲， 帶原宿主至今仍是未知。2004年 5 月，蘇丹 Yambio 縣回報(bào) 20 個(gè)病例，并有五人死亡。疾病管制局在幾天后確認(rèn)這些病例為蘇丹埃博拉，鄰近國(guó)家例如烏干達(dá)、剛果皆增加邊界的守衛(wèi)，以控制疫情。1976 年蘇丹埃博拉的平均死亡率為 53%，1979 年為 68%，2000 年至 2001 年間為 53%，平均死亡率為 53.76%。3. 埃博拉病毒雷斯頓型1989 年 11 月首次在一群由菲律賓進(jìn)口至美國(guó)維珍尼亞州雷斯頓的食蟹猴身上發(fā)現(xiàn)。 此一病毒對(duì)猴子有很高的致死率，但對(duì)人類(lèi)并沒(méi)有致命性。1990 年

12、 2 月，雷斯頓埃博拉病毒再次在雷斯頓、德州及菲律賓爆發(fā)。 1992 年及 1996 年，更多病例在意大利托斯卡納和德州發(fā)現(xiàn)。所有感染的猴只出現(xiàn)與猿猴出血熱類(lèi)似的癥狀。在這兩次爆發(fā)中， 沒(méi)有任何人類(lèi)受到感染。4. 埃博拉病毒科特迪瓦型科特迪瓦埃博拉病毒這個(gè)品種首先在科特迪瓦的塔伊國(guó)家公園中被發(fā)現(xiàn)。在 1994 年 11 月 1 日，二只黑猩猩尸體在森林里被發(fā)現(xiàn)。檢驗(yàn)人員發(fā)現(xiàn)在心臟中的血液是棕色的且已液化（通常尸體中的血液在死亡十幾小時(shí)之后就應(yīng)該完全凝固），內(nèi)臟外觀并沒(méi)有明顯痕跡，肺中充滿血液。 從黑猩猩身上采取到的組織顯示，此病毒與蘇丹埃博拉及 1976 年爆發(fā)的扎伊爾埃博拉十分相似。1994

13、 年后，更多死亡的黑猩猩被發(fā)現(xiàn)， 科學(xué)家用許多方法對(duì)病毒進(jìn)行檢測(cè)。感染的來(lái)源被認(rèn)為是一只被黑猩猩捕食且?guī)в胁《镜酿嗪铩?. 埃博拉病毒本迪布焦型美國(guó)國(guó)家傳染病和過(guò)敏病研究所的美國(guó)科學(xué)家彼得博士認(rèn)為， 這可能是因?yàn)榘２├《景l(fā)生了變異， 變得比之前更容易傳播而引起的感染。五、埃博拉病毒的感染途徑埃博拉病毒可通過(guò)多種途徑感染人： （1）野禽 -人途徑，如食用或【5】接觸攜帶埃博拉病毒的果蝠；（ 2）靈長(zhǎng)類(lèi) -人途徑，如接觸感染的黑猩猩；（3）人-人注射途徑，如通過(guò)未滅菌的注射器和針頭（ 4）人-人接觸途徑，埃博拉患者是“生產(chǎn)埃博拉病毒的工廠” ，患者每毫升血中可有數(shù)億埃博拉病毒顆粒， 這些顆?？纱?/p>

14、在于患者的唾液、 尿液、糞便、精液、陰道分泌液、黏膜和破損的皮膚； （5）患者用品途徑，如衣物、被褥和毛巾等；（6）殯葬儀式途徑，在一些非洲的傳統(tǒng)葬禮中，參加者有接觸死者的習(xí)俗，如清洗或觸摸死者。六、埃博拉病的臨床表現(xiàn)埃博拉病是一種嚴(yán)重的急性病毒性疾病。 感染埃博拉病毒后可不發(fā)病或呈輕型，非重癥患者發(fā)病后 2 周逐漸恢復(fù)。埃博拉病起病急，最初表現(xiàn)為流感樣癥狀， 即突然發(fā)熱、極度虛弱、厭食、胸痛、肌痛、頭痛、畏寒、惡心、結(jié)膜充血及相對(duì)緩脈。 2 -3 d 后可有嘔吐、 腹痛、腹瀉 (多為血便 )等表現(xiàn)，半數(shù)患者有咽痛及咳嗽。 病后 4 5 d 進(jìn)入極期，患者可出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)的改變， 如頭痛、意識(shí)混

15、亂、譫妄、嗜睡、昏迷等，重癥患者在發(fā)病數(shù)日可出現(xiàn)咯血，鼻、口腔、結(jié)膜下、 胃腸道、陰道及皮膚出血或血尿。第 10 天為出血高峰， 50%以上的患者出現(xiàn)嚴(yán)重的出血， 部分病例還可表現(xiàn)為心、 肝臟等器官開(kāi)始糜爛成半液體的塊狀，并可因出血、肝腎衰竭及致死性并發(fā)癥而死亡。 90% 的死亡患者在發(fā)病后 12 d 內(nèi)死亡?；颊咦铒@著的表現(xiàn)為體位性低血壓、休克和面部水腫，還可出現(xiàn) DIC 、電解質(zhì)和酸堿平衡失調(diào)等。急性期并發(fā)癥有心肌炎、 細(xì)菌性肺炎等。由于病毒持續(xù)存在于精液中，也可引起睪丸炎、 睪丸萎縮等遲發(fā)癥。 在病程第 5 至 7 天可出現(xiàn)麻疹樣皮疹、斑丘疹，通常好發(fā)于面部、臀部、軀干或手臂，后來(lái)幾乎達(dá)

16、整個(gè)身體，數(shù)天后消退并脫屑，部分患者可較長(zhǎng)期地留有皮膚的改變。雖然發(fā)熱、乏力和厭食是描述最為頻繁的癥狀， 但并不是所有埃博拉病患者都有發(fā)熱癥狀， 許多患者晚期并無(wú)發(fā)熱癥狀， 這意味著不發(fā)熱也不能排除埃博拉病毒的感染。 埃博拉患者通常因休克、 多器官衰竭死亡，因出血死亡者不足 50%【 6】。肝損傷的特征是肝細(xì)胞壞死、肝大和天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、堿性磷酸酶和 -谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶升高。此外，脾大、急性腎小管壞死、腎衰竭、低鉀血癥、肺出血 (咯血 )發(fā)展為局灶性肺不張，并伴有間質(zhì)性肺炎也是常見(jiàn)【 7】的并發(fā)癥。七、埃博拉病的治療1. 抗病毒藥物抗流感病毒藥物 -法匹拉韋 (favipi

17、ravir)(T-705 ，商品名 Avigan)是針對(duì)埃博拉病毒病研究進(jìn)展較快的抗病毒藥物。 T-705 作為嘌呤類(lèi)似物，可引發(fā) RNA 病毒復(fù)制過(guò)程紊亂，從而阻礙病毒增殖 【 8】。實(shí)驗(yàn)證實(shí)， T-705 還能抑制黃病毒科的西尼羅病毒、黃熱病毒和口蹄疫病毒等，因此，對(duì)于同屬 RNA 病毒的埃博拉病毒可能有效。該藥已在日本批準(zhǔn)上市用于治療流感， 目前在美國(guó)通過(guò)了期臨床試驗(yàn)。 廣譜抗病毒藥物 BCX4430，屬于小分子的腺苷類(lèi)似物，被整合進(jìn)病毒 RNA 復(fù)制過(guò)程后，使得病毒 RNA 空間構(gòu)型改變， 從而嚴(yán)重影響后續(xù)轉(zhuǎn)錄、翻譯過(guò)程。 BCX4430 對(duì)馬爾堡病毒和扎伊爾型埃博拉病毒效果明顯，目前

18、該藥已經(jīng)進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段。廣譜抗病毒藥物三氮唑核苷 (ribavirin ，利巴韋林 )，通過(guò)干擾病毒 mRNA 的帽化阻礙病毒復(fù)制，用于治療布尼亞等病毒引起的出血熱。由于缺乏針對(duì)絲狀病毒的體內(nèi)、體外實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，加上嚴(yán)重的副作用，不推薦利巴韋林用于治療埃博拉病毒病。2. 生物治療目前針對(duì)埃博拉病毒病的治療主要是基于混合多種抗體的雞尾酒療法等生物治療和支持治療。其中ZMapp 是由美國(guó)與加拿大聯(lián)合研制的藥物， 包含 3 種人源化的單克隆抗體， 通過(guò)植物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)(煙草屬 )表達(dá)生產(chǎn)。屬于優(yōu)化的雞尾酒療法【 9】，包含針對(duì)埃博拉病毒感染有保護(hù)效果的單克隆抗體組合MB003 和 ZMAB 中最有效的

19、成分。 ZMapp 在非人類(lèi)靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中效果顯著，并且在兩位在西非感染埃博拉病毒的美國(guó)醫(yī)務(wù)人員和一位西班牙傳教士的治療中使用， 其中 2 名美國(guó)患者的臨床癥狀得以改善，西班牙患者死亡。然而，目前不能確定是否因?yàn)槭褂?ZMapp 而使 2 位美國(guó)患者康復(fù)，其安全性和有效性尚待進(jìn)一步臨床試驗(yàn)驗(yàn)證。 同時(shí)，ZMapp 的供應(yīng)量有限，規(guī)?；a(chǎn)雖處于準(zhǔn)備階段，仍需時(shí)間。此外，人鼠嵌合單克隆抗體 (c13C6，h-13F6 和 c6D8)的混合株 MB-003，可以對(duì)恒河猴發(fā)揮有效的保護(hù)作用，但尚未在人類(lèi)證實(shí)有效。另外， TKM-Ebola是一種基因治療藥物，屬siRNA，專(zhuān)門(mén)針對(duì)埃博拉病毒相關(guān)基因

20、VP24和 VP35、RNA依賴(lài)的 RNA聚合酶，通過(guò) RNA干擾，使得相關(guān)蛋白的RNA被沉默封閉，達(dá)到阻止病毒增殖的目的。目前正處于臨床I 期試驗(yàn)?；?RNA的治療，目前主要針對(duì)扎伊爾型埃博拉病毒，在嚙齒類(lèi)和非人類(lèi)靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物有效。該方法需要限定特定型別的埃博拉病毒，但暴發(fā)早期常無(wú)法確定病毒型別。另外，這類(lèi)藥物主要經(jīng)靜脈給藥， 對(duì)于偏遠(yuǎn)地區(qū)的治療面臨物流的挑戰(zhàn)。輸注患者恢復(fù)期血漿提供中和抗體的治療，尚未取得滿意療效， 或有助于減輕病毒載量，若結(jié)合其他治療方式，或許有效。3. 支持療法在非人靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物感染扎伊爾型埃博拉病毒的實(shí)驗(yàn)中，使用源于絲蟲(chóng)的抗凝蛋白rNAPc2，可提供 33%的有效性 【

21、10】。rNAPc2主要作用于外源性凝血途徑。 研究表明，活化蛋白 C在恒河猴中的保護(hù)作用與rNAPc2一致。該類(lèi)藥物已經(jīng)獲批用于臨床，可在應(yīng)急處置時(shí)貯備。八、埃博拉病的預(yù)防與控制當(dāng)埃博拉病毒病在人群中暴發(fā)流行時(shí)， 醫(yī)院不僅是發(fā)現(xiàn)病例的前沿陣地，也是感染控制的重點(diǎn)場(chǎng)所。 歷史上已有過(guò)多次在醫(yī)院內(nèi)發(fā)生暴發(fā)流行的慘痛教訓(xùn)。 醫(yī)院盡管存在感染的高風(fēng)險(xiǎn)， 但這種風(fēng)險(xiǎn)可防可控。 1995 年剛果民主共和國(guó)暴發(fā)疫情前期出現(xiàn)了大量醫(yī)護(hù)人員感染，但后期采取病例隔離和個(gè)人防護(hù)等措施后， 就沒(méi)有醫(yī)院內(nèi)的感染病例，這說(shuō)明通過(guò)恰當(dāng)防護(hù)措施和感染控制， 可有效降低和控制醫(yī)院內(nèi)的感染風(fēng)險(xiǎn) 【11】。感染控制應(yīng)貫穿每一個(gè)醫(yī)

22、療環(huán)節(jié)，包括確診前對(duì)疑似病例隔離、疑似病例和確診病例分類(lèi)管理、 臨床標(biāo)本采集、運(yùn)輸、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)及標(biāo)本滅活處理等， 每個(gè)環(huán)節(jié)都要根據(jù)暴露風(fēng)險(xiǎn)穿戴相應(yīng)個(gè)人防護(hù)設(shè)備， 并定期對(duì)器械和環(huán)境消毒。 感染控制并不一定要求有最先進(jìn)的設(shè)備， 在物資有限條件下也可有效開(kāi)展。 WHO 和美國(guó) CDC【12】開(kāi)發(fā)了指導(dǎo)非洲醫(yī)療機(jī)構(gòu)實(shí)施感染控制的手冊(cè)，該手冊(cè)充分利用了常見(jiàn)的低成本物品，如家用漂白劑、水、棉布及塑料布等，其有效性已在實(shí)際疫情控制中得到驗(yàn)證。九、疫苗的研發(fā)傳統(tǒng)的疫苗來(lái)源于經(jīng)高溫、福爾馬林及 - 射線滅活的病毒，這類(lèi)滅活病毒的埃博拉病毒疫苗在嚙齒類(lèi)動(dòng)物和靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物中沒(méi)有明顯保護(hù)作用。目前，大量的病毒或非病毒

23、載體被用于埃博拉病毒疫苗的構(gòu)建，如 DNA質(zhì)粒、具有復(fù)制或缺乏復(fù)制功能的活病毒載體等。帶有埃博拉病毒抗原基因的疫苗在接種者體內(nèi)表達(dá)大量的病毒抗原蛋白，刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性抗體，從而預(yù)防病毒感染【13】。1.DNA疫苗將經(jīng)過(guò)篩選的埃博拉病毒基因如 GP、NP等連接到 DNA質(zhì)粒載體中，構(gòu)成表達(dá)病毒蛋白的質(zhì)粒，用注射器、基因槍或電穿孔等方式將重組 DNA質(zhì)粒經(jīng)肌肉注射輸入患者體內(nèi)， 輸入的重組 DNA在患者細(xì)胞中表達(dá)相應(yīng)抗原，從而誘導(dǎo)機(jī)體的免疫反應(yīng)，產(chǎn)生抗體和細(xì)胞毒性 T 細(xì)胞去清除病毒的感染。 這種 DNA疫苗制作工藝簡(jiǎn)單， 經(jīng)濟(jì)且易于存儲(chǔ)，同時(shí)不會(huì)誘發(fā)針對(duì)載體的免疫反應(yīng)，但在體實(shí)驗(yàn)表明，埃博拉病

24、毒感染后的靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物注射此類(lèi)疫苗后再接種埃博拉病毒， 存活率沒(méi)有明顯提高。2. 活載體疫苗活載體疫苗為將編碼病毒蛋白的基因插入無(wú)致病性或減毒活病毒載體中構(gòu)成的疫苗。 此類(lèi)疫苗主要有重組水泡性口炎病毒疫苗， 重組副流感病毒疫苗和重組腺病毒。 其中重組 5 型血清型腺病毒（rAD5）為首個(gè)對(duì)感染埃博拉病毒的非靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物有保護(hù)作用的疫苗【 14】。用活病毒為載體表達(dá)埃博拉病毒 GP蛋白的優(yōu)點(diǎn)是疫苗接種人體，接近于自然感染， 埃博拉病毒蛋白可在轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中表達(dá)， 但人體血清中含有的 rAD5 抗體可能影響活載體疫苗的體內(nèi)效價(jià)。3.DNA配合腺病毒（ DNA/Adv）增強(qiáng)疫苗此類(lèi)疫苗是繼 DNA疫苗和活

25、病毒載體疫苗后研發(fā)的又一新型疫苗，如重組 5 型血清型腺病毒（ rAD5）與 DNA疫苗（SUDVGP，TAFVGP）重組疫苗。首先向動(dòng)物體內(nèi)接種 DNA疫苗使機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng)， 隨后用腺病毒載體疫苗加強(qiáng)免疫， 結(jié)果發(fā)現(xiàn)小鼠抗體效價(jià)較單用 DNA疫苗增長(zhǎng) 10-100 倍。在恒河猴中進(jìn)行進(jìn)一步試驗(yàn)，結(jié)果顯示，接種疫苗的猴子體內(nèi)針對(duì) GP蛋白的特異性抗體及抗原特異性+CD4和 CD8T細(xì)胞水平明顯升高，接種疫苗的 4 只猴子在感染埃博拉病毒 2 周內(nèi)均存活，而接種安慰劑的 4 只猴子死亡。此疫苗目前已進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段。參考文獻(xiàn)【 1】Fauci AS.Ebola -Underscoring th

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