無菌藥品包裝容器的密封性驗證方案.

1、 生效日期修訂日期1.概述：無菌藥品的容器應能在整個有效期內有完好的密封性，防止微生物的浸入。藥品包材的設計及選擇要考察相互的配合情況。無菌容器/密封件系統的完整性測試可以在培養(yǎng)基灌裝時進行。2.目的：評估產品包裝的密封性，以充分保護產品在儲存期的無菌狀態(tài)。3.依據：藥品生產質量管理規(guī)范2010 修訂版：附錄 1：第九十五條 無菌藥品包裝容器的密封性應經過驗證，以避免產品遭受污染。4.責任：質量部、生產部對本驗證負責。5.微生物浸入試驗法驗證密封完整性：往產品容器內灌入培養(yǎng)基并按照常規(guī)方式壓塞封蓋，滅菌后冷卻備用。將冷卻后的容器倒置并將瓶口完全浸沒于高濃度（10 cfu/ml）的運動性菌液中，

2、4 小時后，將容器外表面消8毒并培養(yǎng)，看是否有挑戰(zhàn)性細菌在容器內生長。多準備一些灌裝培養(yǎng)基的樣品，在與產品相同地的貯存條件下貯存。在貯存的一定時間間隔（12,24，36 和 48 個月等），取出部分樣品，進行微生物浸入試驗，以確定密封系統在貯存期內的有效性。6.范圍：西林瓶、膠塞及鋁蓋的密封性驗證，共有 10ml 及 2ml 兩種規(guī)格。7.用品：膽鹽乳糖培養(yǎng)基 銅綠假單胞菌（atcc 9027） 乙酸 異丙醇8.實施： 8.1 制備樣品：取已經按相應清洗滅菌操作規(guī)程制備好的西林瓶、膠塞及鋁塑組合蓋 150 套，西林瓶內灌裝入已滅菌的膽鹽乳糖培養(yǎng)基，在正常生產線上抽真空、壓塞、軋蓋。將每一試樣品

3、倒轉，使培養(yǎng)基與西林瓶內表面及膠塞充分接觸，在 3035豎立倒置培養(yǎng) 14 天，培養(yǎng)基應澄清，無菌落生長。8.2 制備微生物菌懸液：從銅綠假單胞菌（atcc 9027）的新鮮斜面上取培養(yǎng)物，分別接入含6ml 無菌膽鹽乳糖培養(yǎng)基的試管中，在 3035下培養(yǎng) 1824h；將每管的培養(yǎng)物分別轉入含 600ml 相同培養(yǎng)基的容器內，于3035下培養(yǎng)（約24 小時），在培養(yǎng)結束時，能明顯見容器內培養(yǎng)基出現渾濁，計數，當菌落數大于 10 cfu/ml 時，停止培養(yǎng)，待用（在微生物侵入試驗開始，所8用菌懸液濃度（活菌數）必須達到 110 cfu/ml。）。88.3 營養(yǎng)試驗：8.3.1 該實驗目的是確認膽鹽

4、乳糖培養(yǎng)基對銅綠假單胞菌促菌生長能力。所有樣品培養(yǎng) 14 天均不長菌時，從上述 8.1 試驗樣品中隨機取 20 個帶蓋試驗樣品，每個試驗樣品內接種 100cfu 銅綠假單胞菌。在 3035下培養(yǎng) 7 天，或培養(yǎng)至所有試樣品都呈陽性結果。8.3.2 結果判斷：若 7 天內，所有接種銅綠假單胞菌的試驗樣品中，微生物生長良好，則容器內培養(yǎng)基的促菌生長能力可判為合格。使用革蘭染色鏡檢，置于紫外燈下，培養(yǎng)基呈藍綠色熒光，則確認試驗樣品容器內生長的菌為接入的銅綠假單胞菌，即為陽性。若 7 天內，所有接種銅綠假單胞菌的試樣品中，微生物生長條件不好或經鑒別后受其它菌種污染，則試驗失敗，需重新作營養(yǎng)試驗。8.4

5、 微生物侵入試驗： 8.4.1 將銅綠假單胞菌（atcc 9027）的菌懸液倒入適當的容器內，從上述8.1 樣品中取 100只試驗樣品倒置于菌懸液中,使試樣容器內的培養(yǎng)基充分接觸封口內表面，樣品的頸部及封口的外表面應完全浸泡在菌懸液中（如圖 1 所示）。圖 1 微生物挑戰(zhàn)試驗示意圖8.4.2 將試驗樣品在菌懸液中持續(xù)浸泡約 4h 后，取出試驗樣品，擦干容器外殘余的菌懸液，其外表用含 0.5%過乙酸的 70%異丙醇消毒五分鐘（注意不要破壞其密封口），放入塑料袋中，置 3035下培養(yǎng) 7 天。檢查試驗樣品內微生物生長情況，有生長記作“”，無生長記作“。”8.4.3 陽性對照： 陽性對照試驗樣品不經

6、菌懸液浸泡，其外表用含 0.5%過乙酸的 70%異丙醇消毒五分鐘后，接種 10100cfu 銅綠假單胞菌，進行陽性對照試驗。8.5 結果評價要求:營養(yǎng)試驗和陽性對照試驗都合格，微生物侵入試驗才有效。挑戰(zhàn)試驗中如有長菌，需記錄長菌的瓶數并須按下述要求作進一步調查。 仔細去除微生物生長的容器的蓋和塞，檢查容器封口是否有缺損，造成微生物侵入。將觀察到試驗樣品封口的缺陷，采用拍照或其他適當方式詳細記錄。如果任何挑戰(zhàn)試驗中長菌的試驗樣品不是由于容器封口明顯的物理性缺損所致，容器密封性挑戰(zhàn)試驗作失敗論。9 注意事項：微生物侵入試驗用菌懸液經滅菌后丟棄。在培養(yǎng)期內，當試驗中發(fā)現任何帶蓋試樣品長菌時，則試驗無效，須棄去全部試樣