自身抗體的檢測

1、 抗核抗體（抗核抗體（ANA）的檢測與臨床應(yīng)用）的檢測與臨床應(yīng)用 v 抗核抗體的定義抗核抗體的定義 v 傳統(tǒng)定義：傳統(tǒng)定義：針對細(xì)胞核成分抗原總稱。 v 廣義定義：廣義定義：針對細(xì)胞內(nèi)所有抗原成分的 自身抗體的總稱。對ANA的理解不再局 限于核成份，而是指核質(zhì)和核蛋白的總 稱。 ANA測定原理和方法：測定原理和方法： v間接免疫熒光法間接免疫熒光法（IIF):現(xiàn)多以現(xiàn)多以Hep-2細(xì)胞（人喉細(xì)胞（人喉 癌上皮細(xì)胞）為底物（癌上皮細(xì)胞）為底物（Ag)，其以核質(zhì)豐富而極，其以核質(zhì)豐富而極 大地提高了大地提高了ANA檢測的陽性率和滴度。檢測的陽性率和滴度。 v是系統(tǒng)性紅斑狼瘡（是系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SL

2、E）的）的標(biāo)準(zhǔn)篩選試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)篩選試驗(yàn)。 v我們實(shí)驗(yàn)室采用歐蒙熒光檢測系統(tǒng)，將我們實(shí)驗(yàn)室采用歐蒙熒光檢測系統(tǒng)，將1:1001:100作作 為血清起始稀釋度，所以如果是低滴度的為血清起始稀釋度，所以如果是低滴度的1:1001:100 陽性，只能視為一個(gè)臨界可疑值，臨床意義不大。陽性，只能視為一個(gè)臨界可疑值，臨床意義不大。 vANAANA作為自身免疫性結(jié)締組織病的篩選試驗(yàn)必須作為自身免疫性結(jié)締組織病的篩選試驗(yàn)必須 強(qiáng)調(diào)高滴度。強(qiáng)調(diào)高滴度。 ANA的靶抗原分布的靶抗原分布 整個(gè)細(xì)胞，包括細(xì)胞核、細(xì)胞整個(gè)細(xì)胞，包括細(xì)胞核、細(xì)胞 漿、細(xì)胞骨架、細(xì)胞分裂周期蛋白漿、細(xì)胞骨架、細(xì)胞分裂周期蛋白 等。等。 ANA

3、檢測的臨床意義檢測的臨床意義 v ANA可見于多種自身免疫性疾病，可見于多種自身免疫性疾病， 特別是結(jié)締組織疾病，常作為結(jié)締特別是結(jié)締組織疾病，常作為結(jié)締 組織疾病的診斷，病情判斷和療效組織疾病的診斷，病情判斷和療效 觀察的指標(biāo)觀察的指標(biāo) v 已證實(shí)已證實(shí)ANA對很多自身免疫性疾病有對很多自身免疫性疾病有 診斷價(jià)值。診斷價(jià)值。ANA的靶抗原為細(xì)胞核內(nèi)的不的靶抗原為細(xì)胞核內(nèi)的不 同生化成份，包括核酸、細(xì)胞核蛋白和核同生化成份，包括核酸、細(xì)胞核蛋白和核 糖體蛋白。在不同疾病中，特別是風(fēng)濕性糖體蛋白。在不同疾病中，特別是風(fēng)濕性 疾病，其抗體譜有一定的特意性。在炎癥疾病，其抗體譜有一定的特意性。在炎癥

4、 性風(fēng)濕病中性風(fēng)濕病中ANA陽性率在陽性率在20%-100%之間，之間， 其中類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中其中類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中ANA陽性率最低，陽性率最低， 為為20%-40%。所以，檢測。所以，檢測ANA對于不同類對于不同類 型風(fēng)濕病意義重大。型風(fēng)濕病意義重大。 SLE活動(dòng)性：占95%-100%， 非活動(dòng)性：占80%-100%。 （2）藥物誘導(dǎo)的SLE：占100%。 （3）混合性結(jié)締組織疾?。赫?00%。 （4）其它風(fēng)濕性疾病：占20%-50% （5）進(jìn)行性系統(tǒng)硬化癥：占85%-95%。 （ 6）多肌炎和皮肌炎：占30%-50%。 （7）干燥綜合征：占70%-80%。 （8）慢性活動(dòng)性肝炎：占30%-4

5、0%。 （9）潰瘍性結(jié)腸炎：占26%。 常見疾病常見疾病 其它其它 還可見于：還可見于： 非結(jié)締組織疾病中也可出現(xiàn)非結(jié)締組織疾病中也可出現(xiàn) 陽性；正常人（特別是老年人）也可出現(xiàn)陽陽性；正常人（特別是老年人）也可出現(xiàn)陽 性，但滴度低，并且常表現(xiàn)為性，但滴度低，并且常表現(xiàn)為IgM型；高滴型；高滴 度度ANA則高度提示自身免疫性疾病。則高度提示自身免疫性疾病。 ANA（）的原因（）的原因 v風(fēng)濕性疾病風(fēng)濕性疾病 SLE 多發(fā)性肌炎多發(fā)性肌炎 干燥綜合征干燥綜合征 硬皮病硬皮病 血管炎血管炎 RA v正常的健康人正常的健康人 女性男性，出現(xiàn)率女性男性，出現(xiàn)率 隨年齡而增加隨年齡而增加 風(fēng)濕性疾病患者親

6、屬風(fēng)濕性疾病患者親屬 ？孕婦？孕婦 藥物誘導(dǎo) 慢性肝臟疾病 慢性肺部疾病 慢性感染 血液系統(tǒng)異常 惡性腫瘤 SLE患者使用患者使用IIF法測定法測定ANA陰性的一些解釋陰性的一些解釋 v技術(shù)方面技術(shù)方面 v臨床方面臨床方面 經(jīng)皮質(zhì)激素或免疫抑制劑經(jīng)皮質(zhì)激素或免疫抑制劑治療。治療。 終末期終末期腎病。腎病。 隱蔽隱蔽ANA：與循環(huán)中免疫復(fù)合物結(jié)合，：與循環(huán)中免疫復(fù)合物結(jié)合，沉積沉積于組于組 織。織。 由于大量由于大量蛋白尿蛋白尿而從腎臟丟失。而從腎臟丟失。 ANA的熒光染色型別的熒光染色型別 細(xì)胞核：細(xì)胞核： 核均質(zhì)型（核均質(zhì)型（DNA、組蛋白和核小體等）、組蛋白和核小體等） 核顆粒型（核顆粒型

7、（Sm、uRNP、SS-A、SS-B、Ku、I和和型周期蛋白）型周期蛋白） 核膜型（板層素、核膜型（板層素、gp120等）等） 核仁型（核仁型（SCL-70、PM-SCL、RNA多聚酶、原纖維蛋白等）多聚酶、原纖維蛋白等） 核漿點(diǎn)型（著絲點(diǎn)、核多點(diǎn)及核少點(diǎn)型）核漿點(diǎn)型（著絲點(diǎn)、核多點(diǎn)及核少點(diǎn)型） 細(xì)胞漿：細(xì)胞漿： 胞漿顆粒型（線粒體、胞漿顆粒型（線粒體、Jo-1、核糖體等）、核糖體等） 胞漿纖維型：波形蛋白、原肌球蛋白和肌動(dòng)蛋白等胞漿纖維型：波形蛋白、原肌球蛋白和肌動(dòng)蛋白等 分裂期細(xì)胞陽性：分裂期細(xì)胞陽性：紡垂體、中間體、中心體等紡垂體、中間體、中心體等 根據(jù)產(chǎn)生的熒光模型、靶抗原的分布部位分

8、類如下：根據(jù)產(chǎn)生的熒光模型、靶抗原的分布部位分類如下： ANA篩查的方法篩查的方法 v間接免疫熒光法（間接免疫熒光法（IIF） v基質(zhì)組合為：基質(zhì)組合為：HEP-2細(xì)胞細(xì)胞 + 靈長類肝（猴）靈長類肝（猴） 核顆粒型：核粗顆粒型核顆粒型：核粗顆粒型 v抗核抗體染色類型 核仁型核仁型（nucleolar） 均質(zhì)性均質(zhì)性 （ homogeneous ） ANA的的 熒光類型熒光類型 v ANA試驗(yàn)的結(jié)果中一般會(huì)報(bào)告其分型，這些 分型可能與某一特定的抗原反應(yīng)活性相關(guān)。 分型分型 相關(guān)疾病相關(guān)疾病 核仁型核仁型硬皮病硬皮病 著絲點(diǎn)型著絲點(diǎn)型CREST綜合征綜合征 周邊型周邊型SLE 斑點(diǎn)型斑點(diǎn)型/ 彌

9、散型彌散型 混合性結(jié)締組織混合性結(jié)締組織 ?。ú。∕CTD） 抗雙鏈抗雙鏈DNA抗體（抗體（ds-DNA） 的檢測與臨床應(yīng)用的檢測與臨床應(yīng)用 v檢測：測定抗檢測：測定抗ds-DNA以血鞭毛蟲屬的綠螢以血鞭毛蟲屬的綠螢 短膜蟲為靶抗原基質(zhì)，可聯(lián)合使用短膜蟲為靶抗原基質(zhì)，可聯(lián)合使用HEp-2細(xì)細(xì) 胞及靈長類肝組織檢測。胞及靈長類肝組織檢測。 v自身抗原：位于DNA脫氧核糖磷酸框架上。 抗dsDNA抗體 熒光模式： 綠蠅短膜蟲： 動(dòng)基體均 質(zhì)的或邊 緣亮度增 強(qiáng)的熒光。 Hep-2細(xì)胞： 細(xì)胞核的 均質(zhì)型熒 光。 臨床應(yīng)用臨床應(yīng)用 抗雙鏈抗雙鏈DNA抗體（抗體（ds-DNA）是系統(tǒng)性紅）是系統(tǒng)性紅

10、斑狼瘡的特異性抗體，其陽性率因檢測方法而斑狼瘡的特異性抗體，其陽性率因檢測方法而 異，在異，在40-90%。但抗。但抗ds-DNA陰性并不能排除陰性并不能排除 患有患有SLE的可能性?？沟目赡苄??？筪s-DNA抗體具有預(yù)測抗體具有預(yù)測 價(jià)值，價(jià)值，85%的出現(xiàn)抗的出現(xiàn)抗ds-DNA抗體的健康人在抗體的健康人在 五年內(nèi)發(fā)展為五年內(nèi)發(fā)展為SLE。已證實(shí)抗。已證實(shí)抗ds-DNA抗體參抗體參 與與SLE的病理過程，在疾病形成過程中，抗的病理過程，在疾病形成過程中，抗 ds-DNA和其抗體形成的免疫復(fù)合物沉積在皮和其抗體形成的免疫復(fù)合物沉積在皮 下毛細(xì)血管、腎和其他器官內(nèi)，激活補(bǔ)體系統(tǒng)，下毛細(xì)血管、腎和

11、其他器官內(nèi)，激活補(bǔ)體系統(tǒng)， 從而導(dǎo)致組織損傷。從而導(dǎo)致組織損傷。 抗體水平與疾病活動(dòng)度相關(guān)，隨著疾病活抗體水平與疾病活動(dòng)度相關(guān)，隨著疾病活 動(dòng)的控制，抗動(dòng)的控制，抗ds-DNA抗體滴度可以下降或抗體滴度可以下降或 消失。消失。 ANA ANA譜譜3 3檢測及臨床應(yīng)用檢測及臨床應(yīng)用 抗RNP/Sm抗體 熒光模式： Hep-2片：細(xì)胞 核粗顆粒， 核仁陰性。 肝組織切片： 同上。 熒光法不能區(qū) 分抗RNP和 抗體Sm。 抗RNP/Sm抗體 v自身抗原：抗原RNP和Sm屬于一組小核糖核蛋白 （snRNP），由低分子量的RNA和多種蛋白質(zhì)組成， RNA中尿苷（U-RNA）含量較高。 v臨床意義：高滴度

12、的抗RNP抗體為 混合結(jié)締組織病 （MCTD）的特征，發(fā)生率為95100%。也可出現(xiàn) 于SLE，但總是與抗Sm抗體同時(shí)出現(xiàn)。抗Sm抗體 對SLE具有高度特異性，發(fā)生率為2040%。 抗SSASSB抗體 熒光模式 Hep-2片：細(xì) 胞核呈細(xì) 顆粒熒光， 核仁不發(fā) 光。 肝組織片： 細(xì)顆粒熒 光。 抗SSASSB抗體 v自身抗原：SSA抗原是一個(gè)小核糖核蛋白，由一個(gè) RNA分子和兩種不同的蛋白質(zhì)組成。蛋白質(zhì)的分子 量為52KD和60KD?？贵w直接針對蛋白質(zhì)的抗原決 定簇。SSB抗原是分子量為48kD的磷酸化蛋白。 v臨床意義；最常見于干燥綜合征（SS）,也見于SLE、 原發(fā)性膽汁性肝硬化（PBC）

13、，偶見于慢活肝?？?SSA抗體在新生兒紅斑狼瘡的發(fā)生率幾乎為100%。 核仁陽性(Nucleolar) v核仁熒光增強(qiáng)，核漿均質(zhì)型-Scl-70抗體。 v核仁均質(zhì)型-PM-Scl及其他抗原抗體。 v核仁細(xì)顆粒型-原纖維蛋白抗體。 v核仁粗顆粒型-RNA多聚酶-1抗體。 抗Scl-70抗體 熒光模式： Hep-2片：細(xì) 胞核幾乎均 質(zhì)的熒光， 核仁熒光加 強(qiáng)而且也為 均質(zhì)型，胞 漿無熒光。 肝組織片；細(xì) 胞核顆?；?均質(zhì)型熒光， 常見到細(xì)胞 核熒光。 抗Scl-70抗體 v自身抗原：為DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶1，分子量為 100KD。在DNA雙鏈的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄中起作用。 v臨床意義：2570%的系統(tǒng)性硬化

14、癥（PSS） 彌漫型患者陽性，局限型硬皮病患者陰性。 細(xì)胞漿陽性 v胞漿均質(zhì)型-抗核糖體抗體 細(xì)顆粒-抗Jo-1抗體 v胞漿顆粒型 粗顆粒-AMA抗體 滴狀點(diǎn)狀-溶酶體抗體 核周顆粒-高爾基體抗體 v胞漿纖維型 細(xì)纖維-波形蛋白抗體 環(huán)狀纖維-原肌球蛋白抗體 針狀纖維-肌動(dòng)蛋白抗體 抗核糖體抗體 熒光模式： Hep-2：胞漿 細(xì)顆粒到均 質(zhì)狀、非常 致密的熒光 。 肝組織片：島 狀熒光。 臨床意義： SLE的特異 性抗體，與 精神癥狀有 關(guān)。 抗Jo-1抗體 熒光模式： Hep-2：胞漿顆 粒到細(xì)塊狀 熒光。 肝組織片：胞 漿中弱熒光。 自身抗原：組 氨酰tRNA合 成酶。 臨床意義：見 于P

15、M，發(fā)生 率2535%。 抗線粒體抗體 熒光模式： Hep-2：胞漿 內(nèi)粗的顆 粒型熒光。 大鼠腎組織 切片：腎 小管明顯 熒光，腎 小球熒光 較弱。 抗線粒體抗體 v自身抗原：位于真核細(xì)胞線粒體膜的內(nèi)面。 線粒體自身抗原為2-氧酸脫氫酶復(fù)合體的亞 單位，為一組自身抗原，其中與PBC有關(guān)的 包括： （1）丙酮酸脫氫酶復(fù)合體（PDC） （2）支鏈2-氧酸脫氫酶復(fù)合體（BCOADC） （3）a-酮戊二酸脫氫酶復(fù)合體（OGDC） 抗線粒體抗體 v臨床意義：AMA-M2對PBC具有診斷意義。 vAMA亞型與疾病的相關(guān)性： AMA-1：梅毒、干燥綜合征 AMA-2：PBC AMA-3：藥物性紅斑狼瘡 A

16、MA-4：PBC與AIH重疊 AMA-5：SLE、自身免疫性溶血性貧血 AMA-6：異煙肼引起的藥物性肝炎 AMA-7：AIH AMA-8：AIH、閉塞性血栓性血管炎 AMA -9：藥物性肝炎 AMA-10：SLE 分裂期細(xì)胞陽性 v染色體陽性-染色體相關(guān)抗體，相關(guān)疾?。?v紡錘體纖維陽性-紡錘體纖維抗體，如燕麥 細(xì)胞型支氣管肺癌 v中間體陽性-中間體抗體，相關(guān)疾??？ v細(xì)胞兩極陽性-中心?？贵w，相關(guān)疾??？ v著絲點(diǎn)陽性-抗著絲點(diǎn)抗體 抗著絲點(diǎn)抗體(ACA) 熒光模式： Hep-2：細(xì)胞核細(xì) 的、相同大小的 顆粒熒光，分裂 期顆粒熒光帶狀 位于細(xì)胞中間。 肝組織片：分布于 細(xì)胞核的1020 個(gè)

17、顆粒，熒光弱， 易被忽略。 抗著絲點(diǎn)抗體 v自身抗原：著絲粒中的三種不同的蛋白質(zhì)： 著絲點(diǎn)蛋白A、B、C，主要抗原為著絲點(diǎn)蛋 白B。 v臨床意義：對進(jìn)行性系統(tǒng)性硬化癥亞型 （CREST綜合征）有診斷意義。陽性率 8095%。還可見于PBC、SS等。 器官/組織特異性自身抗體 v抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（ANCA） v抗平滑肌抗體 v抗角蛋白抗體 v抗肝腎微粒體抗體 v抗肝細(xì)胞膜抗原抗體 v抗可溶性肝抗原抗體 v抗肝特異性蛋白抗體 抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（胞漿型） cANCA v熒光模式： v猴肝：肝血 竇區(qū)粒細(xì)胞 強(qiáng)熒光，而 肝細(xì)胞陰性。 甲醛固定的 中性粒細(xì)胞： 胞漿內(nèi)粗大 到細(xì)的熒光 顆粒。 抗

18、中性粒細(xì)胞胞漿抗體（胞漿型） v自身抗原：為絲氨酸蛋白酶-蛋白酶3（PR3）。該 靶抗原為可溶性蛋白，存在于正常中性粒細(xì)胞的嗜 苯胺藍(lán)顆粒中。 v臨床意義：cANCA可見于多種系統(tǒng)性血管炎。主要 見于Wengeners肉芽腫，約占ANCA陽性率的 8095%。cANCA被認(rèn)為是活動(dòng)性Wengeners肉芽 腫和微多動(dòng)脈炎的特異和敏感的標(biāo)志性抗體。還見 于Churg-Strauss綜合征。 抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（核周型） pANCA v熒光模式： v乙醇固定的 中性粒細(xì)胞： 細(xì)胞核周圍 平滑的帶狀 熒光，細(xì)胞 核陰性。 v猴肝：肝血 竇區(qū)粒細(xì)胞 強(qiáng)熒光，而 肝細(xì)胞陰性。 抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（核周型） v自身抗原：主要抗原為髓過氧化物酶（MPO），其 他抗原還有白細(xì)胞彈性蛋白酶，組織蛋白酶G、溶 菌酶及乳鐵蛋白等。 v臨床意義：見于多種系統(tǒng)性血管炎?？梢娪?Wengeners肉芽腫、微多動(dòng)脈炎、Churg-St