實(shí)驗(yàn)一-可溶性糖含量的測(cè)定——蒽酮法

1、實(shí)驗(yàn)十二胰島素、腎上腺素對(duì)血糖濃度的影響血糖是指血液中糖，由于正常人血液中糖主要是葡萄糖，所以一般認(rèn)為，血糖是指血液中的葡萄糖。正常人空腹血糖濃度為4.46.7mmol/L (80120mg/100ml)。血糖是糖在體內(nèi)的運(yùn)輸形式。全身各組織都從血液中攝取葡萄糖以氧化供能，特別是腦、腎、紅細(xì)胞、視網(wǎng)膜等組織合成糖原能力極低，幾乎沒(méi)有糖原貯存，必須不斷由血液供應(yīng)葡萄糖。當(dāng)血糖下降到一定程度時(shí)，就會(huì)嚴(yán)重妨礙腦等組織的能量代射，從而影響它們的功能。所以維持血糖濃度的相對(duì)恒定有著重要食物屮糖消牝咄肝糖原_JL_L非糖物質(zhì)顱空ilk糖的臨床意義貌化分輛工0?地0鮑込肝、肌糖氐瞬酸戍耨通聘轉(zhuǎn)卜真他稲 佛艷

2、讎酸代叫腳m如爆酸等蘭壘空理尿糖血糖濃度的調(diào)節(jié)血糖濃度能維持相對(duì)恒定是由于機(jī)體內(nèi)存在一整套高效率的調(diào)節(jié)機(jī)制，精細(xì)地控制著血糖的來(lái)源與去路，使之達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡。神經(jīng)系統(tǒng)的調(diào)節(jié)作用神經(jīng)系統(tǒng)對(duì)血糖濃度的調(diào)節(jié)作用主要通過(guò)下丘腦和自主神經(jīng)系統(tǒng)對(duì)所控制激素的分 泌，后者再通過(guò)影響血糖來(lái)源與去路關(guān)鍵酶的活性來(lái)實(shí)現(xiàn)。神經(jīng)系統(tǒng)的調(diào)節(jié)最終通過(guò) 細(xì)胞水平的調(diào)節(jié)來(lái)達(dá)到目的。下丘腦一方面通過(guò)內(nèi)臟神經(jīng)作用于腎上腺髓質(zhì)，刺激腎上腺素的分泌；另一方面也作用于胰島a -細(xì)胞，使其分泌胰高血糖素；同時(shí)還可以直接作用于肝。 三方面共同作用的結(jié)果是使肝細(xì)胞的磷酸化酶活化， 使糖原分解加速； 糖異生關(guān) 鍵酶的活性增加，糖異生作用增加，從

3、而使血糖濃度升高。下丘腦還可通過(guò)興奮迷走神經(jīng)，使胰腺B -細(xì)胞分泌胰島素，同時(shí)還可直接 作用于肝，使肝細(xì)胞內(nèi)糖原合成酶活化， 促進(jìn)肝糖原的合成； 此外還抑制糖異生 途徑，促進(jìn)糖的氧化和轉(zhuǎn)化，總體上使血糖的去路增加，來(lái)源減少，最終達(dá)到使 血糖濃度降低的目的。激素使血糖濃度降低的激素 :胰島素使血糖濃度升高的激素 :胰高血糖素、 腎上腺素、 腎上腺皮質(zhì)激素、生長(zhǎng)素、 甲狀腺素它們對(duì)血糖的調(diào)節(jié)主要是通過(guò)對(duì)糖代謝各主要途徑的影響來(lái)實(shí)現(xiàn)的。 在激素發(fā)揮調(diào)節(jié)血糖濃度的作用中，最重要的是胰島素和胰高血糖素。腎 上腺素在應(yīng)激時(shí)發(fā)揮作用，而腎上腺皮質(zhì)激素、 生長(zhǎng)激素、 甲狀腺素等都可影響 血糖水平，但在生理性調(diào)

4、節(jié)中僅居次要地位。胰島素使肌肉和脂肪組織細(xì)胞膜對(duì)葡萄糖的通透性增加，利于血糖進(jìn)入這些組織進(jìn)行代謝。 誘導(dǎo)葡萄糖激酶、磷酸果糖激酶和丙酮酸激酶的合成，加速細(xì)胞內(nèi)葡萄糖的分解利用。通過(guò)使細(xì)胞內(nèi) cAMP 含量減少， 激活糖原合成酶和丙酮酸脫氫酶系， 抑制 磷酸化酶和糖異生關(guān)鍵酶等，使糖原合成增加， 糖的氧化利用、 糖轉(zhuǎn)變?yōu)橹镜?反應(yīng)增加，血糖去路增快； 使糖原分解和糖異生減少或受抑制， 使血糖來(lái)源減少， 最終使血糖濃度降低。胰高血糖素主要通過(guò)提高靶細(xì)胞內(nèi) cAMP 含量達(dá)到調(diào)節(jié)血糖濃度的目的。細(xì)胞內(nèi)的 cAMP 可激活依賴 cAMP 的蛋白激酶，后者通過(guò)酶蛋白的共價(jià)修飾改變細(xì)胞內(nèi) 酶的活性，即激

5、活糖原分解和糖異生的關(guān)鍵酶， 抑制糖原合成和糖氧化的關(guān)鍵酶， 使血糖升高。腎上腺素通過(guò) cAMP 激活肝中糖原磷酸化酶使糖原分解，還有誘導(dǎo)肝中磷酸烯醇式 丙酮酸激酶及果糖二磷酸酶的合成促進(jìn)糖異生作用， 使氨基酸轉(zhuǎn)化成葡萄糖， 從 而使血糖上升。實(shí)驗(yàn)?zāi)康?. 掌握各種激素（胰島素和腎上腺素）對(duì)血糖的調(diào)節(jié)作用。2. 掌握血糖的定義、正常值及其測(cè)定的原理?；驹砥咸烟窃谟袡C(jī)酸溶液中能與某些芳香胺類化合物如苯胺、聯(lián)苯胺、鄰甲苯胺 等起縮合反應(yīng)， 生成希夫氏 （Schiff） 堿式有色衍生物， 再通過(guò)分光光度計(jì)比色測(cè) 定得到葡萄糖濃度。本實(shí)驗(yàn)用的是鄰甲苯胺法鄰甲苯胺不與非還原性糖物質(zhì)顯色，而與已醛糖顯

6、色。葡萄糖的醛基在熱醋 酸溶液中與鄰甲苯胺的氨基互相縮合成蘭綠色的希夫氏堿， 該蘭綠色在一定范圍 內(nèi)與葡萄糖濃度成正比。此法測(cè)得正常人的空腹血糖值為 70-100mg/100ml, 兔約為 130mg/100ml 左右。操作1 動(dòng)物準(zhǔn)備及空腹采血取試管 4 支，編號(hào) （1） 、（2）、（3）、（4），分別加入肝素抗凝劑 0.0lml 。取空 腹 16 小時(shí)以上的家兔兩只，分別編號(hào) 1 和 2 ，稱體重并記錄。用耳靜脈采血法：先剪去兔耳靜脈處的毛，再用二甲苯擦拭兔耳部靜脈，使 其充血，在其周圍抹上凡士林 （防止污染、潤(rùn)滑），用刀片輕輕挑破邊緣耳靜脈， 放血入含抗凝劑的試管（ 1）和（ 2），約需

7、 2-3ml ，邊滴邊搖，以防凝固。取血 完畢，用干棉球壓迫血管止血 .2. 注射激素并再采血。l 號(hào)兔臀部皮下注射胰島素，劑量按 4 單位 kg 計(jì)算，一小時(shí)后于心臟取 血入抗凝管（ 3），測(cè)定血糖。將 2 號(hào)兔臀部皮下注射 0.1% 腎上腺素液，劑量為 每公斤體重 0.4ml ，觀察兔子情況。 30min 后，心臟取血入抗凝管（ 4 ）中。心臟采血法： 將 10ml 注射器用肝素抗凝劑淋洗（肝素化）后， 置家兔于仰 臥位，固定四肢，在左側(cè)胸壁 3 4 肋間，用左手食指摸到心搏最明顯處（頸靜 脈切跡與胸骨劍突中點(diǎn)旁）垂直進(jìn)針（不可左右前后擺動(dòng)針頭） ，深度約 3cm ， 當(dāng)有落空感時(shí)，可感覺(jué)

8、到針尖隨心搏而動(dòng)，固定針頭，采血 8ml 左右，放入抗 凝管中。3. 測(cè)定注射前后的血糖將收集的4管血液離心10分鐘(每分鐘2500轉(zhuǎn))，取上層血漿，分別制成 胰前(1)、胰后(3)、腎前(2)、腎后(4)4管標(biāo)本。取6支干燥試管，編號(hào)并按表操 作?；靹蚋鞴?，置沸水浴中加熱15分鐘，冷卻，用波長(zhǎng)630nm進(jìn)行分光測(cè)定, 讀取吸光度值，按下式計(jì)算葡萄糖含量。測(cè)定管吸光度葡萄糖mg/100ml血漿=標(biāo)準(zhǔn)管吸光度x 100注意事項(xiàng)1. 離心機(jī)的使用離心前一定要配平(位置配平和重量配平)。(2).使用時(shí)離心機(jī)的蓋子一定要蓋緊，以免發(fā)生意外。.要等離心機(jī)完全靜止后才能打開(kāi)蓋子。2. 微量移液器的使用3. 取血時(shí)的注意事項(xiàng).注射器、刀片的使用。.注射器在取血前要肝素化。.心臟取血時(shí)要注意進(jìn)針的位置和深度。.注意不要將空氣注入動(dòng)物體內(nèi)。血液放入試管中時(shí)要先將注射器的針