三七種子脂溶性化學(xué)成分研究

1、三七種子脂溶性化學(xué)成分研究作者：宋建平，崔秀明，曾江，陳紀(jì)軍，張學(xué)梅，馬云寶【摘要】 目的對三七種子的脂溶性部位進行化學(xué)成分研究。方法采用硅膠柱進行分離純化，經(jīng)理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)分析鑒定化學(xué)結(jié)構(gòu)。結(jié)果分離得到8個化合物，分別鑒定為羽扇豆-20-烯-3,16-二醇-3-阿魏酸酯()、三棕櫚酸甘油酯()、人參炔醇()、-谷甾醇()、胡蘿卜苷()、羽扇豆醇()、16-羥基羽扇豆醇()、人參皂苷Rh4()。結(jié)論化合物為首次從天然產(chǎn)物中獲得，化合物為首次從該種植物中分離得到?！娟P(guān)鍵詞】 三七; 種子; 脂溶性成分Abstract：Objective To study the chemical const

2、ituents of seeds of Panax notoginseng. MethodsIsolation and purification were carried out on repeated silica gel column chromatography. The structures of the compounds were identified by physicochemical properties and spectral analysis. ResultsEight compounds were isolated and identified as Lup-2-en

3、e-3,16-diol-3-ferulate (), hexadecanoic acid glycerin ester(), panaxynol()， -sitosterol()，daucosterol(), Lupeol(), 16-Hydroxylupeol()，Ginsenoside Rh4(). ConclusionCompound was obtained from natural products for the first time. Compound was isolated from this plant for the first time.Key words： Seeds

4、 of Panax notoginseng; Seeds; Lipophilic constituents三七Panax notoginseng (Burk.)F.H.Chen為五加科人參屬植物，主要分布于我國的云南、廣西，是我國特有的名貴中藥材，具有化淤止血、活血定痛之功效。傳統(tǒng)主要應(yīng)用于人體內(nèi)外各種出血之癥及跌打損傷、瘀滯腫痛。三七的化學(xué)成分與藥理研究已經(jīng)比較深入，研究表明三七含皂苷、黃酮、三七素等活性物質(zhì)。藥理研究表明對防治心腦血管疾病有顯著作用，還具有降血脂、降血糖、降血壓、抗炎癥、抗疲勞、耐缺氧、抗衰老和提高機體免疫力等活性(崔秀明.中藥三七的道地性研究.中國藥科大學(xué)2005博士論文

5、)。目前對三七的根、莖、葉的研究已有大量報道，三七種子的化學(xué)成分研究報道較少且不深入。本文從產(chǎn)自云南文山的三七種子中分離得到8種化合物，分別鑒定為羽扇豆-20-烯-3,16-二醇-3-阿魏酸酯()、三棕櫚酸甘油酯()、人參炔醇()、-谷甾醇()、胡蘿卜苷()、羽扇豆醇()、16-羥基羽扇豆醇()、人參皂苷Rh4()。其中化合物為首次從天然產(chǎn)物中獲得，化合物為首次從該種植物中分離得到。1 儀器與材料三七種子由文山州三七研究院藥物研究所提供。熔點用XRC-I型顯微熔點儀測定(溫度計未校正);旋光用JASCO-20旋光儀測定;質(zhì)譜用VG Auto Spec-3000型質(zhì)譜儀測定;NMR用Bruker

6、 AV-400超導(dǎo)核磁共振儀測定，C5D5N為溶劑，TMS內(nèi)標(biāo)。青島海洋化工廠生產(chǎn)的硅膠;TLC用青島化工廠生產(chǎn)的硅膠G預(yù)制薄板。展開劑：氯仿甲醇 (1008.51.5);石油醚丙酮(73 91);石油醚醋酸乙酯(73 91)。顯色劑：10%的H2SO4-EtOH溶液。2 方法與結(jié)果2.1 提取與分離采自文山的三七種子24.5 kg，用70%的乙醇回流提取，回收溶劑得乙醇提取物7.8 kg。乙醇提取物用少量水溶解后，用氯仿萃取3次，得氯仿提取物186 g，水層再用正丁醇萃取3次，剩余水部分揮干的3.5 kg提取物，正丁醇部分用11的飽和食鹽水萃取1次(水層棄去)，正丁醇部分回流蒸干得提取物52

7、0g，然后用少量水溶解通過D101大孔吸附樹脂柱層析，先用水洗脫得到揮干物80 g，然后用70%EtOH洗脫得到三七總皂苷350 g，再用95%EtOH洗脫得到揮干物45 g。氯仿提取物186g經(jīng)硅膠柱層析，以氯仿-甲醇(10091)梯度洗脫得到7個流分，各流分分別反復(fù)經(jīng)正相硅膠柱層析,反相柱層析(Rp-8, Rp-18, MCI CHP-20P), 葡聚糖柱層析(sephadex LH-20)，目前得到8個化合物?；衔?200 mg),(10 mg), (20 mg), (5.0 g) , (50 mg), (100 mg),(150 mg), (1 g)。2.2 結(jié)構(gòu)鑒定2.2.1 化合

8、物白色粉末 m.p. 101104，14.6 D =+24.59(c=0. 67 , CHCl3)。UVCHCl3 max(log=4.18) 320，295，240。 IR (KBrmax, cm-1): 3 449, 1 668, 979。1H NMR (C5D5N, 400 MHz):3.61(1H, dd, J=10.8, 5.2 Hz, H-3), 4.59(1H, dd, J=10.9, 5.4 Hz, H-16), 2.50 (1H, m, H-19), 0.92(3H, s, H-23), 0.88(3H, s, H-24), 0.89(3H, s, H-25), 1.05(3

9、H, s, H-26), 1.00(3H, s, H-27), 0.80( 3H, s, H-28), 4.61(1H, m, H-29), 4.71 (1H, m, H-29), 1.25(3H, s, H-30), 6.27(1H, d, J=16.0Hz, H-2), 6.90(1H, d, J=8.2Hz, H-8), 7.56(1H, d, J=16.0Hz, H-3), 7.03(1H, dd, J=8.0, 1.9Hz, H-9), 7.08(1H, d, J=2.0Hz, H-5), 3.92(3H, s, H-10)，13C NMR (C5D5N, 100 MHz) 。見表1

10、。IR 顯示有羥基(3 449 cm-1)，雙鍵(1 632 cm-1)，羰基(1 688 cm-1)的信號，UV顯示320 nm有強吸收，說明有一個大的共軛體系?；衔锝?jīng)5%H2SO4水解，通過紙層析與標(biāo)準(zhǔn)品對照，顯示有16-羥基羽扇豆醇和阿魏酸存在。負(fù)離子FAB-MS給出準(zhǔn)分子離子峰 m/z 617 (M-H)-，負(fù)離子HR-FAB-MS給出精確準(zhǔn)分子離子峰 m/z 617.4214 (M-H)-，推定分子式為C40H58O5。在1H NMR譜中，H 0.80，0.88，0.89，0.92，1.00，1.05，1.25， 3.92 (各3H，s) 說明分子中有8個甲基，H 4.60(1H，

11、br.s )，4.71(1H，s)顯示有兩個烯氫質(zhì)子，同時H 6.27 (1H, d ), 7.56 (1H, d ) 且J= 16.0 Hz, 說明有一個反式雙鍵的存在。13C NMR(DEPT)譜給出了40個碳原子信號，顯示有8個甲基，10個亞甲基，12個次甲基，10個季碳。其中c 167.1為一個酯羰基碳原子信號，亞甲基C109.0為一個端基雙鍵碳原子信號。比較化合物與16-羥基羽扇豆醇的碳譜數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)除側(cè)鏈部分外，二者極為相近。分析化合物的HMBC圖譜，H-29(H 4.71，4.63)和H-30(H 1.25)與C-20(c 149.9)相關(guān)，H-18(H 2.50)和和H-21(H

12、 1.95)與C-20(c 149.9)相關(guān)，說明化合物1的雙鍵位于C20(29)位。另外，C-23(C 16.6)、C-24(C 27.9)和C-1(C 38.4)與H-3(H 4.60)相關(guān)，C-1(C 38.4)與H-3(H 4.60)相關(guān)，C-9(C 167.1)與H-3(H 4.60)相關(guān)，說明化合物的酯羰基與16-羥基羽扇豆醇的C-3位相連。綜合上述數(shù)據(jù)，推定化合物結(jié)構(gòu)為：羽扇豆-20-烯-3,16-二醇-3-阿魏酸酯(Lup-2-ene-3,16-diol-3-ferulate)。結(jié)構(gòu)見圖1。圖1 化合物結(jié)構(gòu)圖2.2.2 化合物 在常溫下呈淡黃色液體。經(jīng)多種溶劑系統(tǒng)層析均呈一個斑

13、點。IR (KBrmax, cm-1): 1 740(-COOH), 1 155(C-O-C), 715(強峰，n4)?；衔?與KHSO4共熱放出甘油醛的刺激味，不能使高錳酸鉀及溴水褪色，說明無雙鍵及還原基團。13C NMR (CDCl3, 100 MHz ) H: 173(酯羰基)，172.6(甘油部分-碳接羰基，-CH-OOC-)，69(d，CH-O-), 62.5(t, -CH2-O-)，29.8(強峰，直鏈長鏈脂肪羥特征峰)，14.1(CH3)?；衔?經(jīng)5%KOH水解，中和，經(jīng)GC層析，保留時間(t=3 min 27s)與三棕櫚酸甘油酯一致。FD-MS：M+ 804，以上數(shù)據(jù)表明化

14、合物為三棕櫚酸甘油酯。2.2.3 化合物紅色油狀物，14.6 D= - 28.8 (c=1.59, CHCl3 )。 分子式 C17H24O，IR (KBrmax, cm-1): 3 380 (-OH ),2 257(CC) , 1 640 (C= C)。1H NMR (CDCl3, 400 MHz ) : 0.88 (3H, t, J= 6.9 Hz,H-17) , 1.251.35 (10H, m , H-12H-16) , 2.02 (2H, dt, J= 6.7 Hz, H-11) , 3.04 (2H, dd, J= 0.7,6.9 Hz, H-8) , 4.92 (1H, t, J

15、= 5.4 Hz, H-3), 5.24(1H, dt, Jd= 10.2 Hz, J t= 1.1 Hz, Ha-1) , 5.38 (1H,dtt, Jd= 10.4 Hz, J t= 6.9, 1.3 Hz, H-9) , 5.47 (1H,dt, Jd= 16.8 Hz, J t= 11 Hz, Hb-1) , 5.51 (1H, dtt, Jd=10.5 Hz, Jt= 7.4, 1.3 Hz, H-10) , 5.94 ( 1H,ddd, J= 17.1, 10.2, 5.4 Hz, H-2)。13C NMR (CDCl3, 100 MHz) : 14.2 (C-17) , 17.

16、8 (C-8) , 22.7 (C-16) , 27.3 (C-11) , 29.2 (C-14) , 29.3 (C-12) , 29.3 (C-13) , 31.9(C-15) , 63.6 (C-3) , 64.4 (C-6) , 71.7 (C-5) , 74.3(C-4) , 80.4 (C-7) , 117.1 (C-1) , 122.0 (C-9) , 133.2(C-10) , 136.2 (C-2)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道的3(R)-十七碳-1, 9 (Z ) -二烯-4,6-二炔-3-醇即人參炔醇1基本一致。2.2.4 化合物白色針狀結(jié)晶(丙酮)，C29H50O, m.p.:1

17、38140, MW 414; EI - MS m/z(%):414 M + (100) ,396(27),381(18), 367(3), 354(5),329 M - 85 + (20),303(34) , 289 (5) , 273M - SC + (15) , 255(15),231 M - SC - 42 +(12) ,213(16),145(17) ,109(14) , 69(25) 。1H NMR (CDCl3 ,500 MHz) : 5.30 (1H, d, J= 5.2 Hz, H - 6) , 3.50 (1H, m, H - 3) , 0.98 (3H, s, H - 19

18、) , 0.91 (3H, d, J= 6.5 Hz, H - 21) , 0.83(3H, d, J = 1.8 Hz, H - 29) , 0.81 (3H, d, J= 4.0 Hz, H - 27 ) , 0.80 ( 3H, s, H - 26),0.67 (3H, s, H - 18) ;13C NMR (CDCl3, 100 MHz) :19.8q, 19.4q, 19.0q, 18.8q, 12.0q, 11.9q, 21.1t, 23.1t, 24.3t, 26.1t, 28.3t, 31.9t, 34.0t, 37.3t, 39.8t, 42.3t, 42.3t, 121.

19、7d, 71.8d, 56.8d, 56.1d, 50.1d, 45.9d, 36.1d, 29.2d, 140.8s, 36.5s, 31.6s.以上數(shù)據(jù)與標(biāo)準(zhǔn)樣品-谷甾醇基本一致。2.2.5 化合物白色無定型粉末， C35H60O6, m.p.：288289，23 D = -40.83。(c=0.63, 吡啶); IR (KBrmax, cm-1): 3 400(OH), 2 490, 2 930, 2 850(CH3, CH2), 1628(C=C), 1 375, 1 365(-CH3及偕二甲基)，1 150，1 068，1 015(C-O). MW576; EIMS m/z 414(

20、苷元，6)，396(100)， 381(7)，329(2)， 303(5)， 255(12)， 231(3)， 187(3)， 161(15)，145(21)， 133(12)， 119(10)， 107(17)， 95(22); 1H NMR(C5D5N, 500 MHz) : 5.33(2H, d, J=2Hz, H-1, H-6), 5.05(1H, d, J=7.4Hz, H-1), 3.94(1H, m, H-3); 13CNMR(C5D5N, 100 MHz):苷元部分： 140.8, 121.7, 78.4, 56.7, 56.0, 50.1, 45.9, 42.3, 39.8,

21、 39.2, 37.3, 36.7, 36.2, 34.0, 32.0, 31.9, 30.0, 29.3, 28.3, 26.2, 24.3, 23.2, 21.0, 19.8, 19.2, 19.0, 18.8, 11.9, 11.8; 葡萄糖部分：102.4, 78.3, 77.9, 75.1, 71.5, 62.7. 以上數(shù)據(jù)與標(biāo)準(zhǔn)樣品胡蘿卜苷基本一致。2.2.6 化合物白色針晶(石油醚-醋酸乙酯) , mp.208210 。20 D + 25.8( c=0. 77 , CHCl3) 。IR (KBrmax, cm-1): 3408 (-OH) ,2 943 , 2 854 , 1 6

22、37 (末端雙鍵) , 1 458 , 1 381 , 1 038 , 880 (末端雙鍵). 1H NMR (C5D5N, 400 MHz):3.17(1H, dd, J=10.8, 5.2, H-3), 2.39 (1H, m, H-19), 0.97 (3H, s, H-23), 0.73 (3H, s, H-24), 0.83 (3H, s, H-25), 1.03 (3H, s, H-26), 0.95 (3H, s, H-27), 0.79( 3H, s, H-28), 4.69 (1H, m, H-29),4.57 (1H, m, H-29),1.68 (3H, s, H-30)

23、. 13C NMR (C5D5N, 100 MHz)見表1，以上數(shù)據(jù)與文獻相符羽扇豆醇2基本一致。2.2.7 化合物針狀結(jié)晶(Me2CO) 分子式： C30H50O2 分子量：442 mp. ： 218219旋光：20 D +23(c=1.18,CHCl3) 1H NMR (C5D5N, 400 MHz):3.45(1H, dd, J=10.8, 5.2, H-3), 3.93(1H, dd, J=10.9, 5.4, H-16), 2.65 (1H, m, H-19),1.08 (3H, s, H-23), 0.87(3H, s, H-24), 1.03(3H, s, H-25), 1.15 (3H, s, H-26), 1.08(3H, s, H-27), 0.79( 3H, s, H-28), 4.75(1H, m, H-29),4.91 (1H, m, H-29),1.75(3H, s, H-30) 13C NMR (C5D5N, 100 MHz)。見表1。以上數(shù)據(jù)與文獻相符16-羥基羽扇豆醇3基本一致。2.2.8 化合物 白色粉末, m.p. 131132, 14 D=+40.0 (c=0.20, MeOH); 負(fù)離子FAB-MS m/z(%): 457(M-H-,