色譜常見問題摘選及故障排除：4-色譜問題摘選分享（二）

1、色譜問題摘選分享色譜問題摘選分享 ( (二）二） 1、有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)曲線取幾個(gè)點(diǎn)合適？ 標(biāo)準(zhǔn)曲線究竟需要多少個(gè)點(diǎn)要看方法和應(yīng)用的需要。 理論上講，只要標(biāo)準(zhǔn)曲線的濃度范圍覆蓋了待測(cè)樣品可能 的濃度范圍就可以了。GC/HPLC一般的含量測(cè)定方法學(xué)研 究需要用5-7個(gè)點(diǎn)，范圍在含量測(cè)定濃度正負(fù)30%就足以滿 足要求。點(diǎn)增多，肯定增大了濃度的跨度，這樣可能高濃 度的線性程度會(huì)掩蓋低濃度的線性程度。所以點(diǎn)的數(shù)量并 不是關(guān)鍵問題，要看濃度的跨度。檢測(cè)方法如果未規(guī)定濃 度的間隔大小，而樣品濃度最低點(diǎn)已經(jīng)接近檢測(cè)限時(shí)，可 以適當(dāng)增加低濃度區(qū)間的點(diǎn)數(shù)，高濃度時(shí)則間隔可以拉大。 2、與色譜相關(guān)的檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)有哪些？ JJG

2、705-2002液相色譜儀檢定規(guī)程 JJG700-1999氣相色譜儀檢定規(guī)程 JJG342-93凝膠色譜儀檢定規(guī)程 JJG937-1998色譜儀檢定規(guī)程 JJG823-93離子色譜儀檢定規(guī)程 JJG021-1996分析性氣相色譜儀檢定規(guī)程 3、什么是隔墊吹掃？ 隔墊吹掃是指進(jìn)樣口隔墊下有一小部分載氣流（2ml/min左右）橫向 吹過，最后放空。作用是將進(jìn)樣墊會(huì)揮發(fā)出的殘留溶劑和多次穿刺后 可能掉下的碎屑吹出系統(tǒng)，避免進(jìn)入色譜柱，造成對(duì)分析的干擾和色 譜柱堵塞；還可吹出樣品氣化瞬間產(chǎn)生的部分溶劑氣體，以減少溶劑 峰拖尾。隔墊吹掃最初是在分流/不分流毛細(xì)管柱進(jìn)樣口實(shí)現(xiàn)的，后 來很多儀器的填充柱進(jìn)樣

3、口也配備有隔墊吹掃功能。 4、關(guān)于襯管的相關(guān)知識(shí)？ 襯管在進(jìn)樣口氣化室里面。對(duì)于毛細(xì)管柱進(jìn)樣口，將 進(jìn)樣口壓緊硅膠墊的螺帽擰下來，取出硅膠墊，下面 就是襯管。毛細(xì)管柱一般使用石英玻璃襯管。 襯管死體積大小、載氣入口的位置、毛細(xì)管前端入口 的位置對(duì)組分尤其是溶劑譜帶展寬影響較大。還有一 點(diǎn)要注意，在多次進(jìn)樣后，常有一些硅橡膠碎屑被進(jìn) 樣針頭帶入襯管，累積多了會(huì)導(dǎo)致載氣堵塞和吸附樣 品組分，或分解后進(jìn)入色譜柱造成“鬼峰”，需要定 期更換或清洗。 5、柱流量、尾吹氣、分流流量的相互關(guān)系 三者是根據(jù)樣品濃度、進(jìn)樣量、載氣和檢測(cè)器類型來確 定的。通過三者關(guān)系的調(diào)節(jié)可以獲得各組分較好的分離 和檢測(cè)效果。這

4、些色譜條件一旦固定并經(jīng)標(biāo)樣校正，就 不宜再隨意改變，否則會(huì)影響定量結(jié)果的準(zhǔn)確性。 以內(nèi)徑0.25-0.32mm毛細(xì)管柱為例，柱流量一般為1.0- 2.5ml/min，尾吹為30ml/min左右，分流流量需依據(jù)樣品 濃度而定。 6、什么是尾吹氣？ 尾吹氣是從色譜柱后直接進(jìn)入檢測(cè)器的一路氣體，作用是 在毛細(xì)柱出口處加大氣體流量，以便將分離流出的組分迅 速吹進(jìn)檢測(cè)器，避免檢測(cè)池死體積造成譜帶展寬。 毛細(xì)管柱大多采用尾吹氣，填充柱不用。 尾吹氣對(duì)毛細(xì)管柱的出峰峰形影響很大，加適量的尾吹氣 可以使峰變得尖而對(duì)稱，如果尾吹氣沒選擇好，也會(huì)影響 到積分結(jié)果。 7、為何要老化色譜柱？如何老化？ 色譜柱老化的目

5、的：是徹底去除填充物中的殘留溶劑 和某些揮發(fā)性的物質(zhì)；另一方面是促進(jìn)固定液均勻牢固地 分布在擔(dān)體的表面上。 老化時(shí)，色譜柱出口端不能接檢測(cè)器，以避免柱流出 物污染檢測(cè)器。不接檢測(cè)器的柱子一端放空于柱箱中即可。 老化時(shí)一定要通載氣，否則會(huì)燒壞柱子。不同性質(zhì)的兩根 柱子最好不要同時(shí)老化。 8、色譜柱為什么會(huì)出現(xiàn)柱流失現(xiàn)象？ 所有的色譜柱都有柱流失的現(xiàn)象，來源于固定相由于各種原因 降解而產(chǎn)生的被洗脫物質(zhì)。柱流失會(huì)隨著溫度的升高而加劇。 一般，我們會(huì)在程序升溫的條件下做一次空白試驗(yàn)，溫度要升 至色譜柱的溫度上限，并持續(xù)該溫度1015分鐘，這樣就可以 得到該色譜柱的正常流失曲線圖。 在氰丙基取代聚硅氧烷

6、固 定相與NPD系統(tǒng)或聚乙二醇柱與ECD系統(tǒng)中，這種現(xiàn)象就非常 突出。 隨著色譜柱的使用，柱流失會(huì)不斷的升高。色譜柱暴露于 有氧環(huán)境(空氣)中或者持續(xù)在等于或接近色譜柱的上限溫 度條件下被使用，都會(huì)加速色譜柱的流失。柱流失突然或 快速的升高則可能是色譜柱有損壞或GC系統(tǒng)有問題出現(xiàn)。 而持續(xù)在高于色譜柱上限溫度下操作使用，持續(xù)使色譜柱 暴露在有氧環(huán)境中(通常由于泄漏)，或者不斷分析的樣品 中有破壞性物質(zhì)，這些都有可能是問題的原因。 9、什么是分流和不分流進(jìn)樣？ 分流進(jìn)樣（split injection）應(yīng)用于濃度相對(duì)高的樣品，進(jìn) 樣時(shí)分流閥會(huì)始終打開。當(dāng)樣品進(jìn)入襯管氣化后，大部 分會(huì)通過分流出口

7、排到儀器外面，只有小部分進(jìn)入色譜 柱中。 不分流進(jìn)樣（splitless injection）用于分析低濃度樣品。 為了使樣品能完全進(jìn)入色譜柱中，就必然要關(guān)閉分流閥。 一般的操作方法是：進(jìn)樣的瞬間關(guān)閉分流閥，過一定時(shí) 間后打開分流閥，將襯管中殘留的溶劑氣體盡快排出。 10、為什么氣相色譜不能分析酸、堿性物質(zhì)？ GC一般不能分析酸堿性物質(zhì)，也不能分析酰氯類物質(zhì)， 主要是考慮色譜系統(tǒng)怕腐蝕。少量的有機(jī)酸堿，只要柱 子分離效果好是完全可以的。對(duì)于活性較強(qiáng)的酸堿性樣 品，不宜直接進(jìn)樣分析，可以采用衍生化處理后再做分 析。 11、FID是否要經(jīng)常清洗？ FID是需要經(jīng)常清洗的，因?yàn)殚L(zhǎng)時(shí)間使用，會(huì)在噴嘴上

8、積 一些污垢，這樣從噴嘴中流出的氣流就可能不以垂直方向 上升，影響檢測(cè)器的靈敏度。 一般FID配有不同口徑的噴嘴。采用毛細(xì)管柱時(shí)要用細(xì)口 徑噴嘴，填充柱時(shí)用大口徑的噴嘴。 12、C8和C18柱是否可以互換使用？ 從C2/C4/C8,一直到C18，鍵合相的疏水性逐漸增強(qiáng)，一般 用于分離的目標(biāo)物的疏水性逐漸降低。對(duì)于相同物質(zhì)（非 強(qiáng)極性），其保留時(shí)間逐漸增長(zhǎng)。在不影響分離的情況下 可以互換使用。 一般情況下，用C18和C8柱的區(qū)別不是很大，不過C18柱用 的更多些。但胺類物質(zhì)含有可與填料上的殘余活性點(diǎn)（羥 基）作用造成拖尾的氨基官能團(tuán)（親水性），C18疏水性 更強(qiáng)，在這樣的情況下一般用經(jīng)封尾處理的

9、C8柱要優(yōu)于 C18柱。而且C8柱要比C18柱使用范圍更廣。 不同廠家優(yōu)于生產(chǎn)工藝不同（接枝方式、合成工藝、硅膠 結(jié)構(gòu)等），不同品牌C18柱之間的性能差異，常常大于同 一品牌C18和C8之間的差異。因此，在使用過程中要具體 分析，尋找最合適的替代柱。 13、保護(hù)柱與預(yù)柱的區(qū)別？ 保護(hù)柱叫g(shù)uard colum,是裝在分析柱前，進(jìn)樣器后，其填 料性質(zhì)與分析柱相同或相近，主要是保護(hù)分析柱不被樣品 中的強(qiáng)保留雜質(zhì)或顆粒物污染。可能的影響是在流路中多 些接頭，導(dǎo)致系統(tǒng)的死體積加大。如果柱效下降的很明顯， 而且柱壓上升，就應(yīng)該更換保護(hù)柱，最好用卡套式的，可 以換柱芯，成本低。打開看看，臟了就需更換。 預(yù)

10、柱叫pre-column，應(yīng)裝在泵后，進(jìn)樣器前，祈禱飽和流 動(dòng)相和過濾雜質(zhì)的作用。預(yù)柱可自裝，一般是先購(gòu)買已經(jīng) 裝填好但可開卸充填的預(yù)柱，然后要備好散裝填料。散裝 填料的要求不高，一般用較粗的粒徑如10um的硅膠就可 以。重裝時(shí)倒出原填料，用甲醇拌好新填料填入即可。如 果分析用流動(dòng)相的PH在2-8的范圍內(nèi)，就不比一定要用預(yù) 柱。 14、如何選擇和更換保護(hù)柱？ 選擇保護(hù)柱的原則是：填料的保留性能要與分析柱相同， 柱內(nèi)徑與分析柱匹配，柱長(zhǎng)盡可能短。 從理論上講出現(xiàn)下列情況時(shí)就需更換保護(hù)柱： 柱理論塔板數(shù)下降15%以上 柱前壓上升15%以上 最難分離的物質(zhì)對(duì)分離度下降15%以上 樣品進(jìn)樣次數(shù)超過15

11、0次 流動(dòng)相通過1500倍的色譜柱體積 15、分析樣品時(shí)，色譜柱柱壓一直慢慢升高， 怎么辦？ 多數(shù)情況是柱子有問題了，可采取以下措施： 可先用PH=1磷酸水溶液沖洗，再換成甲醇，有時(shí)能解決問題。 將柱子反接，反沖柱子，如果壓力有明顯緩慢下降，則說明柱 頭堵塞，用PH=1稀磷酸及甲醇沖洗，有時(shí)能解決問題。 正接色譜柱后，壓力還是緩慢上升，則拆開柱子，清洗柱子的 過濾篩板，用25%的硝酸超聲清洗。如果柱頭很臟，則刮去一 些填料，用相同或相近的填料補(bǔ)上，很多情況下可解決問題。 壓力升高有時(shí)是檢測(cè)器阻塞造成的，拆下色譜柱，直接將進(jìn)樣 閥與檢測(cè)器相連，看看壓力變化，同時(shí)檢查連接管的通暢性。 16、液相色譜的流動(dòng)相可以放置多長(zhǎng)時(shí)間？ 酸性流動(dòng)相：加了醋酸、甲酸或三氟乙酸的流動(dòng)相，由于 這些酸的揮發(fā)性較強(qiáng)，加之吸收空氣中的二氧化碳后，PH 值可能會(huì)改變，連續(xù)幾天使用后色譜分析的重現(xiàn)性會(huì)下降。 當(dāng)環(huán)境溫度較高時(shí)最多放置3天。如果是硫酸和磷酸，放 置時(shí)間則長(zhǎng)得多，冷藏條件下可以放置一個(gè)月。 堿性流動(dòng)相：添加氨水的流動(dòng)相，同上，最好當(dāng)天新配。 含有機(jī)溶劑的流動(dòng)相：流動(dòng)相含有一定比例的有機(jī)溶劑時(shí)， 可有效抑制細(xì)菌生長(zhǎng)，延長(zhǎng)使用時(shí)間，但有機(jī)溶劑易揮發(fā)， 應(yīng)避免高溫，密封保存。 緩