常用的生化反應(yīng)PPT課件

1、常用的生化反應(yīng) 常用的生化反應(yīng) 認(rèn)識染色方法鑒別細(xì)菌的局限性認(rèn)識染色方法鑒別細(xì)菌的局限性 掌握幾種常用生化反應(yīng)的原理、方法和結(jié)果判斷掌握幾種常用生化反應(yīng)的原理、方法和結(jié)果判斷 常用的生化反應(yīng) 產(chǎn)氣腸桿菌（產(chǎn)氣腸桿菌（Enterobacter arogenes） 大腸埃希菌（大腸埃希菌（Escherichia coli） 普通變形桿菌（普通變形桿菌（Proteus vulgaris） 銅綠假單胞菌（銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa） 常用的生化反應(yīng) 細(xì)菌對各種糖的分解能力及代謝產(chǎn)物不同，可借以鑒細(xì)菌對各種糖的分解能力及代謝產(chǎn)物不同，可借以鑒 別細(xì)菌。一般非致病菌能發(fā)酵多

2、種單糖，如大腸埃希菌能別細(xì)菌。一般非致病菌能發(fā)酵多種單糖，如大腸埃希菌能 分解葡萄糖和乳糖，產(chǎn)生甲酸等產(chǎn)物，并有甲酸脫氫酶，分解葡萄糖和乳糖，產(chǎn)生甲酸等產(chǎn)物，并有甲酸脫氫酶， 可將其分解為可將其分解為CO2和和H2，故生化反應(yīng)結(jié)果為產(chǎn)酸產(chǎn)氣，以，故生化反應(yīng)結(jié)果為產(chǎn)酸產(chǎn)氣，以 “ ”表示。傷寒沙門菌分解葡萄糖產(chǎn)酸，但無甲酸脫氫表示。傷寒沙門菌分解葡萄糖產(chǎn)酸，但無甲酸脫氫 酶，故生化結(jié)果為產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，以酶，故生化結(jié)果為產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，以“+”表示。傷寒沙門表示。傷寒沙門 菌不能分解乳糖，以菌不能分解乳糖，以“-”表示。表示。 常用的生化反應(yīng) 常用的生化反應(yīng) 將實(shí)驗(yàn)菌種接種到將實(shí)驗(yàn)菌種接種到2支支O-F

3、管中管中 在其中在其中1支管中加入無菌液體石蠟，厚度支管中加入無菌液體石蠟，厚度0.5cm左右。左右。 35培養(yǎng)培養(yǎng)18-24小時。小時。 結(jié)果結(jié)果 開口管開口管 加石蠟管加石蠟管 結(jié)果結(jié)果 黃色黃色 黃色黃色 發(fā)酵型（發(fā)酵型（F） 黃色黃色 綠色綠色 氧化型（氧化型（O） 綠色綠色 藍(lán)色藍(lán)色 產(chǎn)堿型產(chǎn)堿型 常用的生化反應(yīng) 產(chǎn)氣腸桿菌能使丙酮酸脫羧生成中性的乙酰甲基甲產(chǎn)氣腸桿菌能使丙酮酸脫羧生成中性的乙酰甲基甲 醇，乙酰甲基甲醇被氧化（在堿性溶液中）生成二乙酰，醇，乙酰甲基甲醇被氧化（在堿性溶液中）生成二乙酰， 后者可與含胍基的化合物反應(yīng)生成紅色化合物，稱后者可與含胍基的化合物反應(yīng)生成紅色化合

4、物，稱VPVP試試 驗(yàn)陽性。大腸埃希菌不能生成乙酰甲基甲醇，驗(yàn)陽性。大腸埃希菌不能生成乙酰甲基甲醇，VPVP陰性。陰性。 VPVP甲液：甲液：5%5%萘酚萘酚 VPVP乙液：乙液：40%KOH40%KOH 常用的生化反應(yīng) 常用的生化反應(yīng) 產(chǎn)氣腸桿菌使丙酮酸脫羧后形成中性產(chǎn)物，培養(yǎng)液產(chǎn)氣腸桿菌使丙酮酸脫羧后形成中性產(chǎn)物，培養(yǎng)液 pHpH5.45.4，甲基紅指示劑呈桔黃色，為甲基紅試驗(yàn)陰性，甲基紅指示劑呈桔黃色，為甲基紅試驗(yàn)陰性， 大腸埃希菌分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，培養(yǎng)液呈酸性大腸埃希菌分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，培養(yǎng)液呈酸性pHpH 5.45.4，指示劑甲基紅指示劑甲基紅呈紅色，稱甲基紅試驗(yàn)陽性。呈紅色

5、，稱甲基紅試驗(yàn)陽性。 常用的生化反應(yīng) 常用的生化反應(yīng) 能利用枸櫞酸鹽作為唯一碳源的細(xì)菌如產(chǎn)氣腸桿菌，能利用枸櫞酸鹽作為唯一碳源的細(xì)菌如產(chǎn)氣腸桿菌， 分解枸櫞酸鹽生成碳酸鹽，同時分解培養(yǎng)基的銨鹽生成氨，分解枸櫞酸鹽生成碳酸鹽，同時分解培養(yǎng)基的銨鹽生成氨， 由此使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性，使由此使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性，使指示劑溴麝香草酚藍(lán)（指示劑溴麝香草酚藍(lán)（BTBBTB） 由淡綠轉(zhuǎn)為深藍(lán)，此為枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)陽性。由淡綠轉(zhuǎn)為深藍(lán)，此為枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)陽性。 常用的生化反應(yīng) 常用的生化反應(yīng) 含有色氨酸酶的細(xì)菌（如大腸埃希菌、變形桿菌等）含有色氨酸酶的細(xì)菌（如大腸埃希菌、變形桿菌等） 可分解色氨酸生成吲哚（靛基質(zhì)）

6、，若加入對二甲基氨基可分解色氨酸生成吲哚（靛基質(zhì)），若加入對二甲基氨基 苯甲醛，與吲哚結(jié)合形成玫瑰吲哚，呈紅色，稱吲哚試驗(yàn)苯甲醛，與吲哚結(jié)合形成玫瑰吲哚，呈紅色，稱吲哚試驗(yàn) 陽性。陽性。 常用的生化反應(yīng) 常用的生化反應(yīng) 變形桿菌、乙型副傷寒沙門菌等能分解含硫氨基酸如變形桿菌、乙型副傷寒沙門菌等能分解含硫氨基酸如 胱氨酸、甲硫氨酸等，生成硫化氫。在有醋酸鉛或硫酸亞胱氨酸、甲硫氨酸等，生成硫化氫。在有醋酸鉛或硫酸亞 鐵存在時，則生成黑色硫化鉛或硫化亞鐵，可借以鑒別細(xì)鐵存在時，則生成黑色硫化鉛或硫化亞鐵，可借以鑒別細(xì) 菌。菌。 常用的生化反應(yīng) 常用的生化反應(yīng) 變形桿菌具有尿素酶，可分解尿素產(chǎn)生氨，培

7、養(yǎng)基變形桿菌具有尿素酶，可分解尿素產(chǎn)生氨，培養(yǎng)基 呈堿性，以酚紅為指示劑檢測呈紅色。呈堿性，以酚紅為指示劑檢測呈紅色。 常用的生化反應(yīng) 常用的生化反應(yīng) 吲哚（吲哚（I I）、甲基紅（）、甲基紅（M M）、）、VPVP（V V）、枸櫞酸鹽利用）、枸櫞酸鹽利用 （C C）四種試驗(yàn)，常用于鑒定腸道桿菌，合稱之為）四種試驗(yàn)，常用于鑒定腸道桿菌，合稱之為 IMViCIMViC試驗(yàn)試驗(yàn)。大腸埃希菌呈大腸埃希菌呈“+-”+-”，產(chǎn)氣腸桿菌為，產(chǎn)氣腸桿菌為 “-+”-+”。 常用的生化反應(yīng) 原理：硝酸鹽還原反應(yīng)包括兩個過程：一是在合成過程中，原理：硝酸鹽還原反應(yīng)包括兩個過程：一是在合成過程中， 硝酸鹽還原為亞

8、硝酸鹽和氨，再由氨轉(zhuǎn)化為氨基酸和細(xì)胞硝酸鹽還原為亞硝酸鹽和氨，再由氨轉(zhuǎn)化為氨基酸和細(xì)胞 內(nèi)其他含氮化合物；二是在分解代謝過程中，硝酸鹽或亞內(nèi)其他含氮化合物；二是在分解代謝過程中，硝酸鹽或亞 硝酸鹽代替氧作為呼吸酶系統(tǒng)中的終末受氫體。能使硝酸硝酸鹽代替氧作為呼吸酶系統(tǒng)中的終末受氫體。能使硝酸 鹽還原的細(xì)菌從硝酸鹽中獲得氧而形成亞硝酸鹽和其他還鹽還原的細(xì)菌從硝酸鹽中獲得氧而形成亞硝酸鹽和其他還 原性產(chǎn)物。原性產(chǎn)物。 常用的生化反應(yīng) 硝酸鹽還原的過程因細(xì)菌不同而異硝酸鹽還原的過程因細(xì)菌不同而異: 有的細(xì)菌僅使硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，如大腸埃希菌；有的細(xì)菌僅使硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，如大腸埃希菌； 有的細(xì)

9、菌則可使其還原為亞硝酸鹽和離子態(tài)的銨；有的細(xì)菌則可使其還原為亞硝酸鹽和離子態(tài)的銨； 有的細(xì)菌能使硝酸鹽或亞硝酸鹽還原為氮，如假單胞有的細(xì)菌能使硝酸鹽或亞硝酸鹽還原為氮，如假單胞 菌等。菌等。 硝酸鹽還原試驗(yàn)系測定還原過程中所產(chǎn)生的亞硝硝酸鹽還原試驗(yàn)系測定還原過程中所產(chǎn)生的亞硝 酸。酸。 常用的生化反應(yīng) 試劑：甲液試劑：甲液 對氨基苯磺酸對氨基苯磺酸 乙液乙液 -奈胺奈胺 結(jié)果：出現(xiàn)紅色為陽性。結(jié)果：出現(xiàn)紅色為陽性。 若加入試劑后無顏色反應(yīng)，可能是：硝酸鹽沒有被還原，若加入試劑后無顏色反應(yīng)，可能是：硝酸鹽沒有被還原， 試驗(yàn)陰性；硝酸鹽被還原為氨和氮等其他產(chǎn)物而導(dǎo)致假試驗(yàn)陰性；硝酸鹽被還原為氨和氮

10、等其他產(chǎn)物而導(dǎo)致假 陰性結(jié)果，這時應(yīng)在試管內(nèi)加入少許鋅粉，如出現(xiàn)紅色則陰性結(jié)果，這時應(yīng)在試管內(nèi)加入少許鋅粉，如出現(xiàn)紅色則 表明試驗(yàn)確實(shí)為陰性。若仍不產(chǎn)生紅色，表示試驗(yàn)為假陰表明試驗(yàn)確實(shí)為陰性。若仍不產(chǎn)生紅色，表示試驗(yàn)為假陰 性。性。 若要檢查是否有氮?dú)猱a(chǎn)生，可在培養(yǎng)基管內(nèi)加一小倒管，若要檢查是否有氮?dú)猱a(chǎn)生，可在培養(yǎng)基管內(nèi)加一小倒管， 如有氣泡產(chǎn)生，表示有氮?dú)馍伞Ｈ缬袣馀莓a(chǎn)生，表示有氮?dú)馍伞?常用的生化反應(yīng) 原理：具有過氧化氫酶的細(xì)菌，能催化過氧化氫生成水和原理：具有過氧化氫酶的細(xì)菌，能催化過氧化氫生成水和 新生態(tài)氧，繼而形成分子氧出現(xiàn)氣泡。新生態(tài)氧，繼而形成分子氧出現(xiàn)氣泡。 試劑：試劑：3

11、 3過氧化氫溶液。過氧化氫溶液。 方法：取待測菌涂在玻片上，然后加方法：取待測菌涂在玻片上，然后加3 3過氧化氫數(shù)滴立過氧化氫數(shù)滴立 即觀察結(jié)果。即觀察結(jié)果。 結(jié)果：有大量氣泡產(chǎn)生者為陽性。不產(chǎn)生氣泡者為陰性。結(jié)果：有大量氣泡產(chǎn)生者為陽性。不產(chǎn)生氣泡者為陰性。 常用的生化反應(yīng) 原理：氧化酶（細(xì)胞色素氧化酶）是細(xì)胞色素呼吸酶系統(tǒng)的原理：氧化酶（細(xì)胞色素氧化酶）是細(xì)胞色素呼吸酶系統(tǒng)的 最終呼吸酶。具有氧化酶的細(xì)菌，首先使細(xì)胞色素最終呼吸酶。具有氧化酶的細(xì)菌，首先使細(xì)胞色素C C氧化，氧化， 再由氧化型細(xì)胞色素再由氧化型細(xì)胞色素C C使對苯二胺氧化，生成有色的醌類化使對苯二胺氧化，生成有色的醌類化

12、合物。合物。 試劑：試劑：1 1鹽酸四甲基對苯二胺或鹽酸四甲基對苯二胺或1 1鹽酸二甲基對苯二胺。鹽酸二甲基對苯二胺。 方法：取潔凈濾紙一小塊，沾取菌少許，然后加試劑。方法：取潔凈濾紙一小塊，沾取菌少許，然后加試劑。 結(jié)果：細(xì)菌在與試劑接觸結(jié)果：細(xì)菌在與試劑接觸1010秒內(nèi)呈深紫色，為陽性。秒內(nèi)呈深紫色，為陽性。 常用的生化反應(yīng) 葡萄糖葡萄糖 乳糖乳糖1 10 鐵：枸櫞酸鐵銨鐵：枸櫞酸鐵銨 指示劑：酚紅指示劑：酚紅 我們?nèi)藶榈陌迅邔哟砥咸烟?，斜面代表乳糖。我們?nèi)藶榈陌迅邔哟砥咸烟?，斜面代表乳糖?常用的生化反應(yīng) 常用的生化反應(yīng) 以葡萄糖，乳糖為例以葡萄糖，乳糖為例 葡萄糖是最早利用的單糖，

13、發(fā)酵葡萄糖的中間產(chǎn)葡萄糖是最早利用的單糖，發(fā)酵葡萄糖的中間產(chǎn) 物丙酮酸為酸性，酚紅指示劑為黃色。物丙酮酸為酸性，酚紅指示劑為黃色。 常用的生化反應(yīng) 1 1、斜面生長的菌量多，面積大，跟氧分子接觸的面積也、斜面生長的菌量多，面積大，跟氧分子接觸的面積也 大大 氧化氧化 丙酮酸丙酮酸 COCO2 2H H2 2O O中性，中性，PHPH不變不變 2 2、斜面蛋白質(zhì)被細(xì)菌利用，氨基酸被利用產(chǎn)生、斜面蛋白質(zhì)被細(xì)菌利用，氨基酸被利用產(chǎn)生NHNH3 3，堿性，堿性， 酚紅指示劑為紅色。酚紅指示劑為紅色。 常用的生化反應(yīng) 高層中丙酮酸濃度高，跟氧分子接觸少，在高層中丙酮酸濃度高，跟氧分子接觸少，在2424小

14、時內(nèi)小時內(nèi) 不會被氧化，因此仍為黃色。不會被氧化，因此仍為黃色。 常用的生化反應(yīng) 高層黃色斜面紅色高層黃色斜面紅色 常用的生化反應(yīng) 如葡萄糖，乳糖，則高層與斜面均為黃色（如葡萄糖，乳糖，則高層與斜面均為黃色（2424小時小時 內(nèi)）。內(nèi)）。 如果延長培養(yǎng)時間，高層中的丙酮酸也會進(jìn)一步氧化，同如果延長培養(yǎng)時間，高層中的丙酮酸也會進(jìn)一步氧化，同 時細(xì)菌利用蛋白質(zhì)后產(chǎn)堿性物質(zhì)越來越多，則高層也會變時細(xì)菌利用蛋白質(zhì)后產(chǎn)堿性物質(zhì)越來越多，則高層也會變 為紅色。為紅色。 常用的生化反應(yīng) 有些細(xì)菌能分解含硫氨基酸如胱氨酸、甲硫氨酸等，有些細(xì)菌能分解含硫氨基酸如胱氨酸、甲硫氨酸等， 生成硫化氫生成硫化氫 H H

15、2 2S SFeFe 黑色的硫化亞鐵黑色的硫化亞鐵 常用的生化反應(yīng) 問：有無葡萄糖，乳糖的情況？為什么？問：有無葡萄糖，乳糖的情況？為什么？ 常用的生化反應(yīng) 半固體半固體 M M代表動力代表動力 I I代表吲哚（靛基質(zhì)）代表吲哚（靛基質(zhì)） U U代表尿素代表尿素 結(jié)果觀察時先觀察有無動力，試驗(yàn)管有無變紅（三分之二結(jié)果觀察時先觀察有無動力，試驗(yàn)管有無變紅（三分之二 管變紅為尿素陽性），然后加入管變紅為尿素陽性），然后加入對二甲基氨基苯甲醛，觀對二甲基氨基苯甲醛，觀 察吲哚試驗(yàn)結(jié)果。察吲哚試驗(yàn)結(jié)果。 常用的生化反應(yīng) 思考題：思考題： KIA的試驗(yàn)原理的試驗(yàn)原理 常用的生化反應(yīng) 1 1、用革蘭染色法觀察四種試驗(yàn)細(xì)菌的形態(tài)學(xué)特征、用革蘭染色法觀察四種試驗(yàn)細(xì)菌