廣州工商培訓(xùn)-菌落總數(shù)

1、筑食品安全長(zhǎng)城，保中華民族真元筑食品安全長(zhǎng)城，保中華民族真元食食 品品 快快 篩篩 技技 術(shù)術(shù) 廣州達(dá)元食品安全技術(shù)有限公司廣州達(dá)元食品安全技術(shù)有限公司筑食品安全長(zhǎng)城，保中華民族真元筑食品安全長(zhǎng)城，保中華民族真元菌落總數(shù)測(cè)試片筑食品安全長(zhǎng)城，保中華民族真元筑食品安全長(zhǎng)城，保中華民族真元 菌落總數(shù)是指樣品經(jīng)過(guò)處理，在一定條件下培養(yǎng)菌落總數(shù)是指樣品經(jīng)過(guò)處理，在一定條件下培養(yǎng)后所得后所得1mL(g)檢樣或單位面積樣品中所含菌落的檢樣或單位面積樣品中所含菌落的總數(shù)，是最常用的微生物檢測(cè)項(xiàng)目?？倲?shù)，是最常用的微生物檢測(cè)項(xiàng)目。 菌落總數(shù)測(cè)試片含有標(biāo)準(zhǔn)的營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基，冷水可菌落總數(shù)測(cè)試片含有標(biāo)準(zhǔn)的營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基，

2、冷水可溶性的吸水凝膠和脫氫酶指示劑氯化三苯基四氮溶性的吸水凝膠和脫氫酶指示劑氯化三苯基四氮唑（唑（TTC），菌落在測(cè)試片上呈紅色，這樣可縮），菌落在測(cè)試片上呈紅色，這樣可縮短計(jì)數(shù)時(shí)間和增強(qiáng)計(jì)數(shù)效果。短計(jì)數(shù)時(shí)間和增強(qiáng)計(jì)數(shù)效果。 適合于各類食品及食品原料中菌落總數(shù)的測(cè)定，適合于各類食品及食品原料中菌落總數(shù)的測(cè)定，也可用于檢測(cè)食品加工容器、操作臺(tái)和其他設(shè)備也可用于檢測(cè)食品加工容器、操作臺(tái)和其他設(shè)備表面的菌落總數(shù)。表面的菌落總數(shù)。原理筑食品安全長(zhǎng)城，保中華民族真元筑食品安全長(zhǎng)城，保中華民族真元 樣品處理：樣品處理：取樣品取樣品25mL（g）放入含有）放入含有225mL滅滅菌磷酸緩沖液稀釋液（或生理鹽水

3、）的取樣罐或菌磷酸緩沖液稀釋液（或生理鹽水）的取樣罐或均質(zhì)杯內(nèi)，制成均質(zhì)杯內(nèi)，制成1:10的樣品勻液，必要時(shí)用的樣品勻液，必要時(shí)用1mol/LNaOH或或1mol/LHCl溶液調(diào)節(jié)樣品勻液溶液調(diào)節(jié)樣品勻液pH至至6.67.2。用。用1mL滅菌吸管吸取滅菌吸管吸取1:10樣品勻液樣品勻液1mL，注入含有，注入含有9mL稀釋液的試管內(nèi)，振搖后成稀釋液的試管內(nèi)，振搖后成為為1:100的樣品勻液，以此類推，做出的樣品勻液，以此類推，做出1:1000等等稀釋度的樣品勻液，每次換一支吸管。稀釋度的樣品勻液，每次換一支吸管。操作方法筑食品安全長(zhǎng)城，保中華民族真元筑食品安全長(zhǎng)城，保中華民族真元 接種：接種：一

4、般食品選一般食品選23個(gè)稀釋度進(jìn)行檢測(cè)，含菌個(gè)稀釋度進(jìn)行檢測(cè)，含菌量少的液體樣品（如飲用純水和礦泉水等）可直量少的液體樣品（如飲用純水和礦泉水等）可直接吸取原液進(jìn)行檢測(cè)。將菌落總數(shù)測(cè)試片接吸取原液進(jìn)行檢測(cè)。將菌落總數(shù)測(cè)試片（BB202）置于平坦實(shí)驗(yàn)臺(tái)面，揭開(kāi)上層膜，用）置于平坦實(shí)驗(yàn)臺(tái)面，揭開(kāi)上層膜，用無(wú)菌吸管吸取無(wú)菌吸管吸取1mL樣品勻液慢慢均勻地滴加到紙樣品勻液慢慢均勻地滴加到紙片上，然后再將上層膜緩慢蓋下，靜置片上，然后再將上層膜緩慢蓋下，靜置10s左右左右使培養(yǎng)基凝固，每個(gè)稀釋度接種兩片。同時(shí)做一使培養(yǎng)基凝固，每個(gè)稀釋度接種兩片。同時(shí)做一片空白陰性對(duì)照。片空白陰性對(duì)照。操作方法筑食品安全

5、長(zhǎng)城，保中華民族真元筑食品安全長(zhǎng)城，保中華民族真元 培養(yǎng)：培養(yǎng)：將測(cè)試片疊在一起放回原自封袋中將測(cè)試片疊在一起放回原自封袋中并封口，透明面朝上水平置于恒溫培養(yǎng)箱并封口，透明面朝上水平置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，堆疊片數(shù)不超過(guò)內(nèi)，堆疊片數(shù)不超過(guò)12片。一般食品培養(yǎng)片。一般食品培養(yǎng)溫度為溫度為361，培養(yǎng)，培養(yǎng)1524h；水產(chǎn)品；水產(chǎn)品培養(yǎng)溫度為培養(yǎng)溫度為301，培養(yǎng)，培養(yǎng)48h。操作方法筑食品安全長(zhǎng)城，保中華民族真元筑食品安全長(zhǎng)城，保中華民族真元表面取樣方法 加加1mL滅菌磷酸緩沖液（或生理鹽水）在滅菌磷酸緩沖液（或生理鹽水）在測(cè)試片上，至少靜置測(cè)試片上，至少靜置10S，使培養(yǎng)基凝固；，使培養(yǎng)基凝固；提起

6、上層膜，使中央濾紙部分貼到待測(cè)物提起上層膜，使中央濾紙部分貼到待測(cè)物表面，用手在外側(cè)輕壓；然后將上蓋膜合表面，用手在外側(cè)輕壓；然后將上蓋膜合上，置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。上，置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。筑食品安全長(zhǎng)城，保中華民族真元筑食品安全長(zhǎng)城，保中華民族真元結(jié)果判讀 細(xì)菌在測(cè)試片上生長(zhǎng)后會(huì)顯示紅色斑點(diǎn)，選擇細(xì)菌在測(cè)試片上生長(zhǎng)后會(huì)顯示紅色斑點(diǎn)，選擇菌落數(shù)適中（菌落數(shù)適中（30300個(gè)）的測(cè)試片進(jìn)行計(jì)數(shù)，個(gè)）的測(cè)試片進(jìn)行計(jì)數(shù)，乘以稀釋倍數(shù)后即為每毫升（或每克）樣品中乘以稀釋倍數(shù)后即為每毫升（或每克）樣品中所含的細(xì)菌菌落總數(shù)。所含的細(xì)菌菌落總數(shù)。筑食品安全長(zhǎng)城，保中華民族真元筑食品安全長(zhǎng)城，保中華民族真元若只有一個(gè)稀

7、釋度紙片上的菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)，計(jì)算兩個(gè)紙片若只有一個(gè)稀釋度紙片上的菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)，計(jì)算兩個(gè)紙片菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)，作為每毫升菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)，作為每毫升(或克或克)樣品中菌落總數(shù)結(jié)果。樣品中菌落總數(shù)結(jié)果。若有兩個(gè)連續(xù)稀釋度的紙片菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)時(shí)，按以下公式若有兩個(gè)連續(xù)稀釋度的紙片菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)時(shí)，按以下公式計(jì)算計(jì)算:式中：式中：N樣品中菌落數(shù)；樣品中菌落數(shù)；C測(cè)試片上測(cè)試片上(含適宜范圍菌落數(shù)的測(cè)試片含適宜范圍菌落數(shù)的測(cè)試片)菌落數(shù)之和；菌落數(shù)之和；n1第一個(gè)適宜稀釋度測(cè)試片數(shù)；第一個(gè)適宜稀釋度測(cè)試片數(shù)；n2第二個(gè)

8、適宜稀釋度測(cè)試片數(shù)；第二個(gè)適宜稀釋度測(cè)試片數(shù)；d稀釋因子稀釋因子(第一稀釋度第一稀釋度)。計(jì)數(shù)原則筑食品安全長(zhǎng)城，保中華民族真元筑食品安全長(zhǎng)城，保中華民族真元計(jì)數(shù)原則 示例：示例： 上述數(shù)據(jù)經(jīng)上述數(shù)據(jù)經(jīng)“四舍五入四舍五入”后，表示后，表示25000或或2.5104。筑食品安全長(zhǎng)城，保中華民族真元筑食品安全長(zhǎng)城，保中華民族真元計(jì)數(shù)原則 若所有的稀釋度菌落總數(shù)均大于若所有的稀釋度菌落總數(shù)均大于300CFU，則對(duì)，則對(duì)稀釋度最高的測(cè)試片進(jìn)行計(jì)數(shù)，其他測(cè)試片可記稀釋度最高的測(cè)試片進(jìn)行計(jì)數(shù)，其他測(cè)試片可記錄為多不可計(jì)，結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋錄為多不可計(jì)，結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)計(jì)算。倍數(shù)計(jì)

9、算。 若所有的稀釋度菌落總數(shù)均小于若所有的稀釋度菌落總數(shù)均小于30CFU，則應(yīng)按，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算。稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算。 若所有的稀釋度（包括液體樣品原液）均無(wú)菌落若所有的稀釋度（包括液體樣品原液）均無(wú)菌落生長(zhǎng)，則以小于生長(zhǎng)，則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)計(jì)算。乘以最低稀釋倍數(shù)計(jì)算。 若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30CFU300CFU之間，其中一部分小于之間，其中一部分小于30CFU或大于或大于300CFU，則以最接近，則以最接近30CFU或或300CFU的平均菌的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算。落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算。筑食

10、品安全長(zhǎng)城，保中華民族真元筑食品安全長(zhǎng)城，保中華民族真元報(bào)告方式 菌落總數(shù)在菌落總數(shù)在100CFU以內(nèi)時(shí)，按以內(nèi)時(shí)，按“四舍五入四舍五入”原原則修約，采用兩位有效數(shù)字報(bào)告。則修約，采用兩位有效數(shù)字報(bào)告。 大于或等于大于或等于100CFU時(shí)，第三位數(shù)字采用時(shí)，第三位數(shù)字采用“四舍四舍五入五入”原則修約后，取前兩位數(shù)字，后面的原則修約后，取前兩位數(shù)字，后面的0代代替位數(shù)，也可用替位數(shù)，也可用10的指數(shù)形式來(lái)表示，按的指數(shù)形式來(lái)表示，按“四舍四舍五入五入”原則修約后，采用兩位有效數(shù)字。原則修約后，采用兩位有效數(shù)字。 若測(cè)試片上一片紅色無(wú)法計(jì)數(shù)時(shí)，則報(bào)告多不可若測(cè)試片上一片紅色無(wú)法計(jì)數(shù)時(shí)，則報(bào)告多不可

11、計(jì)。計(jì)。 若空白對(duì)照上有菌落生長(zhǎng)，則此次檢測(cè)結(jié)果無(wú)效。若空白對(duì)照上有菌落生長(zhǎng)，則此次檢測(cè)結(jié)果無(wú)效。 稱重取樣以稱重取樣以CFU/g為單位報(bào)告，體積取樣以為單位報(bào)告，體積取樣以CFU/mL為單位報(bào)告。為單位報(bào)告。筑食品安全長(zhǎng)城，保中華民族真元筑食品安全長(zhǎng)城，保中華民族真元符合率 菌落總數(shù)測(cè)試片檢測(cè)結(jié)果與傳統(tǒng)平板計(jì)數(shù)菌落總數(shù)測(cè)試片檢測(cè)結(jié)果與傳統(tǒng)平板計(jì)數(shù)瓊脂平板法符合率可達(dá)瓊脂平板法符合率可達(dá)80以上，山東省以上，山東省疾病預(yù)防控制中心進(jìn)行的驗(yàn)證試驗(yàn)表明，疾病預(yù)防控制中心進(jìn)行的驗(yàn)證試驗(yàn)表明，24h計(jì)數(shù)測(cè)試片上菌落數(shù)為平板菌落數(shù)的計(jì)數(shù)測(cè)試片上菌落數(shù)為平板菌落數(shù)的87。筑食品安全長(zhǎng)城，保中華民族真元筑食

12、品安全長(zhǎng)城，保中華民族真元試劑配制 緩沖液：稱取緩沖液：稱取34.0g的磷酸二氫鉀溶于的磷酸二氫鉀溶于500mL蒸蒸餾水中，用大約餾水中，用大約175mL的的1mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)節(jié)pH至至7.2，用蒸餾水稀釋至，用蒸餾水稀釋至1000mL后貯存于冰后貯存于冰箱。箱。 稀釋液：取貯存液稀釋液：取貯存液1.25mL，用蒸餾水稀釋至，用蒸餾水稀釋至1000mL，分裝于適宜容器中，分裝于適宜容器中，121高壓滅菌高壓滅菌15分鐘，或者放入消毒碗柜中消毒。分鐘，或者放入消毒碗柜中消毒。 生理鹽水的配制與滅菌：取生理鹽水的配制與滅菌：取8.5g分析純氯化鈉分析純氯化鈉（NaCl）溶解到）溶解到1000mL蒸餾水或純