第二章植物組織培養(yǎng)(園藝)課件

1、1第二章第二章 植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室和基本技術(shù)植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室和基本技術(shù)2.1 2.1 組培實(shí)驗(yàn)室及基本設(shè)備組培實(shí)驗(yàn)室及基本設(shè)備 2.1.1 2.1.1 組培實(shí)驗(yàn)室的組成及其功能組培實(shí)驗(yàn)室的組成及其功能 2.1.1.1 2.1.1.1 準(zhǔn)備室（基本操作實(shí)驗(yàn)室）準(zhǔn)備室（基本操作實(shí)驗(yàn)室）基本功能基本功能常用儀器和設(shè)備常用儀器和設(shè)備 22.1.1.2 2.1.1.2 無菌操作室無菌操作室功能功能組成組成緩沖室（間）：緩沖室（間）：接種室（間）：接種室（間）：無菌操作室的消毒無菌操作室的消毒主要設(shè)備主要設(shè)備超凈工作臺超凈工作臺金屬器械消毒器金屬器械消毒器32.1.1.3 2.1.1.3 培養(yǎng)室培養(yǎng)室功

2、能功能主要設(shè)備主要設(shè)備環(huán)境條件環(huán)境條件 2.1.1.4 2.1.1.4 溫室溫室功能功能452.1.2 2.1.2 組培實(shí)驗(yàn)室的布局組培實(shí)驗(yàn)室的布局 2.1.2.1 2.1.2.1 布局基本要求布局基本要求便于隔離，便于操作，便于滅菌和便于觀察。便于隔離，便于操作，便于滅菌和便于觀察。 2.1.2.2 2.1.2.2 基本布局規(guī)律基本布局規(guī)律根據(jù)實(shí)驗(yàn)操作程序排列實(shí)驗(yàn)室；根據(jù)實(shí)驗(yàn)操作程序排列實(shí)驗(yàn)室；接種室和培養(yǎng)室設(shè)在與外界環(huán)境隔離性好的區(qū)接種室和培養(yǎng)室設(shè)在與外界環(huán)境隔離性好的區(qū)域；域；滅菌室與接種室相鄰；滅菌室與接種室相鄰；其他實(shí)驗(yàn)室的布局可根據(jù)條件，以方便使用為其他實(shí)驗(yàn)室的布局可根據(jù)條件，以方

3、便使用為宜宜。6培培 養(yǎng)養(yǎng) 室室準(zhǔn)準(zhǔn) 備備 室室滅菌室滅菌室儲藏室儲藏室接種室接種室緩沖室緩沖室植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室布局示意圖植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室布局示意圖72.1.2.3 2.1.2.3 設(shè)計(jì)組培實(shí)驗(yàn)室時(shí)的注意事項(xiàng)設(shè)計(jì)組培實(shí)驗(yàn)室時(shí)的注意事項(xiàng)為了減少污染，實(shí)驗(yàn)室最好設(shè)一走廊且走廊為了減少污染，實(shí)驗(yàn)室最好設(shè)一走廊且走廊上方最好安裝紫外燈；上方最好安裝紫外燈；培養(yǎng)室最好設(shè)在南面，設(shè)大玻璃窗，以雙層培養(yǎng)室最好設(shè)在南面，設(shè)大玻璃窗，以雙層玻璃窗為最好。如果培養(yǎng)室是設(shè)在房屋的邊玻璃窗為最好。如果培養(yǎng)室是設(shè)在房屋的邊側(cè)，其東邊或西邊的墻上也可設(shè)置大玻璃窗；側(cè)，其東邊或西邊的墻上也可設(shè)置大玻璃窗；培養(yǎng)室房間及門

4、要小，而且密閉性要好，最培養(yǎng)室房間及門要小，而且密閉性要好，最好裝移門；好裝移門；無菌操作室要小，要設(shè)緩沖間，也最好裝移無菌操作室要小，要設(shè)緩沖間，也最好裝移門，且門要稍大一些。門，且門要稍大一些。82.1.3 2.1.3 組培實(shí)驗(yàn)室的基本設(shè)備組培實(shí)驗(yàn)室的基本設(shè)備 2.1.3.1 2.1.3.1 器皿和器械類器皿和器械類玻璃器皿玻璃器皿器械器械鑷子類鑷子類解剖刀解剖刀剪刀剪刀接種針接種針細(xì)菌過濾器細(xì)菌過濾器 2.1.2.2 2.1.2.2 儀器設(shè)備儀器設(shè)備 無菌操作設(shè)備無菌操作設(shè)備超凈工作臺超凈工作臺9高壓蒸汽滅菌器高壓蒸汽滅菌器10電熱烘箱電熱烘箱接種器具消毒器接種器具消毒器1112培養(yǎng)設(shè)備

5、培養(yǎng)設(shè)備空調(diào)空調(diào)加濕器和去濕機(jī)加濕器和去濕機(jī)定時(shí)器定時(shí)器培養(yǎng)架培養(yǎng)架搖床或旋轉(zhuǎn)床搖床或旋轉(zhuǎn)床培養(yǎng)箱培養(yǎng)箱藥品貯存和配制儀器設(shè)備藥品貯存和配制儀器設(shè)備冰箱冰箱天平天平酸度計(jì)酸度計(jì)觀察分析儀器設(shè)備觀察分析儀器設(shè)備體視顯微鏡體視顯微鏡普通光學(xué)顯微鏡普通光學(xué)顯微鏡倒置顯微鏡倒置顯微鏡其它儀器設(shè)備其它儀器設(shè)備離心機(jī)離心機(jī)恒溫水浴鍋恒溫水浴鍋13142.2 2.2 培養(yǎng)基培養(yǎng)基組培中培養(yǎng)基的重要性：組培中培養(yǎng)基的重要性：基本培養(yǎng)基：基本培養(yǎng)基：指只含有維持離體植物細(xì)胞基指只含有維持離體植物細(xì)胞基本生命活動所需的營養(yǎng)成分的培養(yǎng)基。通常本生命活動所需的營養(yǎng)成分的培養(yǎng)基。通常包括水分、無機(jī)營養(yǎng)成分和有機(jī)營養(yǎng)成分

6、，包括水分、無機(jī)營養(yǎng)成分和有機(jī)營養(yǎng)成分，不包括激素和天然有機(jī)附加物。不包括激素和天然有機(jī)附加物。完全培養(yǎng)基：完全培養(yǎng)基：指在基本培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上另外指在基本培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上另外附加激素或天然有機(jī)附加物所組成的培養(yǎng)基。附加激素或天然有機(jī)附加物所組成的培養(yǎng)基。152.2.1 2.2.1 培養(yǎng)基的構(gòu)成培養(yǎng)基的構(gòu)成 2.2.1.1 2.2.1.1 水水 2.2.1.2 2.2.1.2 無機(jī)鹽類無機(jī)鹽類大量元素化合物大量元素化合物微量元素化合物微量元素化合物 2.2.1.3 2.2.1.3 有機(jī)營養(yǎng)成分有機(jī)營養(yǎng)成分糖類糖類維生素類維生素類氨基酸類氨基酸類16 2.2.1.4 2.2.1.4 植物生長調(diào)節(jié)劑植

7、物生長調(diào)節(jié)劑1 1、生長素類、生長素類常用類型：常用類型：NAA,2,4-D,IBA,IAA功能功能培養(yǎng)基中常用濃度：培養(yǎng)基中常用濃度：1010-7-71010-5-5mol/L或或0.10.11010mg/L2 2、細(xì)胞分裂素類、細(xì)胞分裂素類常用類型：常用類型：6-BA,KT.TDZ,2-ip功能功能培養(yǎng)基中常用濃度：培養(yǎng)基中常用濃度： 1010-7-71010-5-5mol/L或或0.10.11010mg/L1718 3 3、組織培養(yǎng)時(shí)，植物激素的使用規(guī)律、組織培養(yǎng)時(shí)，植物激素的使用規(guī)律 在生長素存在的條件下，細(xì)胞分裂在生長素存在的條件下，細(xì)胞分裂素的作用有加強(qiáng)的趨勢，但二者在使用素的作用

8、有加強(qiáng)的趨勢，但二者在使用上有一定的順序關(guān)系，處理順序不同，上有一定的順序關(guān)系，處理順序不同，培養(yǎng)物的分化狀態(tài)也不同。規(guī)律如下：培養(yǎng)物的分化狀態(tài)也不同。規(guī)律如下： 先用生長素處理，后用細(xì)胞分先用生長素處理，后用細(xì)胞分裂素處理，有利于細(xì)胞分裂，但細(xì)胞不裂素處理，有利于細(xì)胞分裂，但細(xì)胞不容易分化容易分化, ,容易產(chǎn)生多倍體細(xì)胞。容易產(chǎn)生多倍體細(xì)胞。 先用細(xì)胞分裂素處理，后用生長先用細(xì)胞分裂素處理，后用生長素處理，細(xì)胞分裂也分化。素處理，細(xì)胞分裂也分化。 用生長素和細(xì)胞分裂素同時(shí)處理，用生長素和細(xì)胞分裂素同時(shí)處理，細(xì)胞脫分化后分化頻率提高。但二者的細(xì)胞脫分化后分化頻率提高。但二者的使用濃度比值可以決

9、定器官分化方向：使用濃度比值可以決定器官分化方向：生長素生長素/ /細(xì)胞分裂素比值高時(shí)，有利于細(xì)胞分裂素比值高時(shí)，有利于根分化，抑制芽形成。反之，有利于芽根分化，抑制芽形成。反之，有利于芽分化，抑制根形成。比值適中時(shí)，促進(jìn)分化，抑制根形成。比值適中時(shí)，促進(jìn)愈傷組織的形成和生長。愈傷組織的形成和生長。19202.2.1.5 2.2.1.5 天然有機(jī)添加物質(zhì)天然有機(jī)添加物質(zhì)椰汁：椰汁：CM 100 100150ml/L150ml/L酵母提取液：酵母提取液：YE 0.01% 0.01%0.5%0.5%番茄汁：番茄汁：5% 5% 10%10%馬鈴薯汁：馬鈴薯汁：100g/L 100g/L 200g/L

10、200g/L香蕉泥（汁）：香蕉泥（汁）：150mg/L 150mg/L 200mg/L200mg/L2.2.1.6 2.2.1.6 培養(yǎng)基的培養(yǎng)基的pHpH值值滅菌前滅菌前pHpH值調(diào)控范圍：值調(diào)控范圍：pH=5.7pH=5.75.85.8pHpH對培養(yǎng)基凝固的影響對培養(yǎng)基凝固的影響pHpH調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)劑2.2.1.72.2.1.7凝固劑凝固劑 瓊脂：瓊脂： 用量范圍：用量范圍：3 310g/L10g/L 影響瓊脂凝固的因素影響瓊脂凝固的因素 GelriteGelrite：植物凝膠：植物凝膠2.2.1.8 2.2.1.8 其他添加物其他添加物活性炭（活性炭（ACAC）、維生素）、維生素C C、抗

11、生素等、抗生素等21222.2.2 2.2.2 基本培養(yǎng)基的選擇基本培養(yǎng)基的選擇 2.2.2.1 2.2.2.1 基本培養(yǎng)基的類型基本培養(yǎng)基的類型高無機(jī)鹽含量的培養(yǎng)基高無機(jī)鹽含量的培養(yǎng)基代表類型：代表類型：MSMS，LSLS，BLBL，ERER硝酸鉀含量較高的培養(yǎng)基硝酸鉀含量較高的培養(yǎng)基代表類型：代表類型：B5B5，N6N6，SHSH中等無機(jī)鹽含量的培養(yǎng)基中等無機(jī)鹽含量的培養(yǎng)基代表類型：代表類型：NitschNitsch，MillerMiller，H H低無機(jī)鹽含量的培養(yǎng)基低無機(jī)鹽含量的培養(yǎng)基代表類型：代表類型：WhiteWhite，WSWS，HEHE 2.2.2.2 2.2.2.2 基本培養(yǎng)

12、基的選擇基本培養(yǎng)基的選擇MSMS培養(yǎng)基培養(yǎng)基B B5 5培養(yǎng)基培養(yǎng)基N N6 6培養(yǎng)基培養(yǎng)基改良的改良的WhiteWhite培養(yǎng)基培養(yǎng)基WPMWPM培養(yǎng)基培養(yǎng)基 培養(yǎng)基是否適合所培養(yǎng)的植物，必須通過試驗(yàn)進(jìn)行篩選。23242.2.3 2.2.3 培養(yǎng)基的配制培養(yǎng)基的配制 母液稀釋法母液稀釋法 2.2.3.1 2.2.3.1 培養(yǎng)基母液的配制和保存培養(yǎng)基母液的配制和保存 1 1、基本培養(yǎng)基母液的配制、基本培養(yǎng)基母液的配制 單配法單配法 混配法混配法 按照避免難溶性沉淀形成的原按照避免難溶性沉淀形成的原則和物質(zhì)種類的不同，將基本培養(yǎng)基則和物質(zhì)種類的不同，將基本培養(yǎng)基配方所包括的物質(zhì)進(jìn)行分組；配方所包

13、括的物質(zhì)進(jìn)行分組；25 基本培養(yǎng)基配方中物質(zhì)劃分組數(shù)的多基本培養(yǎng)基配方中物質(zhì)劃分組數(shù)的多少，即配制母液數(shù)的多少可根據(jù)實(shí)際情況而少，即配制母液數(shù)的多少可根據(jù)實(shí)際情況而定，如定，如MSMS培養(yǎng)基可以配制三液式、四液式、培養(yǎng)基可以配制三液式、四液式、五液式等；五液式等；例如：例如：MSMS培養(yǎng)基五液式培養(yǎng)基五液式大量元素母液大量元素母液鈣鹽母液鈣鹽母液微量元素母液微量元素母液鐵鹽母液鐵鹽母液有機(jī)營養(yǎng)成分母液有機(jī)營養(yǎng)成分母液 26 2 2、激素母液的配制、激素母液的配制 激素母液的濃度激素母液的濃度 1 110mmol/L10mmol/L或或0.10.11mg/L1mg/L 配制方法配制方法 生長素類

14、生長素類 細(xì)胞分裂素類細(xì)胞分裂素類 培養(yǎng)基的保存培養(yǎng)基的保存27 2.2.3.2 2.2.3.2 培養(yǎng)基的配制培養(yǎng)基的配制 水水準(zhǔn)備準(zhǔn)備 母液母液 混合定容混合定容 調(diào)調(diào)pH 加入瓊脂加入瓊脂 糖糖 加熱溶解加熱溶解 培養(yǎng)器皿培養(yǎng)器皿 清洗清洗 干燥干燥 分裝分裝 封口封口 高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌 冷卻冷卻 凝固凝固 接種接種培養(yǎng)基具體配制操作過程：培養(yǎng)基具體配制操作過程：P P2121培培 養(yǎng)養(yǎng) 基基 配配 制制 程程 序序 282.3 2.3 組培實(shí)驗(yàn)基本操作技術(shù)組培實(shí)驗(yàn)基本操作技術(shù) 2.3.1 2.3.1 器皿和器具的洗滌器皿和器具的洗滌 P P19191.1.洗滌劑：洗滌劑：無磷中性

15、的肥皂粉、洗衣粉和無磷中性的肥皂粉、洗衣粉和洗潔精洗潔精2.2.常用清洗方法常用清洗方法洗滌劑清洗法洗滌劑清洗法超聲波清洗法超聲波清洗法 3.3.玻璃器皿的清洗玻璃器皿的清洗新購置的玻璃器皿的清洗新購置的玻璃器皿的清洗用過的培養(yǎng)器皿的清洗用過的培養(yǎng)器皿的清洗已經(jīng)污染的玻璃器皿的清洗已經(jīng)污染的玻璃器皿的清洗29302.3.2 2.3.2 滅菌滅菌 2.3.2.1 2.3.2.1 器具的滅菌方法器具的滅菌方法干熱滅菌法干熱滅菌法高壓蒸汽滅菌法（濕熱滅菌法）高壓蒸汽滅菌法（濕熱滅菌法）火焰灼燒滅菌法火焰灼燒滅菌法 2.3.2.2 2.3.2.2 培養(yǎng)基的滅菌方法培養(yǎng)基的滅菌方法高溫蒸汽滅菌法高溫蒸汽

16、滅菌法過濾除菌法過濾除菌法31培養(yǎng)基滅菌方法培養(yǎng)基滅菌方法 -濕熱滅菌法濕熱滅菌法培養(yǎng)基濕熱滅菌最少時(shí)間培養(yǎng)基濕熱滅菌最少時(shí)間 液體容積（液體容積（ml） 121所需時(shí)間（所需時(shí)間（min） 20-50 15 75 20 250-500 25 1000 30 1500-2000 35-4032培養(yǎng)基高壓蒸汽滅菌（濕熱滅菌）操作培養(yǎng)基高壓蒸汽滅菌（濕熱滅菌）操作 P P2020 滅菌后培養(yǎng)基的存放：滅菌后培養(yǎng)基的存放：鍋內(nèi)加水鍋內(nèi)加水放入消毒桶放入消毒桶裝入培養(yǎng)基裝入培養(yǎng)基蓋好鍋蓋蓋好鍋蓋接通電源加熱接通電源加熱排盡鍋內(nèi)冷空氣排盡鍋內(nèi)冷空氣達(dá)到滅菌溫度時(shí)開始計(jì)時(shí)達(dá)到滅菌溫度時(shí)開始計(jì)時(shí)并保持足夠長

17、的時(shí)間并保持足夠長的時(shí)間繼續(xù)加熱繼續(xù)加熱切斷電源切斷電源壓力表指針歸壓力表指針歸零時(shí)打開鍋蓋零時(shí)打開鍋蓋取出培養(yǎng)基取出培養(yǎng)基并存放好并存放好33高壓蒸汽滅菌鍋安全使用注意事項(xiàng)：高壓蒸汽滅菌鍋安全使用注意事項(xiàng)： 滅菌前外層鍋內(nèi)要加入足夠的水滅菌前外層鍋內(nèi)要加入足夠的水, ,滅菌完滅菌完成后要將鍋內(nèi)的水排放干凈。成后要將鍋內(nèi)的水排放干凈。 在滅菌過程中及滅菌后，壓力表壓力指在滅菌過程中及滅菌后，壓力表壓力指針歸零之前針歸零之前, ,不能打開鍋蓋不能打開鍋蓋, ,以免發(fā)生危險(xiǎn)。以免發(fā)生危險(xiǎn)。 注意日常維護(hù)和檢查注意日常維護(hù)和檢查, ,及時(shí)發(fā)現(xiàn)問題及時(shí)發(fā)現(xiàn)問題, ,及及時(shí)修理，保證使用安全可靠。時(shí)修理

18、，保證使用安全可靠。34使用高壓蒸汽滅菌鍋進(jìn)行物品滅菌時(shí)的使用高壓蒸汽滅菌鍋進(jìn)行物品滅菌時(shí)的注意事項(xiàng)：注意事項(xiàng)： 消毒鍋內(nèi)放置的物品要有一定的縫隙，便消毒鍋內(nèi)放置的物品要有一定的縫隙，便于高溫蒸汽上下回流，達(dá)到良好滅菌效果。于高溫蒸汽上下回流，達(dá)到良好滅菌效果。 鍋內(nèi)冷空氣必須完全排盡，否則壓力表的鍋內(nèi)冷空氣必須完全排盡，否則壓力表的指針雖然達(dá)到了規(guī)定的壓力，但由于鍋內(nèi)冷指針雖然達(dá)到了規(guī)定的壓力，但由于鍋內(nèi)冷空氣的存在，并不能達(dá)到相應(yīng)的溫度，因而空氣的存在，并不能達(dá)到相應(yīng)的溫度，因而影響滅菌效果。影響滅菌效果。 進(jìn)行培養(yǎng)基滅菌時(shí)，鍋內(nèi)達(dá)到規(guī)定的滅菌進(jìn)行培養(yǎng)基滅菌時(shí)，鍋內(nèi)達(dá)到規(guī)定的滅菌溫度后，在

19、嚴(yán)格保持滅菌溫度的同時(shí)，還要溫度后，在嚴(yán)格保持滅菌溫度的同時(shí)，還要嚴(yán)格保持滅菌時(shí)間。時(shí)間過長會破壞培養(yǎng)基嚴(yán)格保持滅菌時(shí)間。時(shí)間過長會破壞培養(yǎng)基內(nèi)一些化學(xué)成分的有效性，時(shí)間過短則達(dá)不內(nèi)一些化學(xué)成分的有效性，時(shí)間過短則達(dá)不到滅菌效果。到滅菌效果。 2.3.2.3 2.3.2.3 無菌操作室內(nèi)的滅菌方法無菌操作室內(nèi)的滅菌方法熏蒸滅菌法熏蒸滅菌法射線滅菌法射線滅菌法 2.3.2.4 2.3.2.4 外植體的表面滅菌外植體的表面滅菌 P P2929化學(xué)消毒劑滅菌法化學(xué)消毒劑滅菌法抗生素抑菌法抗生素抑菌法3536 1.1.外植體滅菌的常用殺菌劑外植體滅菌的常用殺菌劑 良好的外植體滅菌效果的含義：良好的外植

20、體滅菌效果的含義： 外植體滅菌后無菌率高，同時(shí)植外植體滅菌后無菌率高，同時(shí)植物細(xì)胞不會受損傷或只是輕微受損傷而物細(xì)胞不會受損傷或只是輕微受損傷而能保持正常生長。能保持正常生長。 37 2. 2.外植體表面滅菌外植體表面滅菌外植體表面滅菌操作前的準(zhǔn)備工作：外植體表面滅菌操作前的準(zhǔn)備工作： 無菌水、漂洗瓶、切割用器皿（玻無菌水、漂洗瓶、切割用器皿（玻璃培養(yǎng)皿或不銹鋼切割盤）和金屬器具璃培養(yǎng)皿或不銹鋼切割盤）和金屬器具均經(jīng)過高溫高壓滅菌并整齊擺放在超凈均經(jīng)過高溫高壓滅菌并整齊擺放在超凈工作臺上。工作臺上。 滅菌劑配制好并整齊擺放在超凈工滅菌劑配制好并整齊擺放在超凈工作臺上。作臺上。3839外植體表面

21、滅菌的一般過程外植體表面滅菌的一般過程預(yù)處理：預(yù)處理：外植體取材外植體取材備用備用無菌水充分漂無菌水充分漂洗洗35次次無菌條件下，消毒劑處理無菌條件下，消毒劑處理無菌條件下，無菌條件下，70%酒酒精表面消毒精表面消毒30S60S預(yù)處理預(yù)處理40 3.3.影響外植體消毒效果的因素：影響外植體消毒效果的因素： 消毒劑種類消毒劑種類 消毒劑使用濃度消毒劑使用濃度 消毒處理時(shí)間消毒處理時(shí)間 4.4.培養(yǎng)過程中污染原因及對策培養(yǎng)過程中污染原因及對策污染的病原類型污染的病原類型污染發(fā)生原因污染發(fā)生原因防污染對策防污染對策41 2.3.3 2.3.3 外植體的接種外植體的接種 1 1 定義定義 2 2 外植

22、體接種操作前的準(zhǔn)備工作外植體接種操作前的準(zhǔn)備工作接種室的清潔和滅菌接種室的清潔和滅菌超凈工作臺的清潔和滅菌準(zhǔn)備超凈工作臺的清潔和滅菌準(zhǔn)備操作人員無菌操作前的準(zhǔn)備操作人員無菌操作前的準(zhǔn)備 3 3 外植體接種的具體步驟外植體接種的具體步驟切割外植體切割外植體培養(yǎng)瓶傾斜靠近培養(yǎng)瓶傾斜靠近酒精燈火焰酒精燈火焰瓶蓋外部在火焰上瓶蓋外部在火焰上旋轉(zhuǎn)灼燒數(shù)秒鐘旋轉(zhuǎn)灼燒數(shù)秒鐘旋開瓶蓋，扣放旋開瓶蓋，扣放在酒精燈旁邊在酒精燈旁邊瓶口在火焰上旋瓶口在火焰上旋轉(zhuǎn)灼燒數(shù)秒鐘轉(zhuǎn)灼燒數(shù)秒鐘用無菌鑷子將外植體用無菌鑷子將外植體均勻放置在培養(yǎng)基上均勻放置在培養(yǎng)基上瓶蓋在火焰瓶蓋在火焰上灼燒兩圈上灼燒兩圈蓋緊瓶蓋蓋緊瓶蓋424

23、344452.4 離體培養(yǎng)體系的建立離體培養(yǎng)體系的建立供體植物材供體植物材料的確定料的確定外植體外植體的選擇的選擇外植體外植體的滅菌的滅菌外植體外植體的培養(yǎng)的培養(yǎng)外植體外植體的接種的接種462.4.1 2.4.1 供體植物材料的來源供體植物材料的來源田間材料田間材料溫室材料溫室材料無菌發(fā)芽材料無菌發(fā)芽材料2.4.2 2.4.2 外植體的選擇原則外植體的選擇原則再生能力強(qiáng)再生能力強(qiáng)遺傳穩(wěn)定性好遺傳穩(wěn)定性好外植體來源豐富外植體來源豐富外植體滅菌容易外植體滅菌容易472.4.3 2.4.3 常用外植體的種類常用外植體的種類莖尖莖尖帶節(jié)莖段帶節(jié)莖段節(jié)間部莖段節(jié)間部莖段葉片和葉柄葉片和葉柄鱗片鱗片482.5 2.5 外植體的培養(yǎng)條