實驗二-普通顯微鏡使用及細菌形態(tài)觀察

1、實驗二實驗二 普通光學顯微鏡的使用普通光學顯微鏡的使用 和細菌形態(tài)觀察和細菌形態(tài)觀察一一 實驗目的實驗目的1 1、學習并掌握油鏡的原理和使用方法。、學習并掌握油鏡的原理和使用方法。2 2、學習普通臺式顯微鏡的結(jié)構(gòu)、各部、學習普通臺式顯微鏡的結(jié)構(gòu)、各部分的功能和使用方法。分的功能和使用方法。3 3、了解細菌的三種基本形態(tài)了解細菌的三種基本形態(tài)二、基本原理二、基本原理n微生物是個體微小、結(jié)構(gòu)簡單、肉眼無法微生物是個體微小、結(jié)構(gòu)簡單、肉眼無法看到的微小生命體。因此，我們要借助顯看到的微小生命體。因此，我們要借助顯微鏡來進行觀察。顯微鏡的種類很多，但微鏡來進行觀察。顯微鏡的種類很多，但基本構(gòu)造可分為兩

2、大部分基本構(gòu)造可分為兩大部分 ：一是機械裝置，：一是機械裝置，二是光學系統(tǒng)二是光學系統(tǒng)n1 1、機械裝置由鏡座、鏡臂、鏡筒與物鏡轉(zhuǎn)、機械裝置由鏡座、鏡臂、鏡筒與物鏡轉(zhuǎn)移器、載物臺、移動器粗細調(diào)節(jié)器組成。移器、載物臺、移動器粗細調(diào)節(jié)器組成。n2 2光學系統(tǒng)由目鏡、物鏡、聚光鏡、反光鏡、光學系統(tǒng)由目鏡、物鏡、聚光鏡、反光鏡、光圈組成。光圈組成。 現(xiàn)代普通光學顯微鏡利用目鏡和物鏡現(xiàn)代普通光學顯微鏡利用目鏡和物鏡兩組透鏡系統(tǒng)來放大成像，故又稱為復式顯兩組透鏡系統(tǒng)來放大成像，故又稱為復式顯微鏡。它們由機械裝置和光學系統(tǒng)兩大部分微鏡。它們由機械裝置和光學系統(tǒng)兩大部分組成。組成。1.1.鏡座；鏡座；2.2.

3、載物臺；載物臺；3.3.鏡臂；鏡臂；4.4.棱鏡套；棱鏡套；5.5.鏡鏡筒；筒；6.6.接目鏡；接目鏡；7.7.轉(zhuǎn)換轉(zhuǎn)換器；器；8.8.接物鏡；接物鏡；9.9.聚光聚光器；器；10.10.虹彩光圈；虹彩光圈；11.11.光圈固定器；光圈固定器；12.12.聚光聚光器升降螺旋；器升降螺旋；13.13.反光反光鏡；鏡；14.14.細調(diào)節(jié)器；細調(diào)節(jié)器；15.15.粗調(diào)節(jié)器；粗調(diào)節(jié)器；16.16.標本夾標本夾顯微鏡的放大倍數(shù)和分辨率顯微鏡的放大倍數(shù)和分辨率 1.1.放大倍數(shù)放大倍數(shù)= =接物鏡放大倍數(shù)接物鏡放大倍數(shù)接目鏡放大倍數(shù)接目鏡放大倍數(shù) 2.2.顯微鏡的分辨率顯微鏡的分辨率 是表示顯微鏡辨析物體

4、是表示顯微鏡辨析物體（兩端）兩點之間距離的能力，可用公式表示（兩端）兩點之間距離的能力，可用公式表示為：為： D=/2nD=/2nsin(/2 ) sin(/2 ) 式中式中D D：物鏡分辨出物體兩點間的最短距離。：物鏡分辨出物體兩點間的最短距離。 ：可見光的波長（平均：可見光的波長（平均0.550.55 m) m) n: n: 物鏡和被檢標本間介質(zhì)的折射率。物鏡和被檢標本間介質(zhì)的折射率。 ：鏡口角（即入射角）。：鏡口角（即入射角）。n油鏡使用的原理油鏡使用的原理 1.1.香柏油的折射率與玻璃接近，提高了視香柏油的折射率與玻璃接近，提高了視野的照明度。野的照明度。 2.2.提高了顯微鏡的提高了

5、顯微鏡的分辨率分辨率三、實驗器材三、實驗器材1 1、菌種、菌種 金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、大腸桿菌和四聯(lián)球菌染色玻片標本等。菌、大腸桿菌和四聯(lián)球菌染色玻片標本等。2 2、溶液或試劑、溶液或試劑 香柏油、二甲苯香柏油、二甲苯3 3、儀器或其他用具、儀器或其他用具 顯微鏡、擦鏡紙。顯微鏡、擦鏡紙。n顯微鏡保養(yǎng)和使用中的注意事項：顯微鏡保養(yǎng)和使用中的注意事項：1.1.不準擅自拆卸顯微鏡的任何部件不準擅自拆卸顯微鏡的任何部件, ,以免損壞。以免損壞。 2.2.鏡面只能用擦鏡紙擦，不能用手指或粗布，以保鏡面只能用擦鏡紙擦，不能用手指或粗布，以保證光潔度證光潔度 3.3.觀察

6、標本時，必須依次用低、中、高倍鏡，最后觀察標本時，必須依次用低、中、高倍鏡，最后用油鏡。當目視接目鏡時，特別在使用油鏡時，用油鏡。當目視接目鏡時，特別在使用油鏡時，切不可使用粗調(diào)節(jié)器，以免壓碎玻片或損傷鏡面。切不可使用粗調(diào)節(jié)器，以免壓碎玻片或損傷鏡面。 4.4.觀察時，兩眼睜開，養(yǎng)成兩眼能夠輪換觀察的習觀察時，兩眼睜開，養(yǎng)成兩眼能夠輪換觀察的習慣，以免眼睛疲勞，并且能夠在左眼觀察時，右慣，以免眼睛疲勞，并且能夠在左眼觀察時，右眼注視繪圖。眼注視繪圖。 5.5.拿顯微鏡時，一定要右手拿鏡臂，左手托鏡座，拿顯微鏡時，一定要右手拿鏡臂，左手托鏡座，不可單手拿，更不可傾斜拿。不可單手拿，更不可傾斜拿。

7、 6.6.顯微鏡應(yīng)存放在陰涼干燥處，以免鏡片滋生霉菌顯微鏡應(yīng)存放在陰涼干燥處，以免鏡片滋生霉菌而腐蝕鏡片而腐蝕鏡片。四、實驗步驟四、實驗步驟1 1、觀察前的準備、觀察前的準備（1 1） 顯微鏡的安置顯微鏡的安置 置顯微鏡于平整的實驗臺上，鏡座距置顯微鏡于平整的實驗臺上，鏡座距實驗臺邊緣約實驗臺邊緣約3 34 4。鏡檢時姿勢要端正。鏡檢時姿勢要端正。 取、放顯微鏡時應(yīng)一手握住鏡臂，一手托住底座，使顯取、放顯微鏡時應(yīng)一手握住鏡臂，一手托住底座，使顯微鏡保持直立、平穩(wěn)。切忌用單手拎提；且不論使用單筒顯微鏡保持直立、平穩(wěn)。切忌用單手拎提；且不論使用單筒顯微鏡或雙筒顯微鏡均應(yīng)雙眼同時睜開觀察，以減少眼睛

8、疲勞，微鏡或雙筒顯微鏡均應(yīng)雙眼同時睜開觀察，以減少眼睛疲勞，也便于邊觀察邊繪圖或記錄。也便于邊觀察邊繪圖或記錄。（2 2） 光源調(diào)節(jié)光源調(diào)節(jié) 安裝在鏡座內(nèi)的光源燈可通過調(diào)節(jié)電壓以安裝在鏡座內(nèi)的光源燈可通過調(diào)節(jié)電壓以獲得適當?shù)恼彰髁炼?，而使用反光鏡采集自然光或燈光作為獲得適當?shù)恼彰髁炼龋褂梅垂忡R采集自然光或燈光作為照明光源時，應(yīng)根據(jù)光源的強度及所用物鏡的放大倍數(shù)選用照明光源時，應(yīng)根據(jù)光源的強度及所用物鏡的放大倍數(shù)選用凹面或凸面反光鏡并調(diào)節(jié)其角度，使視野內(nèi)的光線均勻，亮凹面或凸面反光鏡并調(diào)節(jié)其角度，使視野內(nèi)的光線均勻，亮度適宜。度適宜。（3 3） 根據(jù)使用者的個人情況，調(diào)節(jié)雙筒顯微鏡根據(jù)使用者

9、的個人情況，調(diào)節(jié)雙筒顯微鏡的目鏡，雙筒顯微鏡的目鏡間距可以適當調(diào)節(jié)，的目鏡，雙筒顯微鏡的目鏡間距可以適當調(diào)節(jié)，而左目鏡上一般還配有曲光度調(diào)節(jié)環(huán)，可以適應(yīng)而左目鏡上一般還配有曲光度調(diào)節(jié)環(huán)，可以適應(yīng)眼距不同或兩眼視力有差異的不同觀察者。眼距不同或兩眼視力有差異的不同觀察者。（4 4） 聚光器數(shù)值孔徑值的調(diào)節(jié)聚光器數(shù)值孔徑值的調(diào)節(jié) 調(diào)節(jié)聚光器虹調(diào)節(jié)聚光器虹彩光圈值與物鏡的數(shù)值孔徑值相符或略低。有些彩光圈值與物鏡的數(shù)值孔徑值相符或略低。有些顯微鏡的聚光器只標有最大數(shù)值孔徑，而沒有具顯微鏡的聚光器只標有最大數(shù)值孔徑，而沒有具體的光圈數(shù)刻度。使用這種顯微鏡時可在樣品聚體的光圈數(shù)刻度。使用這種顯微鏡時可在樣

10、品聚焦后取下一目鏡，從鏡筒中一邊看視野，一邊縮焦后取下一目鏡，從鏡筒中一邊看視野，一邊縮光圈，調(diào)節(jié)光圈的邊緣與物鏡邊緣黑圈相切或略光圈，調(diào)節(jié)光圈的邊緣與物鏡邊緣黑圈相切或略小于其邊緣。因為各物鏡的數(shù)值孔徑值不同，所小于其邊緣。因為各物鏡的數(shù)值孔徑值不同，所以每轉(zhuǎn)換一次物鏡都應(yīng)該進行這種調(diào)節(jié)。以每轉(zhuǎn)換一次物鏡都應(yīng)該進行這種調(diào)節(jié)。 在聚光器的數(shù)值孔徑確定后，若需在聚光器的數(shù)值孔徑確定后，若需要改變光照強度，可通過升降聚光器或改要改變光照強度，可通過升降聚光器或改變光源的亮度來實現(xiàn)，原則上不應(yīng)再通過變光源的亮度來實現(xiàn)，原則上不應(yīng)再通過光圈的調(diào)節(jié)。當然，有關(guān)虹彩光圈、聚光光圈的調(diào)節(jié)。當然，有關(guān)虹彩光圈

11、、聚光器高度和照明光源強度的使用原則也不是器高度和照明光源強度的使用原則也不是固定不變的，只要能獲得良好的觀察效果，固定不變的，只要能獲得良好的觀察效果，有時也可根據(jù)不同的具體情況靈活運用，有時也可根據(jù)不同的具體情況靈活運用，不一定拘泥不變。不一定拘泥不變。 2 2、顯微觀察、顯微觀察 在目鏡保持不變的情況下，使用不同放在目鏡保持不變的情況下，使用不同放大倍數(shù)的物鏡所能達到的分辨率及放大率都大倍數(shù)的物鏡所能達到的分辨率及放大率都是不同的。一般情況下，特別是初學者，進是不同的。一般情況下，特別是初學者，進行顯微觀察時應(yīng)遵從由低倍鏡到高倍鏡再到行顯微觀察時應(yīng)遵從由低倍鏡到高倍鏡再到油鏡的觀察程序，

12、因為低倍數(shù)物鏡視野相對油鏡的觀察程序，因為低倍數(shù)物鏡視野相對大，易發(fā)現(xiàn)目標及確定檢查的位置。大，易發(fā)現(xiàn)目標及確定檢查的位置。（1 1） 低倍鏡觀察低倍鏡觀察 將染色標本玻片置于載物臺上，用標本夾夾住，將染色標本玻片置于載物臺上，用標本夾夾住，移動推進器使觀察對象處在物鏡的正下方。下降移動推進器使觀察對象處在物鏡的正下方。下降1010 物鏡，使其接近標本，用粗調(diào)節(jié)器慢慢升起鏡筒，使物鏡，使其接近標本，用粗調(diào)節(jié)器慢慢升起鏡筒，使標本在視野中初步聚焦，再使用細調(diào)節(jié)器調(diào)節(jié)圖像清標本在視野中初步聚焦，再使用細調(diào)節(jié)器調(diào)節(jié)圖像清晰。通過玻片夾推進器慢慢移動玻片，認真觀察標本晰。通過玻片夾推進器慢慢移動玻片，

13、認真觀察標本各部位，找到合適的目的物，仔細觀察并記錄觀察到各部位，找到合適的目的物，仔細觀察并記錄觀察到的結(jié)果。的結(jié)果。 在任何時候使用粗調(diào)節(jié)器聚焦物象時，必須養(yǎng)成在任何時候使用粗調(diào)節(jié)器聚焦物象時，必須養(yǎng)成先從側(cè)面注視小心調(diào)節(jié)物鏡靠近標本，然后用目鏡觀先從側(cè)面注視小心調(diào)節(jié)物鏡靠近標本，然后用目鏡觀察，慢慢調(diào)節(jié)物鏡離開標本進行準焦的習慣，以免因察，慢慢調(diào)節(jié)物鏡離開標本進行準焦的習慣，以免因一時的誤操作而損壞鏡頭及玻片。一時的誤操作而損壞鏡頭及玻片。 （2 2） 高倍鏡觀察高倍鏡觀察 在低倍鏡下找到合適的觀察目標并將其至視在低倍鏡下找到合適的觀察目標并將其至視野中心后，輕輕轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器將高倍鏡移

14、至工野中心后，輕輕轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器將高倍鏡移至工作位置。對聚光器光圈及視野亮度進行適當調(diào)節(jié)作位置。對聚光器光圈及視野亮度進行適當調(diào)節(jié)后微調(diào)細調(diào)節(jié)器使物像清晰，利用推進器移動標后微調(diào)細調(diào)節(jié)器使物像清晰，利用推進器移動標本仔細觀察并記錄所觀察到的結(jié)果。本仔細觀察并記錄所觀察到的結(jié)果。 在一般情況下，當物像在一種物鏡中已清晰在一般情況下，當物像在一種物鏡中已清晰聚焦后，轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器將其他物鏡轉(zhuǎn)到工作位聚焦后，轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器將其他物鏡轉(zhuǎn)到工作位置進行觀察時，物象將保持基本聚焦的狀態(tài)，這置進行觀察時，物象將保持基本聚焦的狀態(tài)，這種現(xiàn)象稱為物鏡的同焦（種現(xiàn)象稱為物鏡的同焦（parfocalparfocal

15、）。利用這種）。利用這種同焦現(xiàn)象，可以保證在使用高倍鏡或油鏡等放大同焦現(xiàn)象，可以保證在使用高倍鏡或油鏡等放大倍數(shù)高、工作距離短的物鏡時僅用細調(diào)節(jié)器即可倍數(shù)高、工作距離短的物鏡時僅用細調(diào)節(jié)器即可對物像清晰聚焦，從而避免由于使用粗調(diào)節(jié)器時對物像清晰聚焦，從而避免由于使用粗調(diào)節(jié)器時可能的誤操作而損壞鏡頭或載玻片?？赡艿恼`操作而損壞鏡頭或載玻片。 （3 3） 油鏡觀察油鏡觀察 在高倍鏡或低倍鏡下找到要觀察的樣品區(qū)域后，用粗調(diào)在高倍鏡或低倍鏡下找到要觀察的樣品區(qū)域后，用粗調(diào)節(jié)器將鏡筒升高，然后將油鏡轉(zhuǎn)到工作位置。在待觀察的樣節(jié)器將鏡筒升高，然后將油鏡轉(zhuǎn)到工作位置。在待觀察的樣品區(qū)域加滴香柏油，從側(cè)面注視

16、，用粗調(diào)節(jié)器將鏡筒小心地品區(qū)域加滴香柏油，從側(cè)面注視，用粗調(diào)節(jié)器將鏡筒小心地降下，使油鏡浸在油鏡中并幾乎與標本相接。將聚光器升至降下，使油鏡浸在油鏡中并幾乎與標本相接。將聚光器升至最高位置并開足光圈，若所用聚光器的數(shù)值孔徑超過最高位置并開足光圈，若所用聚光器的數(shù)值孔徑超過1.01.0，還應(yīng)在聚光鏡與載玻片之間加滴香柏油，保證其達到最大的還應(yīng)在聚光鏡與載玻片之間加滴香柏油，保證其達到最大的效能。調(diào)節(jié)照明使視野的亮度合適，用粗調(diào)節(jié)器將鏡筒徐徐效能。調(diào)節(jié)照明使視野的亮度合適，用粗調(diào)節(jié)器將鏡筒徐徐上升，直至視野中出現(xiàn)物像并用細調(diào)節(jié)器使其清晰準焦為止。上升，直至視野中出現(xiàn)物像并用細調(diào)節(jié)器使其清晰準焦為止

17、。 有時按上述操作還找不到目的物，則可能由于油鏡頭下有時按上述操作還找不到目的物，則可能由于油鏡頭下降還沒有到位，或因油鏡上升太快，以至眼睛捕捉不到一閃降還沒有到位，或因油鏡上升太快，以至眼睛捕捉不到一閃而過的物像。遇此情況，應(yīng)重新操作。另外應(yīng)特別注意不要而過的物像。遇此情況，應(yīng)重新操作。另外應(yīng)特別注意不要因在下降鏡頭時用力過猛，或聚焦時誤將粗調(diào)節(jié)器向反方向因在下降鏡頭時用力過猛，或聚焦時誤將粗調(diào)節(jié)器向反方向轉(zhuǎn)動而損壞鏡頭及載玻片。轉(zhuǎn)動而損壞鏡頭及載玻片。 3 3、顯微鏡用畢后的處理、顯微鏡用畢后的處理（1 1）上升鏡筒，取下載玻片。）上升鏡筒，取下載玻片。（2 2） 用擦鏡紙拭去鏡頭上的鏡油

18、，然后用擦鏡用擦鏡紙拭去鏡頭上的鏡油，然后用擦鏡紙蘸少許二甲苯擦去鏡頭上殘留的油跡，最后再紙蘸少許二甲苯擦去鏡頭上殘留的油跡，最后再用干凈的擦鏡紙擦去殘留的二甲苯。用干凈的擦鏡紙擦去殘留的二甲苯。 切忌用手或其他紙擦拭鏡頭，以免使鏡頭沾切忌用手或其他紙擦拭鏡頭，以免使鏡頭沾上污漬或產(chǎn)生劃痕，影響觀察。上污漬或產(chǎn)生劃痕，影響觀察。（3 3）用擦鏡紙清潔其他物鏡及目鏡，用稠布清）用擦鏡紙清潔其他物鏡及目鏡，用稠布清潔顯微鏡的金屬部件。潔顯微鏡的金屬部件。（4 4） 將各部分還原，反光鏡垂直于鏡座，將物將各部分還原，反光鏡垂直于鏡座，將物鏡轉(zhuǎn)成鏡轉(zhuǎn)成“ 八八 ”字形，再向下旋。同時把聚光鏡字形，再向下旋。同時把聚光鏡降下，以免接物鏡與聚光鏡發(fā)生碰撞危險。降下，以免接物鏡與聚光鏡發(fā)生碰撞危險。4 細菌基本形態(tài)的觀察：細菌基本形態(tài)的觀察： 利用油鏡，結(jié)合細菌三型等染色利用油鏡，結(jié)合細菌三型