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文檔簡介
1、1、簡述大腸桿菌分離和菌株保存方法以及相關(guān)注意事項(xiàng)。答:菌株的分離1、病雞的處死:一般采用頸動脈(位于雞的耳緣下方)放血的方式將雞處死;2、腹腔打開:(從腹腔打開到完成菌株分離,必須在酒精燈周圍操作,酒精燈與解剖位置一般不超過2030厘米);(1)肝臟菌株分離的方法(2)心包腔菌株分離的方法(3)腹腔菌株的分離方法是用剪刀將腹部肌肉剪開,用剪刀固定病雞用鑷子撥開腸道,用接種環(huán)貼著腹腔壁或未污染的腸道輕輕刮取,然后接種于麥康凱平板。接種后的麥康凱平板置于37的培養(yǎng)箱培養(yǎng)1624小時(shí),觀察菌落形態(tài)。毒株的保存:一、細(xì)菌保存方法:1、將藥敏實(shí)驗(yàn)過程中離心管中的菌液再放入培養(yǎng)箱中恒溫培養(yǎng)16h左右;二
2、、將培養(yǎng)后的菌液以3000rpm(轉(zhuǎn)/分鐘)離心3min;三、用移液器吸取上層澄清肉湯棄去,留有100微升左右,輕輕吹打混勻;四、將混勻后的菌液吸取加入到含1ml的30%肉湯中保存。二、30%甘油肉湯的配制(以30毫升甘油+70毫升水+100毫升對應(yīng)的營養(yǎng)肉湯的量,配好后高壓滅菌分裝到1.5毫升的離心管中,每個(gè)管中500微升,分裝好的置于冷凍層保存,用的時(shí)候取出來溶解即可。分離注意事項(xiàng):1、傾注平板時(shí),皿蓋要半開,留有通氣孔,倒好后立即蓋上皿蓋,待瓊脂凝固后翻轉(zhuǎn)放置,以防蒸餾水流淌到培養(yǎng)基上,影響培養(yǎng)結(jié)果。(平板表面有水,影響分離;蒸餾水有抑制細(xì)菌生長作用)2、先做標(biāo)記后操作,試管標(biāo)記在管壁上
3、,平板標(biāo)記在皿底上。3、平板劃線時(shí)要盡可能輕且密,切忌用力過重劃破瓊脂和重復(fù)劃線,失去分離意義。4、斜面蛇形劃線,可反復(fù)重復(fù)劃。5、培養(yǎng)時(shí),試管要站立培養(yǎng),以防蒸餾水影響結(jié)果;而平板要倒扣即皿底朝上培養(yǎng),防污染。2簡述病雞和死胚(弱雛)雞白痢沙門氏菌分離方法。答:?。ㄈ酰╇u中分離SP分離方法1、雞的處死方法和消毒方法參考大腸桿菌的分離與菌株保存;2、對于懷疑為沙門氏菌感染的雞分離時(shí)選擇的培養(yǎng)基常用的有麥康凱和亞硫酸鉍(該培養(yǎng)基滅菌的方法為煮沸滅菌,高壓會破壞其中的部分有效成分);3、無菌采集肝臟、脾臟和心血等器官組織,對于有呼吸道癥狀的雞群可以同時(shí)采集肺臟(該組織采集中容易污染要注意操作),對
4、于有神經(jīng)癥狀的雞群可以同時(shí)采集腦組織(剪刀剪開腦殼)在麥康凱或者亞硫酸鉍上劃線培養(yǎng);4、將平板置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2448小時(shí),培養(yǎng)過程中注意平板上細(xì)菌的生長形態(tài),其中麥康凱上應(yīng)為無色的小菌落,亞硫酸鉍為棕色或黑色的小菌落;5、挑取符合形態(tài)的菌落接種到肉湯中,進(jìn)行增加培養(yǎng)用于藥敏試驗(yàn)和菌種保存(具體操作方法參考微量稀釋法測定大腸桿菌藥物敏感性);6、菌株命名方式參考大腸桿菌分離及藥敏實(shí)驗(yàn)方法,只要將大腸桿菌首字母“E”改成”S”其他不變;7、部分雞群用藥較為嚴(yán)重,可以講片管帶回來的雞在實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)23天,待體內(nèi)藥物含量降低同時(shí)體內(nèi)細(xì)菌進(jìn)行再次增值可以增加細(xì)菌分離的成功率。弱雛或死胚中分離SP1、
5、弱雛通過可以采取放血或者包在袋子中悶死;2、將處死的弱雛或者死胚用消毒藥浸泡滅菌;3、無菌打開腹腔吸取100微升的卵黃(一般情況下比較粘稠,槍頭用剪刀剪去0.5cm左右,將槍頭的尖端弄大便于吸取卵黃)加入到含血清的肉湯中;4、將肉湯放入37培養(yǎng)箱中過夜培養(yǎng);5、用滅菌的棉簽蘸取培養(yǎng)箱后的菌液在麥康凱或者亞硫酸鉍平板上涂布均勻;6、將平板置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2448小時(shí),培養(yǎng)過程中注意平板上細(xì)菌的生長形態(tài),其中麥康凱上應(yīng)為無色的小菌落,亞硫酸鉍為棕色或黑色的小菌落;7、挑取符合形態(tài)的菌落接種到肉湯中,進(jìn)行增加培養(yǎng)用于藥敏試驗(yàn)和菌種保存。1%血清肉湯的配制方法1、將營養(yǎng)肉湯(LB肉湯)配制好進(jìn)行高
6、壓滅菌,同時(shí)高壓滅菌2ml的離心管;2、在超凈工作臺中無菌打開血清按照1%的比例將血清加入到肉湯中;3、將加入血清的肉湯分離到2ml的離心管,每個(gè)離心管中加入1ml左右,分裝好的肉湯放入的培養(yǎng)箱中進(jìn)行無菌檢測; 4、無菌檢測后合格的肉湯即可使用。9、死胚蛋及弱雛檢測檢測材料:普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、死胚蛋或弱雛、接種環(huán)、鑷子、剪刀、滅菌平皿、酒精燈、酒精棉球、碘酊棉球。取樣方法1選擇當(dāng)日出雛時(shí)的弱雛或死胚蛋,每個(gè)品種取5個(gè)樣品。2將樣品密閉保存在消毒水浸泡后烘干的塑料袋中,分別存放標(biāo)記樣本1、樣本2帶回實(shí)驗(yàn)室。3檢測方法9.3.1將所有樣品放置于超凈工作臺上,單個(gè)取出樣品,使用碘酊棉球消毒好蛋殼表
7、面,再使用酒精棉球消毒一次,將消毒過的樣品放置于滅菌平皿上。9.3.2剪刀或鑷子消毒后打開蛋殼,取出胚體。 2、雪山系列:9.3.3死胚蛋以下檢測方法及弱雛檢測方法同病原分離作業(yè)指導(dǎo)書。日 齡疫苗種類接種劑量免疫方式1CVI988+威力克0.5+1頭份皮下注射傳支活苗12頭份孵化場噴霧H90.15ml皮下注射4球蟲苗1頭份拌料10-13新支二聯(lián)活苗12頭份滴鼻點(diǎn)眼ND+H9ND+H9:H5=1:10.5ML皮下注射H523-25斷喙、喉痘1.5頭份刺種30LASOTA+H1202頭份飲水35H50.4ML皮下注射60LASOTA+H1202頭份飲水 3寫出你公司當(dāng)前雪山草雞與青腳麻雞的免疫程序
8、。答:1、青腳麻日 齡疫苗種類接種劑量免疫方式備注1威力克1頭份單針雙管皮下注射青腳麻、黃腳麻飼養(yǎng)超70日齡,按優(yōu)系列品種免疫程序H90.15ml傳支活苗12頭份孵化場噴霧10-13新支二聯(lián)活苗1.2頭份滴鼻點(diǎn)眼ND+H9ND+H9:H5=1:1 0.5ML皮下注射H523斷喙、喉痘1.5頭份刺種30LASOTA+H1202頭份飲水4、使用滅菌高壓鍋的注意事項(xiàng)有哪些?注意每次滅菌前應(yīng)檢查滅菌器是否處于良好的工作狀態(tài),尤其是安全閥是否良好;每次使用前一定要加水至滅菌桶擱腳處,保證正常使用。高壓滅菌操作人員在使用高壓滅菌器時(shí)不得離開崗位,高壓滅菌器應(yīng)按照規(guī)定進(jìn)行安全和計(jì)量檢定,檢定合格后方可投入使
9、用。操作是操作人員不能擅自離開。如在日常使用中發(fā)現(xiàn)螺絲、螺母松動現(xiàn)象,應(yīng)及時(shí)加以緊固,以免漏氣,確保正常使用。堆放滅菌物品時(shí),嚴(yán)禁堵塞安全閥、放汽閥的出氣孔,物品擺放不可堆壓過緊,必須留出空位確保空氣暢通,否則安全閥和放氣閥因出氣孔堵塞不能工作,造成事故上下左右均應(yīng)交叉錯(cuò)開, 留出縫隙, 使蒸汽容易穿透已策安全。滅菌液體時(shí),應(yīng)將液體灌裝在硬質(zhì)的耐熱玻璃瓶中,以不超過3/4體積為好,瓶口選用棉花紗塞,切勿使用未開孔的橡膠或軟木塞。在滅菌液體結(jié)束時(shí)不準(zhǔn)立即釋放蒸汽,必須待壓力表指針回復(fù)到零位后放可排放余汽。密封圈切勿附油,以免損壞膠質(zhì)而造成漏氣。安全閥應(yīng)定期檢查可靠性,如壓力表指針已超過0.165
10、Mpa時(shí)安全閥不起跳則必須立即停止使用并更換合格的安全閥。注意安全,在高壓滅菌密封液體時(shí),如果壓力驟降,可能造成物品內(nèi)外壓力不平衡而炸裂或液體噴出。對不同類型,不同滅菌要求的物品,如敷料和液體等,切勿放在一起滅菌,盡量將同類物品裝一鍋內(nèi)滅菌。若有不同類物品裝放一起, 應(yīng)以量難達(dá)到滅菌物品所需的溫度和時(shí)間為準(zhǔn)。5為了防止病原微生物的傳播,化驗(yàn)室工作人員應(yīng)該如何做?在實(shí)驗(yàn)臺上不可放置任何非實(shí)驗(yàn)必需的物件或私人用品。 工作開始及結(jié)束時(shí),必須清理并用殺菌液擦拭實(shí)驗(yàn)臺面 (殺菌液最常用的為70% 酒精水溶液)。接種環(huán)、接種針等器械,用前用后必須置火焰中燒灼。解剖用的剪刀、鑷子等應(yīng)置于消毒液中浸泡。在實(shí)驗(yàn)
11、室工作,應(yīng)穿戴工作衣帽,下班后應(yīng)掛入衣柜中并開起紫外燈,進(jìn)行消毒。對操作傳染性較強(qiáng)的病原微生物后,應(yīng)將衣帽浸于消毒藥水中或高壓消毒后洗滌再用。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的各種培養(yǎng)基、儀器,尤其是各種的樣品及微生物培養(yǎng)物,皆不可任意移至實(shí)驗(yàn)室外。 若必須帶出時(shí),應(yīng)嚴(yán)格按規(guī)章制度辦理。被污染的廢棄物或各種器皿在廢棄或清洗前必須進(jìn)行滅菌處理;剖檢的動物尸體、臟器、血液等病料,應(yīng)嚴(yán)格消毒滅菌后,才能按一般垃圾處理,有條件的盡量焚燒處理。在實(shí)驗(yàn)的操作過程中,應(yīng)集中注意力,不得與他人聊天,以免發(fā)生意外。實(shí)驗(yàn)室中如發(fā)生意外、如劃破皮膚,病料或培養(yǎng)物污染桌面或地面時(shí),人員應(yīng)立即自行處理,必要時(shí)可到外就醫(yī),有病原微生物污染的地方
12、,應(yīng)敷以濃消毒藥覆蓋過夜。工作完畢結(jié)束后應(yīng)先用消毒水泡手,后用清水沖洗。6請陳述HA和HI試驗(yàn)的原理。某些病毒或病毒的血凝素,能選擇性地使某種或某幾種動物的紅細(xì)胞發(fā)生凝集,這種凝集紅細(xì)胞的現(xiàn)象稱為血凝,也稱直接血凝反應(yīng),當(dāng)病毒的懸液中先加入特異性抗體,且這種抗體的量足以抑制病毒顆?;蚱溲?,則紅細(xì)胞表面的受體就不能與病毒顆粒或其血凝素直接接觸。這時(shí)紅細(xì)胞的凝集現(xiàn)象就被抑制,稱為紅細(xì)胞凝集抑制,也稱血凝抑制反應(yīng)。7、請說出傳染性法氏囊病毒、新城疫病毒、傳染性喉氣管炎病毒、傳染病支氣管炎及禽流感病毒采集樣品的部位(舉例:小鵝瘟病毒所采樣品應(yīng)為肝、脾、腎,提示:不同病毒所采樣品部位不同),簡述樣品
13、的保存條件及處理方法。常見禽病毒病分離病毒時(shí)應(yīng)采集的樣品部位病毒所采樣品病毒所采樣品新城疫病毒呼吸道分泌物、腦、脾網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生病病毒脾、全血、腫瘤組織禽流感病毒氣管或 竇的分泌物、泄殖腔內(nèi)容物禽痘病毒痘斑傳染性囊病病毒法氏囊、脾腦脊髓炎病毒腦脊髓傳染性喉氣管炎病毒氣管滲出物、氣管、肺小鵝瘟病毒肝、脾、腎傳染性支氣管炎病毒氣管滲出物、肺、輸卵管、腎、腺胃鴨瘟病毒肝、脾、腎、血液禽白血病病毒全血、血漿鴨肝炎病毒肝、血液馬立克病病毒腫瘤組織火雞出血性腸炎病毒脾、腸內(nèi)容物雞病毒性關(guān)節(jié)炎病毒滑液勞斯肉瘤病毒全血、血漿病料和病毒的保存采集的樣品若在24h內(nèi)進(jìn)行檢查,可放入4保存;否則應(yīng)放于低溫條件保存
14、(-70儲存最好)。應(yīng)將病料和病毒分開保存,合理使用2個(gè)冰箱,避免內(nèi)容物過多而造成混亂。在冰箱上貼上標(biāo)簽以區(qū)分冰箱內(nèi)存放的物資,在冰箱不足的情況下可將冰箱分區(qū)域進(jìn)行保存。4、樣品處理:針對不同部位的病料采取不同方法進(jìn)行處理,一般臟器病料加入510倍量的滅菌生理鹽水(或配制的抗菌溶液),充分研磨后,按每毫升加青鏈霉素各3000-5000IU或丁胺卡那3000IU(也可使用孔徑為0.22-0.45um的濾膜過濾),移入滅菌離心管中,反復(fù)凍融3次(可以將其放置于-20迅速冷凍,快速置于37的溫水中融化,使細(xì)胞內(nèi)的病毒充分釋放出),搖勻后800010000 r/m的速度離心10 min,取上清接種雞胚
15、。棉拭子充分捻動、擰干后棄去棉拭子,樣品液800010000 r/m的速度離心10 min,取上清接種雞胚。8瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)時(shí)有幾種封底方法?請具體陳述封底的操作過程。答:封底:有兩種方法。方法1:將打孔后的平皿底部在酒精燈上稍加熱,使孔底部薄薄溶解一層瓊脂重新封底。方法2:用斷頭的12號針燒紅后于孔壁上轉(zhuǎn)一圈,按孔底可見完整的人影為標(biāo)準(zhǔn)重新封底。9當(dāng)某一農(nóng)戶的雞群抗體檢測結(jié)果為較多“0”時(shí),請問該怎么處理?答:農(nóng)戶雞群抗體檢測結(jié)果為較多“0”時(shí),首先對此樣品重新檢測,檢測時(shí),重新檢測四單位抗原是否正確,紅細(xì)胞是否溶血,并對該雞群重新采樣檢測,若兩次檢測結(jié)果一致,首先要排出檢測方面的因素,第二查
16、看雞群免疫情況:疫苗廠家及批號,免疫時(shí)間,免疫效果免疫后雞群健康狀況,并將檢測結(jié)果及時(shí)反饋給上級領(lǐng)導(dǎo),對該雞群進(jìn)行補(bǔ)免,15天后再次檢測抗體效果。10請簡述紙片法藥敏試驗(yàn)的檢測原理。用于測定抗菌藥物體外抑制細(xì)菌生長效力的試驗(yàn)稱為抑菌試驗(yàn)。通過抑菌實(shí)驗(yàn),可以測定一個(gè)藥物的最低抑菌濃度,用以評價(jià)該藥物的抑菌性能,這是抗菌藥物的最基本的藥效學(xué)數(shù)據(jù)。主要方法有進(jìn)行定性測定的擴(kuò)散法(如抑菌圈試驗(yàn))和進(jìn)行定量測定的稀釋法(如最低抑菌濃度實(shí)驗(yàn))。水樣檢測時(shí)細(xì)菌總數(shù)是怎樣計(jì)算的?答:細(xì)菌總數(shù)的計(jì)算方法1.、若其菌落數(shù)在30-300之間,應(yīng)計(jì)算其比值,若小于2,可取其平均數(shù)。例如:某樣品的菌落數(shù)在1:100稀釋
17、度為295,1:1000稀釋度為46,其比值為29500:46000=1:1.6,因此比值數(shù)小于2,故取其平均值,即每毫升含細(xì)菌37750個(gè),若大于2,則以稀釋度低的平皿記數(shù)為準(zhǔn)。2、若所有平皿的菌落數(shù)大于300,則以稀釋最高的平皿記數(shù)為準(zhǔn)。3、若所有平皿的菌落均小于30,則以選擇稀釋度最低的平皿計(jì)算為準(zhǔn)。12、某一雞群為雪山草雞,當(dāng)前日齡為68,檢測其抗體結(jié)果如下表,請你分析此雞群的抗體結(jié)果,是否存在異常,如果存在異常,有哪些方面的原因。(10分)檢測項(xiàng)目滴度平均值標(biāo)準(zhǔn)差檢測數(shù)合格數(shù)合格率H 5-401344444455556784.31 1.96 161381.25%H 5-6024444
18、44444566674.25 1.65 161487.50%H 91010101111111111111111111111111110.81 0.40 1616100.00%ND46677788888991011117.94 1.84 1616100.00%答:H5-4、H5-6抗體偏低,ND抗體均勻度差,離散度大,原因:可能存在免疫情況,免苗是否把攪拌均勻,疫苗是否和抗原相匹配、雞群是否健康。13疑似腫瘤疾病雞只該怎樣采樣? 答: 采取正常組織與病灶交界處,組織塊厚度在0.3-0.6,大小在2-3平米厘米。 及時(shí)使用10%福爾馬林溶液進(jìn)行固定。14某公司1月份出現(xiàn)2棟舍種雞ND異常偏低,假如
19、你作為該公司化驗(yàn)室主管,你會如何分析此件事并采取哪些措施?答:某公司1月份出現(xiàn)2棟舍種雞ND異常偏低,排出檢測方面的因素后,查看種雞免疫程序,疫苗廠家和免疫時(shí)間,雞群健康狀況,通知種雞相關(guān)負(fù)責(zé)及時(shí)對雞群進(jìn)行補(bǔ)免,后續(xù)跟蹤采血檢測抗體。VDR答題目前我們檢測哪些項(xiàng)目,依據(jù)是那些?:前暫行檢測CZ、LX、WW、HN、JC、NW 和JS四種藥物,依據(jù)農(nóng)業(yè)部無公害農(nóng)產(chǎn)品和綠色產(chǎn)品及江蘇省食品安全風(fēng)險(xiǎn)評估的檢測項(xiàng)目及公司藥物使用情況制定的檢測內(nèi)容,其中HN和NW屬于禁用的藥物不得檢出,LX、CZ 和JS屬于允許使用但是不能超標(biāo)的藥物,最高限量100ppb。后期會根據(jù)公司陽性率情況做適時(shí)調(diào)整。目前我們使用
20、的檢測方法是什么?存在那些優(yōu)劣勢?:VDR檢測使用的是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法,又稱ELISA。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn),具有方便、快捷、靈敏、特異、簡單、可大批量檢測等特點(diǎn),目前已經(jīng)廣泛適用于食品安全檢測中。Elisa檢測的原理是什么?其基本原理是酶分子與抗體或抗抗體分子共價(jià)結(jié)合,此種結(jié)合不會改變抗體的免疫學(xué)特性,也不影響酶的生物學(xué)活性。此種酶標(biāo)記抗體可與吸附在固相載體上的抗原或抗體發(fā)生特異性結(jié)合。滴加底物溶液后,底物可在酶作用下使其所含的供氫體由無色的還原型變成有色的氧化型,出現(xiàn)顏色反應(yīng)。因此,可通過底物的顏色反應(yīng)來判定有無相應(yīng)的免疫反應(yīng),顏色反應(yīng)的深淺與標(biāo)本中相應(yīng)抗體或抗原的量呈正比。此種顯色反應(yīng)可通
21、過ELISA檢測儀進(jìn)行定量測定,這樣就將酶化學(xué)反應(yīng)的敏感性和抗原抗體反應(yīng)的特異性結(jié)合起來,使ELISA方法成為一種既特異又敏感的檢測方法。面聯(lián)免疫反應(yīng)主要有:競爭法和非競爭法,其中競爭法又分為直接競爭法和間接競爭法。直接競爭法:待檢抗原和酶標(biāo)記抗原競爭板底包被的特異性抗體,酶催化底物顯色,通過顯色反應(yīng)來檢測待檢抗原的含量,顏色深,表明待檢抗原含量少,顏色淺,表明待檢抗原含量高。間接競爭法:樣品中的待檢藥物與酶標(biāo)板上固定的抗原特異性競爭抗體,加入酶標(biāo)記物,催化顯色,根據(jù)顯色的深淺來判斷樣品中待檢藥物的含量。顯色深,含量少;反之,含量多(維德維康試劑盒中WJ、LX、CZ和JS均使用的是間接競爭法)
22、。顯色反應(yīng)原理?TMB/OPD(A/B液的成分):是辣根過氧化物酶的常用底物。在辣根過氧化物酶或其他適當(dāng)過氧化物酶的催化下,TMB會產(chǎn)生可溶性藍(lán)色產(chǎn)物(用DH2表示)。顯色反應(yīng):DH2(無色)+ H2O2D(藍(lán)色)+2 H2OLX的藥理作用及理化性質(zhì)?藥理作用:其作用機(jī)制是阻止核糖核蛋白體結(jié)合;該藥廣譜抑菌劑,高濃度時(shí)具殺菌作用,對革蘭氏陽性菌、陰性菌、立克次體、濾過性病毒、螺旋體屬乃至原蟲類都有很好的抑制作用;對結(jié)核菌、變形菌等則無效(土霉素、金霉素和四環(huán)素);物理性質(zhì):該鹽酸鹽為黃色結(jié)晶性粉末;無臭,味苦;有引濕性;遇光色漸變深,在堿性溶液中易破壞失效。在水中溶解,在乙醇中略溶,在氯仿或乙
23、醚中不溶。CZ的藥理作用及理化性質(zhì)?:理作用:喹諾酮類藥物的抗菌機(jī)制主要是抑制DNA回旋酶,屬于廣譜靜止期殺菌藥。主要用于腸道及呼吸道疾病的治療(環(huán)丙沙星、沙拉沙星、恩諾沙星);理化性質(zhì):喹諾酮萘啶環(huán)表現(xiàn)為既有弱酸性又有弱堿性,能溶于稀酸和稀堿水溶液中,在甲醇、乙醇、氯仿、乙醚等一般有機(jī)溶劑中溶解度都不太好,有的幾乎不溶。其鹽能溶于水,堿性鹽溶解度比酸性鹽大。JS的藥理作用及理化性質(zhì)?藥理作用:由于磺胺類藥的化學(xué)結(jié)構(gòu)與氨基苯甲酸很象,可與氨苯甲酸競爭二氫葉酸合成酶,妨礙二氫葉酸的形成,最終影響細(xì)菌核蛋白的合成,從而抑制細(xì)菌的生長繁殖,主要應(yīng)用腸道疾病和球蟲感染(磺胺嘧啶、磺胺氯吡嗪鈉、磺胺甲噁
24、唑)。物理性質(zhì):一般為白色或微黃色結(jié)晶性粉末,遇光易變質(zhì),色漸變深,大多數(shù)本類藥物在水中溶解度極低,較易溶于稀堿,但形成鈉鹽后則易溶于水,其水溶液呈強(qiáng)堿性;分子式,C6H8O2N2S;分子量, 172.20。烏骨雞用藥需要注意哪些?烏骨雞由于生理機(jī)制不同,使用喹諾酮類藥物后終身殘留,難以代謝掉,生產(chǎn)中烏骨雞不能使用喹諾酮類藥物。片管采樣需要注意哪些?采樣雞必須是健康雞;樣品采集數(shù)量要足夠,2只雞,4塊胸肉;樣品要干凈,不能帶有雞毛、雞糞、骨頭和墊料等;采樣單信息應(yīng)填寫準(zhǔn)確;樣品使用2層8號袋套裝,采樣單置于2層采樣袋之間;采集好的樣品置于采樣箱臨時(shí)存放,24h內(nèi)送化驗(yàn)室?;?yàn)員接到樣品后需要檢
25、查哪些內(nèi)容?樣品的質(zhì)量,有無雞毛、骨頭、墊料、雞糞;樣品的重量,是否是4塊胸肌肉;重量是否達(dá)到300g;樣品是否使用采樣箱臨時(shí)存放;樣品是否腐敗變質(zhì);樣品中是否有采樣單,集群信息是否完整。樣品保存中需要需要注意哪些?片管采樣前提前準(zhǔn)備好采樣箱,采樣箱中添加冰塊,采集的樣品臨時(shí)存放在采樣箱中。樣品采集后,24h內(nèi)送至化驗(yàn)室,如遇特殊情況,置于-20保存?;?yàn)員接受到樣品后,第2天就檢測的樣品可以放置在4保存,其余的樣品均需要放置在-20攝氏度冰箱內(nèi)。樣品前處理中需要注意哪些?樣品檢測前應(yīng)先剔除筋膜和脂肪,現(xiàn)將肉樣處理成顆粒,之后使用絞肉機(jī)均質(zhì);樣品處理時(shí)避免水分進(jìn)入;不同樣品處理所用的用具(案板
26、、刀具、絞肉機(jī))均需要清洗擦拭處理,避免樣品間交叉污染;肉樣均質(zhì)時(shí),絞肉機(jī)樣品不宜過滿,以免損傷絞肉機(jī);絞肉機(jī)使用時(shí)不宜一直轉(zhuǎn)動,易造成機(jī)器過熱樣品變質(zhì),應(yīng)間斷工作(開20-30s,停5-10s)。試劑選擇保存應(yīng)注意哪些?試劑盒中使用的試劑乙酸乙酯、乙腈、正己烷、甲醇、乙酸、鹽酸、三水合磷酸二氫鉀、氯化鈉、氫氧化鈉應(yīng)選用國藥的試劑,不同批次試劑質(zhì)量很難保證完全一致,不同批次的試劑不能混用;所用到的試劑應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用,配置好的試劑按照要求保存,配置好超過7天的試劑不能使用;乙酸乙酯、乙腈、正己烷、甲醇均需要避光保存,且易燃應(yīng)注意保存遠(yuǎn)離火源;有機(jī)試劑有毒性,做實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)注意帶手套口罩,試劑配置實(shí)用在通
27、風(fēng)櫥中進(jìn)行。試劑盒如何保存?拆封后的酶標(biāo)板如何保存?試劑盒要求4保存,開封后剩余的酶標(biāo)板應(yīng)置于鋁箔包內(nèi),加入干燥劑,皮筋扎口,4保存。試劑盒使用前如何處理?提前回溫2小時(shí),目的:整個(gè)反應(yīng)時(shí)酶促反應(yīng),回溫保證試劑盒中酶的活性。酶標(biāo)儀使用有哪些注意事項(xiàng)?酶標(biāo)儀提前預(yù)熱15分鐘,保證讀數(shù)準(zhǔn)確性;使用移液器加液,移液槍頭不能混用;洗板要干凈,避免交叉污染;嚴(yán)格按照試劑盒的說明書操作,反應(yīng)時(shí)間準(zhǔn)確;請勿將樣品或試劑灑到儀器表面或內(nèi)部,操作完成注意做好清潔工作;不要在測量過程中關(guān)閉電源;對于因試劑盒問題造成的測量結(jié)果的偏差,應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況及時(shí)修改參數(shù),以達(dá)到最佳效果;使用后蓋好防塵罩。酶標(biāo)儀平常出現(xiàn)的問題
28、及解決辦法?酶標(biāo)儀使用前沒有做會問處理,讀數(shù)不準(zhǔn)確,酶標(biāo)儀使用前最少預(yù)熱15min;合肥公司檢測后結(jié)果出現(xiàn)6,儀器故障,酶標(biāo)儀故障排除,使用自帶檢測板檢測,維修/更換酶標(biāo)儀;揚(yáng)州公司,檢測結(jié)果中出現(xiàn)OD值為4的結(jié)果,經(jīng)過排查沒有經(jīng)過拍板,立即加A、B混合液檢測造成;部分公司為防止酶標(biāo)板脫落加加紙固定,檢測時(shí)沒有將紙去掉,影響周邊板孔讀數(shù),檢測前保證板孔不受遮擋。酶標(biāo)儀為什么要預(yù)熱?酶標(biāo)儀如何維護(hù)?酶標(biāo)儀剛開始運(yùn)行,機(jī)器運(yùn)行不穩(wěn)定,如過不預(yù)熱,讀數(shù)不準(zhǔn)確。儀器應(yīng)放置在無強(qiáng)磁場和干擾電壓的位置;儀器應(yīng)放置在噪音低于40分貝的環(huán)境下;為延緩光學(xué)部件的老化,應(yīng)避免陽光直射;操作環(huán)境溫度應(yīng)在15-40之
29、間,環(huán)境濕度在15%85%之間;操作時(shí)電壓應(yīng)保持穩(wěn)定;操作環(huán)境空氣清潔,避免水汽、煙塵;保持干燥、干凈、水平的工作臺面,以及足夠的操作空間。離心機(jī)使用應(yīng)注意哪些問題?離心機(jī)需放置在平的桌面上,放置不平易產(chǎn)生震動;離心管必須對稱放入離心機(jī)中(一定要將轉(zhuǎn)子的卡槽卡緊),防止機(jī)身震動;電動離心機(jī)如有噪音或機(jī)身振動時(shí),應(yīng)立即切斷電源,即時(shí)排除故障;離心結(jié)束后,待離心機(jī)轉(zhuǎn)速降至“0”時(shí)方能打開離心機(jī),切記不能強(qiáng)行關(guān)機(jī)取出樣品;離心機(jī)運(yùn)行期間,人員不能離開。氮吹儀使用注意事項(xiàng)?氮吹儀上針,使用前需要用甲醇清洗,甲醇有毒,清洗時(shí)注意防護(hù);加熱塊一經(jīng)加熱,切勿用手觸摸,以防燙傷;水浴加熱一定要先加水再通電,以
30、防燒壞加熱體;插拔導(dǎo)吹針最好拿針的中上端,不要只拿針的頂部,防止污染;為了方便用戶平時(shí)拔針容易,針頭做成尖頭的,注意防止劃傷;實(shí)驗(yàn)完畢及時(shí)關(guān)掉電源,以免造成不必要的損失和浪費(fèi)。電子天平的使用注意事項(xiàng)?電子天平應(yīng)處于水平狀態(tài);電子天平應(yīng)按說明書的要求進(jìn)行預(yù)熱;保持天平室內(nèi)的環(huán)境衛(wèi)生,更要保持天平稱量室的清潔,一旦物品撒落應(yīng)及時(shí)小心清除干凈;稱量易揮發(fā)和具有腐蝕性的物品時(shí),要盛放在密閉的容器內(nèi),以免腐蝕和損壞電子天平;操作天平不可過載使用,以免損壞天平;放入天平的物體溫度不宜太高以免損壞儀器一般溫度70;使用環(huán)境應(yīng)避免有風(fēng)或者陽光直射的地方;定期對電子天平校準(zhǔn),保持其準(zhǔn)確性。移液槍的使用注意事項(xiàng)?
31、槍頭安裝要得當(dāng),移液器按逆時(shí)針方向旋轉(zhuǎn)180度安裝槍頭,切記不可用力過大跺槍;量程調(diào)節(jié),遵循“先快后慢”的原則,即近量程時(shí)降低調(diào)節(jié)速度;槍頭潤洗2-3次,吸取揮發(fā)性液體或者有機(jī)溶劑時(shí)增加潤次數(shù)至洗4-5次;移液槍槍頭應(yīng)垂直插入液面,插入液面不宜過深,保持槍頭進(jìn)入液面不超過5mm為宜;吸取液體時(shí)應(yīng)遵循“慢吸快打”的原則;移液槍使用結(jié)束后調(diào)回最大量程,以保證移液槍的準(zhǔn)確性;定期對移液器進(jìn)行矯正。移液槍的維護(hù)及保養(yǎng)?定期清潔我們手中的移液器,用酒精棉即可,主要擦拭手柄、彈射器及白套筒外部,降低了對樣品產(chǎn)生污染的可能性;在吸取過高揮發(fā)、高腐蝕液體后,應(yīng)將整支移液器拆開,用蒸餾水沖洗活塞桿及白套筒內(nèi)壁,
32、并在晾干后安裝使用。以免揮發(fā)性氣體長時(shí)間吸附于活塞桿表面,對活塞桿產(chǎn)生腐蝕,損壞移液器。為什么加樣時(shí)使用差量法“吸二打一”?使用差量法應(yīng)該注意哪些問題?移液器差量法即吸取液體到移液器的第二檔,打出液體時(shí)到移液器的第一檔,ELISA法微孔加樣,加樣要準(zhǔn)確,相比而言差量法在微量加液時(shí)更精確。在使用差量法時(shí),操作人員一定要數(shù)量,且加液時(shí)槍頭上的一滴液體不能落入板孔中,移液器要定期校對。實(shí)驗(yàn)中使用的耗材特別是重復(fù)使用的耗材應(yīng)需要注意哪些?試驗(yàn)中所用的槍頭和離心管,槍頭均一次性使用,采購時(shí)應(yīng)選用質(zhì)量較好的槍頭,特別是黃槍頭如質(zhì)量不過關(guān)易造成加樣時(shí)側(cè)漏造成板孔間交叉;50ml和15ml離心管是重復(fù)使用的,
33、用完后一定要清洗干凈才能使用,清洗不干凈易造成交叉;加樣用的5ml和10ml槍頭也是重復(fù)使用的,使用后能置于封口袋中避免污染;重復(fù)使用的耗材建議2-3月更換一批。重復(fù)使用的耗材如何清洗?重復(fù)使用的耗材應(yīng)先用清水清洗干凈(特別是50ml離心管蓋),其后置于超聲波清洗儀中30min,后使用去離水超聲10min,60烘干備用。Elisa(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn))中影響因素有哪些?樣本保存-試劑盒質(zhì)量及其保存-試劑-加樣-溫浴-洗板試劑選擇應(yīng)注意哪些?易燃應(yīng)注意保存遠(yuǎn)離火源;有機(jī)試劑有毒性,做實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)注意帶手套口罩,試劑配置實(shí)用在通風(fēng)櫥中進(jìn)行。加樣中易出現(xiàn)的問題有哪些?加樣時(shí)移液槍應(yīng)垂直加樣,避免液體加至孔
34、壁上;使用差量法“吸二打一”槍頭最后一滴不能滴入板孔;應(yīng)熟練加樣,減少加樣時(shí)間對試驗(yàn)結(jié)果的影響;如果樣本數(shù)量較多,加入終止液時(shí)應(yīng)依次先加樣本,其后再終止標(biāo)準(zhǔn)品。洗板對實(shí)驗(yàn)的影響有哪些?洗板時(shí)應(yīng)注意控制移液槍(如使用排槍應(yīng)特別注意),要垂直將洗液打入板孔,以免漏液,造成洗液不足;洗板時(shí)震蕩不宜過猛,易造成抗原抗體復(fù)合物脫離;洗板時(shí)應(yīng)注意控制時(shí)間,嚴(yán)格掌握在試劑盒要求的時(shí)間內(nèi)(LX、CZ、JS 15-20苗,WJ 20苗);洗滌后的液體,建議使用“拋板”的方式將洗液甩出;拍板力度要適宜,板孔中如有氣泡,建議用槍頭扎破。樣品稱量時(shí)需要注意哪些?稱量前應(yīng)檢查天平的準(zhǔn)確性;稱量時(shí)將樣品置于管底(WJ和C
35、Z置于管中下貼壁);稱量樣品時(shí)使用的稱量勺要擦拭干凈,避免交叉污染;稱量使用的離心管、稱量勺要保持干燥避免沾水??贵w產(chǎn)生黑色沉淀為什么?如何解決避免?抗體成分為蛋白質(zhì),操作不當(dāng)易造成污染,導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性產(chǎn)生黑色沉淀。在使用抗體時(shí)避免槍頭污染,抗體存放要規(guī)范,使用后應(yīng)及時(shí)放到4保存。終止反應(yīng)原理是什么,加終止液應(yīng)該注意什么?如終止液不慎濺到皮膚上如何處理?終止液成分為2M硫酸,硫酸破壞蛋白質(zhì)(酶,抗原,抗體),終止反應(yīng)。加終止液需要量準(zhǔn)確,加終止液迅速,不要灑落在衣服,皮膚上。如果不慎濺到皮膚上,請立刻使用清水沖洗。加樣過程中,反應(yīng)從加入哪一種工作液才開始?加該液體應(yīng)注意哪些?一般來說,加入抗體
36、工作液,反應(yīng)開始。故在操作過程中,加抗體工作液在保證計(jì)量準(zhǔn)確的前提下,要提高加樣速度,以確保樣品反應(yīng)時(shí)間一致。濃縮液和洗滌液配置時(shí)易出現(xiàn)哪些問題,如何處理?洗滌液和樣品稀釋液已形成結(jié)晶,在配置時(shí),需要注意稀釋倍數(shù),加量準(zhǔn)確,配置時(shí)請用蒸餾水或純凈水,不要使用礦泉水和自來水配置。比例請按照說明書來配置。離心機(jī)重力單位和轉(zhuǎn)速如何換算?離心機(jī)轉(zhuǎn)速與相對離心力的換算公式為:RCF=11.18(RPM/1000)2Rrpm=299RCF/R另類換算方法:r/min=1000G/(11.18半徑1/2r/min=1000400/(11.18半徑1/2R為半徑,RCF相對離心力,rpm為轉(zhuǎn)速,為開平方;“半
37、徑”為離心機(jī)軸中央到水平離心機(jī)試管底部的距離,或垂直式離心機(jī)試管口中央的距離。CZ樣品前處理中,正己烷的作用是什么?正己烷的作用是除雜,吸收油脂。CZ標(biāo)準(zhǔn)品濃度為0;0.3;0.9;2.7;8.1;24.3,我們內(nèi)控限為100ppb,試劑盒方法更改,兩種不同的稀釋方法,2倍稀釋和5倍稀釋哪一種更好?5倍稀釋相對更好一些,24.3X5=121.5,24.3X2=48.6,如果用2倍稀釋,咱們的內(nèi)控限會落在曲線外面,使用5倍稀釋,可使內(nèi)控限的標(biāo)準(zhǔn)100ppb落在曲線上,故而5倍稀釋更好。CZ檢測過程中加入A、B混合液之后反應(yīng)速度快,應(yīng)該注意什么,初學(xué)的人應(yīng)該如何操作?初學(xué)者如果速度不夠快,可以先A
38、液和B液分開加入,后期使用熟練最好A液和B液混勻以后一起加入。造成曲線整體上移的原因有哪些?第一,標(biāo)準(zhǔn)品污染,第二,標(biāo)準(zhǔn)品降解,第三,酶降解,第四,酶標(biāo)板上抗原或抗體降解,第五,點(diǎn)板速度慢,第六,AB液污染,第七,人為操作原因。曲線整體下移的原因有哪些?第一,標(biāo)準(zhǔn)品污染,第二,有些項(xiàng)目中酶未被稀釋,第三,AB液污染,第四,人為操作原因。(曲線一般出現(xiàn)問題時(shí)上移情況居多)標(biāo)準(zhǔn)曲線中,相關(guān)系數(shù)是什么,有哪些含義,最低要求多少?相關(guān)系數(shù)是用以反映變量之間相關(guān)關(guān)系密切程度的統(tǒng)計(jì)指標(biāo)。相關(guān)系數(shù)是按積差方法計(jì)算,同樣以兩變量與各自平均值的離差為基礎(chǔ),通過兩個(gè)離差相乘來反映兩變量之間相關(guān)程度;著重研究線性的
39、單相關(guān)系數(shù)。線性相關(guān)系數(shù),一般用字母r 表示,用來度量兩個(gè)變量間的線性關(guān)系,要求相關(guān)系數(shù)大于0.9700。標(biāo)準(zhǔn)曲線如何制作的?顏色反應(yīng)定量的原理?以相應(yīng)樣品的稀釋倍數(shù),方得樣品中檢測物含量。具體參考說明書中“10計(jì)算”。顏色反應(yīng)定量的原理:即直接競爭法和間接競爭法比如磺胺:樣品中的磺胺類藥物與酶標(biāo)板上固定的抗原特異性競爭抗體,加入酶標(biāo)記物,催化顯色,根據(jù)顯色的深淺來判斷樣品中磺胺類藥物的含量,顯色深,含量少,顯色淺,含量多。點(diǎn)板操作時(shí),為什么不能對著板子說話?顯色反應(yīng)時(shí)酶促反應(yīng),酶催化底物顯色,唾液中含有多種酶,影響顯色反應(yīng)造成實(shí)驗(yàn)誤差,點(diǎn)板時(shí)需要佩戴口罩,且不能對著板子說話。63.新批次的試
40、劑盒如何評估質(zhì)量,如何操做?新到試劑盒需要評估質(zhì)量,評估方法:第一次使用時(shí),需要添加陰、陽性對照,添加回收率對照?;厥章?(添加高標(biāo)濃度-陰性樣本濃度)/添加濃度100%,(陰性樣本要求:濃度10ppb以下)。濃度單位ppb換算關(guān)系計(jì)算?ppb:ng/g,即每克樣品中藥物量是ng(固體間); ng/ml即一毫升溶液中含有藥物量是ng(液體間)。1ppm=1000ppb;1ppb=1000ppt。1g=1000mg;1mg=1000ug;1ug=1000ng。例1:磺胺藥物6號標(biāo)準(zhǔn)品濃度時(shí)162ppb,為162ng/ml即每毫升溶液磺胺藥物量為162ng。例2:樣品檢測出磺胺濃度為100ppb,
41、為100ng/g,即每克肉樣中含有磺胺濃度為100ng。例3:使用162ppb的磺胺6號標(biāo)準(zhǔn)品制作100ppb的樣品(假設(shè)樣本為陰性),樣本1g。計(jì)算如下:設(shè)使用磺胺6號標(biāo)準(zhǔn)品(162ppb)量為x毫升100ng / 1g = 162ng / x X = 0.66667ml(即666.67ul)VDR檢測中回收率有什么代表意義,如何控制?回收率分為2種,空白加標(biāo)回收率和樣品加標(biāo)回收??瞻准訕?biāo)回收率=(添加高標(biāo)濃度-空白樣本濃度)/添加濃度100%(使用沒有藥物的樣本)樣品加標(biāo)回收率=(添加高標(biāo)樣本濃度-樣本濃度)/添加濃度100%(使用待檢樣本中的木一個(gè)樣本)每個(gè)試劑盒回收率如何控制?每批新試
42、劑盒第一次使用時(shí)需要做回收率試驗(yàn),日常VDR檢測時(shí)每板需要監(jiān)測回收率,要求回收率在80%-120%之間夏天試劑盒易出現(xiàn)哪些問題?造成原因是什么?如何解決?溫度高造成抑制率上升,控制環(huán)境溫度,監(jiān)控反應(yīng)溫度。VDR檢測結(jié)果單據(jù)包括哪3種單據(jù)類型,并簡述3個(gè)單據(jù)對應(yīng)的樣品類型正常檢測,為某雞群首檢樣品;不合格復(fù)采復(fù)檢:正常檢測不合格,休藥期過后再次采樣檢測樣品;平臺飛檢:為了監(jiān)管首檢合格后農(nóng)戶再次用藥,平臺不定期抽檢的樣品張三家飼養(yǎng)的混群雪山草雞,臨上市公雞檢測不合格,需要復(fù)采復(fù)檢。15天后復(fù)采的公雞樣品與母雞樣品同時(shí)檢測,且均合格。請簡述錄入金蝶方法。新增單據(jù)選擇“復(fù)采復(fù)檢”單據(jù)類型篩選農(nóng)戶張三公
43、雞一欄輸入檢測明細(xì)審核、關(guān)閉新增單據(jù)默認(rèn)正常檢測單據(jù)類型篩選農(nóng)戶張三母雞一欄輸入檢測明細(xì)審核、關(guān)閉飼料新標(biāo)準(zhǔn)玉米的檢測方法和分級標(biāo)準(zhǔn)?答案參見GB 1353-2009 玉米國家標(biāo)準(zhǔn)等級容重/(g/L)不完善粒/%霉粒/%雜質(zhì)/%水分色澤氣味17204.02.01.014.0正常26856.02.01.014.0正常36508.02.01.014.0正常462010.02.01.014.0正常559015.02.01.014.0正常等外590不要求2.01.014.0正常2準(zhǔn)采樣的方法和步驟?滴定分析(容量分析)用標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備具有那些規(guī)定?a.制備過程中所用的水,在沒有注明其他要求時(shí),應(yīng)符合G
44、B 6682中三級水的規(guī)格。b.制備過程中所用試劑的純度應(yīng)在分析純以上。c.工作中所用分析天平的砝碼、滴定管、容量瓶及移液管均需定期校正。d.制備過程中標(biāo)定時(shí)所用的基準(zhǔn)試劑為容量分析工作基準(zhǔn)試劑,制備標(biāo)準(zhǔn)溶液時(shí)所用的試劑為分析純以上試劑。e.制備過程中所制備的標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度均指20時(shí)的濃度。在標(biāo)定和使用時(shí),如溫度有差異,應(yīng)按附(補(bǔ)充件)補(bǔ)正。f.“標(biāo)定”標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度時(shí),平行試驗(yàn)不得少于八次,兩人各作四平行,每人四平行測定結(jié)果的極差與平均值之比不得大于0.1%。兩人測定結(jié)果平均值之差不得大于0.1%,結(jié)果取平均值。濃度值取四位有效數(shù)字。g.制備的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度與規(guī)定濃度相對誤差不得大于5%。h.配
45、制濃度等于或低于0.02mol/L標(biāo)準(zhǔn)溶液時(shí),應(yīng)于臨用前將高溶液的標(biāo)準(zhǔn)溶液用煮沸并冷卻的水稀釋,必要時(shí)重新標(biāo)定。i.滴定分析(容量分析)用標(biāo)準(zhǔn)溶液在常溫(1525)下,保存時(shí)間一般不得超過兩個(gè)月。簡述粗蛋白、粗灰分、粗纖維、粗脂肪、鈣磷的原理及操作步驟(5選1)參考化驗(yàn)手冊6請簡述酸價(jià)的定義(或測定原理)、所用試劑、操作方法;夏季使用油脂注意事項(xiàng)。定義:酸價(jià)(酸值)是指中和1.0g油脂所含游離脂肪酸所需氫氧化鉀的毫克數(shù)。(或原理):油脂中的游離脂肪酸與氫氧化鉀產(chǎn)生中和反應(yīng),從氫氧化鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液消耗量可計(jì)算出游離脂肪酸的量。試劑:中性醇醚混合液或中性苯醇混合液;(1%)酚酞指示劑;(0.1N)氫氧化鈉(鉀)標(biāo)準(zhǔn)溶液。方法:準(zhǔn)確稱取油樣0.5g1.0g,置于燒杯中,加入混合溶劑50ml,振搖溶解(必要時(shí)溫?zé)幔?,加入酚酞指示?4滴,用0.1N氫氧化鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至淡紅色于1min內(nèi)不褪色為終點(diǎn)。7請簡述“飼料原料驗(yàn)收入庫流程”、
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