體外誘導(dǎo)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向類視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞分化的研究

1、 中國醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文體外誘導(dǎo)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向類視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞分化的研究姓名：安剛申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：眼科學(xué)指導(dǎo)教師：洪晶20070401 申請學(xué)位論文與資料若有不實(shí)之處，本人承擔(dān)一切相關(guān)責(zé)任。日期：壘豪跡海豪糩本人完全了解中國醫(yī)科大學(xué)有關(guān)保護(hù)知識產(chǎn)權(quán)的規(guī)定，即：研究生在攻讀學(xué)位期間論文工作的知識產(chǎn)權(quán)單位屬中國醫(yī)科大學(xué)。本人保證畢業(yè)離校后，發(fā)表論文或使用論文工作成果時署名單位為中國醫(yī)科大學(xué)，且導(dǎo)師為通訊作者，通訊作者單位亦署名為中國醫(yī)科大學(xué)。學(xué)校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許日期： 的，具有復(fù)雜的結(jié)構(gòu)和特殊 接種于孔板的軟件：分別加入不同引物、內(nèi)參照

2、錚琍終體系山。三、檢測分化的色素上皮樣細(xì)胞的吞噬功能參照等的雙重?zé)晒鈽?biāo)記法。用含有終濃度為蚓的生長液孵用熒光顯微鏡觀察， 細(xì)胞結(jié)合及吞噬謀浠榭觶喚玀細(xì)胞設(shè)為對照組。洗一次，加入的戊二醛固定，備電鏡觀察。薓的培養(yǎng)及鑒定 三、檢測分化的色素上皮樣細(xì)胞的吞噬功能只納厴掀赴哂蠷細(xì)胞特異的基因表達(dá)。只納厴掀赴哂型淌蒖的功能。視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞；骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞；籑；吞噬 甌 甴甿 ，瓵瓺 甀 瓵琑 畆， 瑃 琣， 猚狿甌 ；籑； 上皮樣細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)方法一、細(xì)胞培養(yǎng)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)及鑒定 痬離心，取含有的單核細(xì)胞層，加入含孵箱中培養(yǎng)。小時后，更換新鮮培養(yǎng)液，去除未貼壁細(xì)胞，以斯撬鐼表型特點(diǎn)鑒定 體及

3、視網(wǎng)膜神經(jīng)上皮層，撼逑囪郾次，將眼杯移入另外一個無菌平皿中，三、分化細(xì)胞的角蛋白鑒定 結(jié) 圖，人的表達(dá)陽性，綠色熒光遍及胞質(zhì) 的色素顆粒 顆粒；與人赴餐嘌腗榭齷鞠嗨?，M小時貼壁，呈 圖，對照組始終為長梭形，未出現(xiàn)色素樣細(xì)胞 。目前鑒定的方法都是通過在培養(yǎng)過程中出現(xiàn)分化表型，然后逆推得知是 能否被誘導(dǎo)成色素上皮樣細(xì)胞目前還未有報道。本研究利用雙層組始終為長梭形，未出現(xiàn)色素樣細(xì)胞。 功能的對比研究 超凈臺、倒置顯微鏡、離心機(jī)、培養(yǎng)箱、程序化降溫儀、液氮罐，免疫熒光痳胄，取含有的單核細(xì)胞層，胰蛋白酶消化，胎牛血清終止。 g嗔疵顧兀俅吻崆崠蕩虺蒖細(xì)胞懸液后均勻的種在二、質(zhì)量檢測水，在分光光度計(jì)上測 按

4、照公布的蚆基因序列，應(yīng)用互聯(lián)網(wǎng)提供的軟件反應(yīng)：反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物 痯甶三、分化的色素上皮樣細(xì)胞吞噬動力學(xué)檢測 量。合并三次離心所得上清，并加入二倍于其體積的撼逡，參照鵲乃賾獗曇欠煤兄張任用熒光顯微鏡觀察， 吞噬現(xiàn)象 吞噬脫落的視細(xì)胞外節(jié)膜盤的功能維持至關(guān)重要。蚆對于維持正 只納厴掀赴哂型淌蒖的功能。 共培養(yǎng)體系的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。 參考文獻(xiàn)劉厚奇，馮根生人干細(xì)胞的分化研究及藪燦錳剿鰨詼醬笱：；：浚瓻甋，甋叮： 甁 甐甌 瓾；：！：；：】 ，； 甒： 珻 印現(xiàn)，甈猺。甊；： 李光艉吳樂正；視網(wǎng)膜移植技出版社：第頁甅 籺； 瓾甊； 籧瓾甈： 一、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞研究進(jìn)展的體外培養(yǎng)始于世紀(jì)年代中期

5、甋等開始能多次傳代，這些細(xì)胞就是。 齬撬櫨瀉訟赴性己個，并且隨著年 地塞米松，胰島素，諄一異丁基黃嗦吟，血小板衍生生長因子狟堿性成纖維生長因子二甲基枉楓，地塞米松 是指損害眼表功能與結(jié)構(gòu)的疾病【”。解剖學(xué) 此降畝嗡鶘死礪 斯銜h死嗍油乇湫鑰贍苡蒖缺陷所致，但 的標(biāo)本，分離到浦燦謾視隦移植相同。性玻璃體視網(wǎng)膜病變、黃斑水腫等一系列問題不能得到解決，而不能取得實(shí)質(zhì)性的進(jìn)展，還有很長的路要走。組織細(xì)胞工程尤其是干細(xì)胞工程的興起為視網(wǎng)膜損傷的治療提供了一種新的途徑。于細(xì)胞、組織工程學(xué)以及神經(jīng)細(xì)胞發(fā)育、分化調(diào)控與定向生長研究的進(jìn)展，為我們最終有效治療這些眼疾，恢復(fù)患者視功能提供了個契機(jī)?，F(xiàn)研究發(fā)現(xiàn)利用胚胎干細(xì)胞在體外成功定向誘導(dǎo)成為神經(jīng)細(xì)胞及在腦組織內(nèi)外擴(kuò)增；這與來源稀少、取材較困難、體外培養(yǎng)條件苛刻的神經(jīng)干細(xì)胞、胚胎干 參考文獻(xiàn)瓻；甋，；： 琣：琑 出琒；，髓劉艷，隋虹，羅志忠，盧明俊糖尿病性視網(wǎng)膜病變與糖