實(shí)驗(yàn)4 離體蛙心灌流

1、實(shí)驗(yàn)四實(shí)驗(yàn)四 蛙類(lèi)離體心臟灌流 【目的】【目的】1.1.學(xué)習(xí)斯氏離體蛙心灌流法學(xué)習(xí)斯氏離體蛙心灌流法2.2.觀察觀察K+K+、Ca2+Ca2+及腎上腺素、乙酰膽堿等對(duì)離及腎上腺素、乙酰膽堿等對(duì)離體心臟活動(dòng)的影響。體心臟活動(dòng)的影響。 【原理】n心肌具有自動(dòng)節(jié)律性、傳導(dǎo)性和興奮性三大心肌具有自動(dòng)節(jié)律性、傳導(dǎo)性和興奮性三大特征。特征。n離體和脫離神經(jīng)支配的動(dòng)物心臟離體和脫離神經(jīng)支配的動(dòng)物心臟, ,保持在適當(dāng)保持在適當(dāng)?shù)沫h(huán)境中的環(huán)境中, ,在一定的時(shí)間內(nèi)在一定的時(shí)間內(nèi), ,仍然能夠有節(jié)律性仍然能夠有節(jié)律性地產(chǎn)生興奮和收縮。地產(chǎn)生興奮和收縮。n利用心肌細(xì)胞的這一特性利用心肌細(xì)胞的這一特性, ,可用來(lái)制作

2、離體心可用來(lái)制作離體心臟模型臟模型, ,通過(guò)灌流液中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、電解質(zhì)等的通過(guò)灌流液中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、電解質(zhì)等的變化變化, ,來(lái)觀察心肌能量代謝、相應(yīng)藥物、毒素來(lái)觀察心肌能量代謝、相應(yīng)藥物、毒素和電解質(zhì)水平對(duì)心肌活動(dòng)的影響。和電解質(zhì)水平對(duì)心肌活動(dòng)的影響?！緝x器與設(shè)備】 n蟾蜍，蟾蜍，n蛙用手術(shù)器械，蛙心套管，蛙心夾，張蛙用手術(shù)器械，蛙心套管，蛙心夾，張力換能器，力換能器，nRM6240RM6240，任氏液，任氏液，2%CaCl2%CaCl2 2，2%KCl2%KCl，0.01%0.01%腎上腺素，腎上腺素，0.01%0.01%乙酰膽堿。乙酰膽堿。（一）離體蛙心灌流制作（一）離體蛙心灌流制作1.1.破壞

3、蟾蜍腦和脊髓，暴露心臟，剪除破壞蟾蜍腦和脊髓，暴露心臟，剪除心包膜和肝系膜（心包膜和肝系膜（不要損傷血管不要損傷血管）2.2.第第1 1次結(jié)扎：雙結(jié)扎右主動(dòng)脈次結(jié)扎：雙結(jié)扎右主動(dòng)脈3.3.第第2 2次結(jié)扎：結(jié)扎左右肺靜脈、前腔次結(jié)扎：結(jié)扎左右肺靜脈、前腔靜脈（靜脈（遠(yuǎn)離靜脈竇遠(yuǎn)離靜脈竇） 4.4.第第3 3次結(jié)扎：在左右肝靜脈和后腔靜脈次結(jié)扎：在左右肝靜脈和后腔靜脈下穿線下穿線在右肝靜脈（或左肝靜脈、或在右肝靜脈（或左肝靜脈、或后腔靜脈）后腔靜脈）上用眼科剪剪一斜口上用眼科剪剪一斜口用加用加有任氏液的有任氏液的蛙心套管靜脈插管蛙心套管靜脈插管插入剪口插入剪口結(jié)扎固定結(jié)扎固定（遠(yuǎn)離靜脈竇遠(yuǎn)離靜脈

4、竇） 5. 5. 第第4 4次結(jié)扎：在次結(jié)扎：在左主動(dòng)脈左主動(dòng)脈下穿線下穿線在動(dòng)在動(dòng)脈上剪一斜口脈上剪一斜口插入動(dòng)脈蛙心套管插入動(dòng)脈蛙心套管動(dòng)脈動(dòng)脈插管插管（不要插入動(dòng)脈球內(nèi)不要插入動(dòng)脈球內(nèi)） 結(jié)扎固定結(jié)扎固定6. 6. 在所有結(jié)扎處在所有結(jié)扎處外緣遠(yuǎn)離心臟端外緣遠(yuǎn)離心臟端剪除周剪除周?chē)?，將與蛙心套管靜脈插管和動(dòng)脈圍血管，將與蛙心套管靜脈插管和動(dòng)脈插管的離體蛙心固定在鐵架臺(tái)上插管的離體蛙心固定在鐵架臺(tái)上離體蛙心循環(huán)回路靜脈插管靜脈插管動(dòng)脈插管動(dòng)脈插管橡膠連接管橡膠連接管蛙心灌流裝置安裝通道通道1受滴信號(hào)線受滴信號(hào)線RM6240記錄系統(tǒng) n點(diǎn)擊“實(shí)驗(yàn)”菜單，選擇“蛙心灌流”，系統(tǒng)進(jìn)入信號(hào)記錄

5、狀態(tài)。n儀器參數(shù)：通道，時(shí)間常數(shù)：直流；濾波頻率10Hz；靈敏度3g，采樣頻率400Hz，掃描速度1s/div。實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目 1.描記正常的蛙心搏動(dòng)曲線，觀察心跳頻率，心室收縮和舒張程度。2.向套管的任氏液中加2%CaCl21滴，觀察并記錄心博曲線的變化。實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目3.當(dāng)心臟恢復(fù)正常時(shí)，向套管內(nèi)加入2滴2%KCl溶液，觀察心搏變化頻率和幅度，當(dāng)曲線出現(xiàn)明顯變化時(shí)，立即更換任氏液。4.當(dāng)心臟恢復(fù)正常時(shí)，向套管內(nèi)加入1滴0.01%腎上腺素溶液，觀察心搏變化頻率和幅度，當(dāng)曲線出現(xiàn)明顯變化時(shí)，立即更換任氏液。5.當(dāng)心臟恢復(fù)正常時(shí)，向套管內(nèi)加入1滴0.01%乙酰膽堿溶液，觀察心搏變化頻率和幅度，當(dāng)曲線出現(xiàn)明顯

6、變化時(shí)，立即更換任氏液?！咀⒁馐马?xiàng)】n每次換液時(shí)液面應(yīng)保持一定的高度。n每次換液或滴加試劑時(shí)應(yīng)打標(biāo)記。n每個(gè)試劑瓶的滴管不能混淆，以免沾污試劑，影響結(jié)果。n心臟表面隨時(shí)滴加任氏液，以免干燥。n待心跳恢復(fù)正常后進(jìn)行下一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)。表1 CaCl2、KCl 、腎上腺素和乙酰膽堿對(duì)心肌收縮力、心輸出量和心率的影響實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目心收縮張力（克）心輸出量（滴/min）心率（次/min）對(duì)照1-2滴2%CaCl21-2滴2%KCl1-2滴10-4腎上腺素1-2滴10-4乙酰膽堿 Ca2+作用機(jī)制：1.使慢反應(yīng)自率細(xì)胞0期去極化加強(qiáng)，傳導(dǎo)性加強(qiáng)。2.慢反應(yīng)自率細(xì)胞4期自動(dòng)去極化速度加快，自率性加強(qiáng)。3.快反應(yīng)工作肌細(xì)

7、胞進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)Ca2+多，心肌收縮力加強(qiáng)。K+影響的機(jī)制：1.心肌收縮力下降細(xì)胞外液ca2+、K+存在競(jìng)爭(zhēng)性抑制關(guān)系， K+濃度升高時(shí)， ca2+內(nèi)流減少，心肌細(xì)胞興奮一收縮耦聯(lián)作用減弱，心肌收縮力下降。2.心率減慢細(xì)胞外液K+濃度升高使膜對(duì)K+通透性升高，因此4相的K+外向電流增大，延緩了4相的凈內(nèi)向電流的自動(dòng)除極化效應(yīng)，使心肌細(xì)胞自律性下降，心率減慢。腎上腺素作用機(jī)制：心臟，腎上腺素與腎上腺素能受體結(jié)合產(chǎn)生正性變時(shí)、變力和變傳導(dǎo)作用，導(dǎo)致心率加快，傳導(dǎo)速度加快，使心輸出量增加，心肌收縮力增強(qiáng)。激活心肌細(xì)胞膜上的腺苷酸還化酶，使細(xì)胞內(nèi) cAMP濃度增加，cAMP能激活心肌細(xì)胞膜上的鈣通道，使心肌動(dòng)作電位平臺(tái)期的內(nèi)流增加，心肌收縮力增強(qiáng)。乙酰膽堿作用機(jī)制：n乙酰膽堿與心肌細(xì)胞膜上毒蕈堿型(M型)乙酰膽堿受體結(jié)合，導(dǎo)致心率減慢，心房肌收縮能力減弱，心房肌不應(yīng)期縮短，房室傳導(dǎo)速度減慢，即具有急性變時(shí)、變力及變傳導(dǎo)作用。n乙酰膽堿能普遍提高膜上K+通道的通透性，促使K+外流增加，從而使靜息電位絕對(duì)值增大，心肌興奮性下降，使心率減慢；復(fù)極加速，動(dòng)作電位時(shí)程縮短，有效不應(yīng)期縮短，由于乙酰膽堿能提高膜上K+通道的通透性，促使K+外流增加，復(fù)極加速，Ca2+內(nèi)流量減少。加之乙酰膽堿可直接抑制Ca2+通道，減少內(nèi)向Ca2+流的作用，致使心肌