基因工程原理練習(xí)題及答案

1、基因工程原理練習(xí)題及其答案、填空題1 基因工程是 年代發(fā)展起來的遺傳學(xué)的一個分支學(xué)科。2 基因工程的兩個基本特點(diǎn)是： (1) ， (2) 。3 基因克隆中三個基本要點(diǎn)是： ；和。4 通過比較用不同組合的限制性內(nèi)切核酸酶處理某一特定基因區(qū)域所得到的不同大小的片段，可以構(gòu)建顯示該區(qū)域各限制性內(nèi)切核酸酶切點(diǎn)相互位置的 。5 限制性內(nèi)切核酸酶是按屬名和種名相結(jié)合的原則命名的，第一個大寫字母取自 ，第二、三兩個字母取自，第四個字母則用 表示。6部分酶切可采取的措施有： (1)(2) (3) 等。7第一個分離的限制性內(nèi)切核酸酶是 ；而第一個用于構(gòu)建重組體的限制性內(nèi)切核酸酶是 。8限制性內(nèi)切核酸酶 BsuR

2、I 和 Hae的來源不同，但識別的序列都是 ，它們屬于 。9 DNA聚合酶 I 的 Klenow 大片段是用 切割 DNA聚合酶 I 得到的分子量為 76kDa 的大片段，具有兩種酶活性： (1) ； (2) 的活性。10為了防止 DNA的自身環(huán)化，可用 去雙鏈 DNA。11 EDTA是離子螯合劑。12測序酶是修飾了的 T7 DNA 聚合酶，它只有 酶的活性，而沒有 酶的活性。13切口移位 (nick translation)法標(biāo)記 DNA的基本原理在于利用 的和 的作用。14欲將某一具有突出單鏈末端的雙鏈 DNA分子轉(zhuǎn)變成平末端的雙鏈形式，通?？刹捎?或 15反轉(zhuǎn)錄酶除了催化 DNA的合成外

3、，還具有 的作用，可以將 DNA-RNA 雜種雙鏈中的 水解掉。16基因工程中有 3 種主要類型的載體： 、 、。17就克隆一個基因 (DNA 片段 ) 來說，最簡單的質(zhì)粒載體也必需包括三個部分： 、。另外，一個理想的質(zhì)粒載體必須具有低分子量。18 一個帶有質(zhì)粒的細(xì)菌在有 EB的培養(yǎng)液中培養(yǎng)一段時間后，一部分細(xì)胞中已測 不出質(zhì)粒，這種現(xiàn)象叫。19 pBR322 是一種改造型的質(zhì)粒， 它的復(fù)制子來源于 ，它的四環(huán)素抗性基 因來自于 它的氨芐青霉素抗性基因來自于。20 YAC的最大容載能力是， BAC載體的最大容載能力是。21 pSCl01 是一種復(fù)制的質(zhì)粒。22pUCl8 質(zhì)粒是目前使用較為廣泛

4、的載體。 pUC系列的載體是通過和 兩種質(zhì)粒改造而來。它的復(fù)制子來自 ， Amp 抗性基因則是來自 。23 噬菌體之所以被選為基因工程載體，主要有兩方面的原因：一是； 二24 野生型的 M13不適合用作基因工程載體，主要原因是和。25 黏粒 (cosmid) 是質(zhì)粒噬菌體雜合載體，它的復(fù)制子來自、 COS位點(diǎn)序列來自，最大的克隆片段達(dá)到 kb 。26 野生型的 噬菌體 DNA不宜作為基因工程載體，原因是： (1)(2) (3) 。27噬菌粒是由質(zhì)粒和噬菌體 DNA共同構(gòu)成的，其中來自質(zhì)粒的主要結(jié)構(gòu)是，而來自噬菌體的主要結(jié)構(gòu)是 。28 噬菌體載體由于受到包裝的限制，插入外源DNA片段后，總的長度

5、應(yīng)在噬菌體基因組的 的范圍內(nèi)。29 在分離 DNA時要使用金屬離子螯合劑，如EDTA和檸檬酸鈉等，其目的是30 用乙醇沉淀 DNA時，通常要在 DNA溶液中加人單價的陽離子，如 NaCl 和 NaAc， 其目的是 。31 引物在基因工程中至少有 4 個方面的用途： (1) (2)(3) (4) 。32Clark 發(fā)現(xiàn)用 Taq DNA聚合酶得到的 PCR反應(yīng)產(chǎn)物不是平末端，而是有一個突出 堿基末端的雙鏈 DNA分子。根據(jù)這一發(fā)現(xiàn)設(shè)計了克隆PCR產(chǎn)物的。33在 cDNA的合成中要用到 S1 核酸酶，其作用是切除在34乙醇沉淀 DNA的原理是。35 假定克隆一個編碼某種蛋白質(zhì)的基因，必須考慮其表達(dá)

6、的三個基本條件：(1) (2)(3) 。36 受體細(xì)胞的感受態(tài)是 。37 DNA 重組連接的方法大致分為四種： (1)(2)(3)(4) 。38 將含有外源基因組一個酶切片段的質(zhì)粒稱之為含有一個 ，各種此類質(zhì)粒的集合體稱之為構(gòu)建了一個 。39將含有一個 mRNA的 DNA拷貝的克隆稱作一個 ，源于同一批 RNA制備物的克隆群則構(gòu)建了一個 。40只要知道基因組中某一特定區(qū)域的部分核苷酸組成，用 可以將這段 DNA進(jìn)行百萬倍的擴(kuò)增。41人工感受態(tài)的大腸桿菌細(xì)胞在溫度為 時吸附 DNA, 時攝人 DNA。42目前，在重組體的篩選中，已經(jīng)發(fā)展了許多構(gòu)思巧妙、具有極高準(zhǔn)確性的篩選方法。大致可以分為： (

7、1)(2)(3)(4) 等。43PCR擴(kuò)增篩選重組體是比較簡便的篩選方法，它適合于 。44核酸雜交探針可分為兩大類： DNA 探針和 RNA探針。其中 DNA探針又分為 探針和 探針。45如果用限制性內(nèi)切核酸酶切割雙鏈DNA產(chǎn)生 5'突出的黏性末端，則可以用 進(jìn)行 3'末端標(biāo)記。如果用限制性內(nèi)切核酸酶切割 DNA產(chǎn)生的是 3'突出的黏性末端，可以用 進(jìn)行 3'末端標(biāo)記。46單鏈 DNA探針的標(biāo)記可以采用下列方法： (1)(2)(3) 。47根據(jù) Northern 雜交的結(jié)果可以說明： 。48差示雜交 (differential hybridization)技術(shù)需

8、要 。49RNA分子經(jīng)凝膠電泳后按大小不同分開，然后被轉(zhuǎn)移到一張硝酸纖維素膜(尼龍膜 )上，同一放射 DNA探針雜交的技術(shù)稱 。50在技術(shù)中， DNA限制性片段經(jīng)凝膠電泳分離后，被轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜(或尼龍膜 )上，然后與放射性的 DNA探針雜交。51可用 T4 DNA聚合酶進(jìn)行平末端的 DNA標(biāo)記，因?yàn)檫@種酶具有 和的活性。52根據(jù)外源片段提供的遺傳表型篩選重組體，必需考慮三種因素：(1)(2)(3) 。53 Northern 印跡和 Southern 印跡有兩點(diǎn)根本的區(qū)別：(1)(2) 。54放射免疫篩選的原理基于以下三點(diǎn)：(1)(2) (3) 。二、選擇題 ( 單選或多選 )1 因研究重

9、組 DNA技術(shù)而獲得諾貝爾獎的科學(xué)家是 ( )(a) A Kornberg (b)W Gilbert (c)P Berg (d)B McClintock2 第一個作為重組 DNA載體的質(zhì)粒是 ( )(a) pBR322 (b)ColEl (c)pSCl01 (d)pUCl83 關(guān)于宿主控制的限制修飾現(xiàn)象的本質(zhì)，下列描述中只有 ( ) 不太恰當(dāng)。(a) 由作用于同一 DNA序列的兩種酶構(gòu)成(b) 這一系統(tǒng)中的核酸酶都是類限制性內(nèi)切核酸酶(c) 這一系統(tǒng)中的修飾酶主要是通過甲基化作用對DNA進(jìn)行修飾(d) 不同的宿主系統(tǒng)具有不同的限制 - 修飾系統(tǒng)4型限制性內(nèi)切核酸酶：( )(a) 有內(nèi)切核酸酶和

10、甲基化酶活性且經(jīng)常識別回文序列(b) 僅有內(nèi)切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一種酶提供(c) 限制性識別非甲基化的核苷酸序列 (d) 有外切核酸酶和甲基化酶活性(e) 僅有外切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一種酶提供 5下面有關(guān)限制酶的敘述哪些是正確的( )(a)限制酶是外切酶而不是內(nèi)切酶(b)限制酶在特異序列 (識別位點(diǎn) ) 對 DNA進(jìn)行切割(c)同一種限制酶切割 DNA時留下的末端序列總是相同的(d)一些限制酶在識別位點(diǎn)內(nèi)稍有不同的點(diǎn)切割雙鏈DNA，產(chǎn)生黏末端(e)一些限制酶在識別位點(diǎn)內(nèi)相同的位置切割雙鏈DNA，產(chǎn)生平末端6第一個被分離的類酶是：( )(a) EcoK (b)Hind (

11、c)Hind (d)EcoB7在下列進(jìn)行 DNA部分酶切的條件中，控制那一項(xiàng)最好(a) 反應(yīng)時間 (b) 酶量 (c) 反應(yīng)體積 (d)酶反應(yīng)的溫度8在下列試劑中，那一種可以螯合Ca2+離子 ( )(a) EDTA (b) 檸檬酸鈉 (c)SDS (d)EGTA9在下列工具酶中，那一種可以被EGTA抑制活性 (a) S1 單鏈核酸酶 (b) 末端轉(zhuǎn)移酶 (c)堿性磷酸酶 (d)Bal 31 核酸酶10限制性內(nèi)切核酸酶可以特異性地識別：(a) 雙鏈 DNA的特定堿基對 (b) 雙鏈DNA的特定堿基序列(c) 特定的三聯(lián)密碼 (d) 以上都正確11下列關(guān)于限制性內(nèi)切核酸酶的表示方法中，正確一項(xiàng)的是

12、( ) 。(a)Sau3A I (b)E coRI (c)hind III (d)Sau 3A112限制性內(nèi)切核酸酶的星號活性是指： ( )(a) 在非常規(guī)條件下，識別和切割序列發(fā)生變化的活性。 (b) 活性大大提高(c) 切割速度大大加快 (d) 識別序列與原來的完全不同13下面哪一種不是產(chǎn)生星號活性的主要原因( )(a) 甘油含量過高 (b) 反應(yīng)體系中含有有機(jī)溶劑(c) 含有非 Mg2+的二價陽離子 (d) 酶切反應(yīng)時酶濃度過低14關(guān)于宿主控制的限制修飾現(xiàn)象的本質(zhì)，下列描述中只有( ) 不太恰當(dāng)(a) 由作用于同一 DNA序列的兩種酶構(gòu)成(b) 這一系統(tǒng)中的核酸酶都是類限制性內(nèi)切核酸酶(

13、c) 這一系統(tǒng)中的修飾酶主要是通過甲基化作用對DNA進(jìn)行修飾(d) 不同的宿主系統(tǒng)具有不同的限制 - 修飾系統(tǒng)15在長模板鏈的指導(dǎo)下引物延伸合成長的DNA互補(bǔ)鏈時應(yīng)選用 ( )(a) T4DNA 聚合酶 (b)Klenow 酶(c) 大腸桿菌 DNA聚合酶 I (d)T7DNA 聚合酶16末端轉(zhuǎn)移酶是合成酶類， ( )(a)作用時不需要模板(b)2+在 Ca2+的存在下，可以在突出的3，末端延長 DNA鏈(c)在 Ca2+的存在下，可以在隱蔽的3，末端延長 DNA鏈(d)上述說法有兩種是正確的17在基因工程中，可用堿性磷酸酶(a) 防止 DNA的自身環(huán)化 (b)同多核苷酸激酶一起進(jìn)行DNA的

14、5，末端標(biāo)記(c) 制備突出的 3，末端 (d)上述說法都正確18下列酶中，除 ( ) 外都具有磷酸酶的活性(a) 核酸外切酶 (b) 外切酶 (c) 單核苷酸激酶 (d) 堿性磷酸酶19 下列哪一種酶作用時需要引物 ( )(a) 限制酶 (b) 末端轉(zhuǎn)移酶 (c) 反轉(zhuǎn)錄酶 (d)DNA 連接酶20 S1核酸酶的功能是 ( )(a) 切割雙鏈的 DNA (b) 切割單鏈的 RNA (c) 切割發(fā)夾環(huán) (d) 以上有兩項(xiàng)是正確的21 Klenow 酶與 DNA聚合酶相比，前者喪失了 ( ) 的活性。(a)5 ， -3 ，合成酶，(b)3 ， -5 ，外切酶(c)5 ，-3 ，外切酶(d)轉(zhuǎn)移酶

15、22 下面關(guān)于松弛型質(zhì)粒 (relaxed plasmid) 性質(zhì)的描述中， ( ) 是不正確的(a) 質(zhì)粒的復(fù)制只受本身的遺傳結(jié)構(gòu)的控制，而不受染色體復(fù)制機(jī)制的制約， 因而有較多的拷貝數(shù)(b) 可以在氯霉素作用下進(jìn)行擴(kuò)增 (c) 通常帶有抗藥性標(biāo)記(d) 同嚴(yán)緊型質(zhì)粒融合后，雜合質(zhì)粒優(yōu)先使用松弛型質(zhì)粒的復(fù)制子23 基因工程中所用的質(zhì)粒載體大多是改造過的，真正的天然質(zhì)粒載體很少，在下列載體中只有 ( ) 被視為用作基因工程載體的天然質(zhì)粒載體(a)pBR322 (b)pSCl01 (c)pUBll0 (d)pUCl824 下列哪種克隆載體對外源 DNA的容載量最大 ( )(a) 質(zhì)粒 (b) 黏

16、粒 (c) 酵母人工染色體 (YAC) (d) 噬菌體 (e) cDNA 表達(dá)載體 25. 松弛型質(zhì)粒： ( )(a) 在寄主細(xì)胞中拷貝數(shù)較多 (b) 可用氯霉素擴(kuò)增(c) 一般沒有選擇標(biāo)記 (d)上述 (a) 、 (b) 兩項(xiàng)正確 26Col El 是惟一用作基因工程載體的自然質(zhì)粒，這種質(zhì)粒：(a) 是松弛復(fù)制型( b) 具有，四環(huán)素抗性(c) 能被氯霉素擴(kuò)增 (d) 能產(chǎn)生腸桿菌素27同一種質(zhì)粒 DNA，以三種不同的形式存在，電泳時，它們的遷移速率是：( )(a)OCDNA>SCDNA>LDNA (b)SCDNA>LDNA>OCDNA(c)LDNA>OCDNA

17、>SCDNA (d)SCDNA>OCDNA>LDNA28 pBR322是一種改造型的質(zhì)粒，含有兩個抗性基因，其中四環(huán)素抗性基因來自：( )(a)ColEl (b)Ri 質(zhì)粒 (c)pSCl01 (d)pUCl829關(guān)于穿梭質(zhì)粒載體，下面哪一種說法最正確( )(a) 在不同的宿主中具有不同的復(fù)制機(jī)制(b) 在不同的宿主細(xì)胞中使用不同的復(fù)制起點(diǎn)(c) 在不同的宿主細(xì)胞中使用不同的復(fù)制酶(d) 在不同的宿主細(xì)胞中具有不同的復(fù)制速率30能夠用來克隆 32kb 以下大小的外源片段的質(zhì)粒載體是 ( )(a)charomid (b)plasmid (C)cosmid (d)phagemid

18、31第一個作為重組 DNA載體的質(zhì)粒是 ( )(a)pBR322 (b)ColEl (c)pSCl01 (d)pUCl832. Ti 質(zhì)粒： ( )(a) 可從農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)到植物細(xì)胞中 (b) 作為雙鏈 DNA被轉(zhuǎn)移(c) 在植物中導(dǎo)致腫瘤 (d) 介導(dǎo)冠癭堿的合成，作為細(xì)菌的營養(yǎng)物和植物的生長激素(e) 需要細(xì)菌的 vir 基因幫助轉(zhuǎn)移 (f) 在植物細(xì)胞中作為染色體外質(zhì)粒33黏粒 (cosmid) 是一種人工建造的載體， ( )(a) 它具有 COS位點(diǎn)，因而可進(jìn)行體外包裝(b) 它具有質(zhì)粒 DNA的復(fù)制特性(c) 進(jìn)入受體細(xì)胞后，可引起裂解反應(yīng) (d) 進(jìn)入受體細(xì)胞后，可引起溶源化反應(yīng)34有

19、兩種確定核酸中核苷酸序列的方法：化學(xué)序列分析法(Maxam-Glbert) 和酶學(xué)序列分析法 (Sanger) 。酶學(xué)測序法的基本原理優(yōu)點(diǎn)是： ( )(a) 堿基與特殊染料間不同的相互作用(b) 一個合成引物的延伸和 DNA修復(fù)合成的可靠終止(c) 限制性位點(diǎn)與 DNA末端標(biāo)記的相關(guān)性(d) 可同時對 DNA雙螺旋的兩條鏈進(jìn)行測序(e) 反應(yīng)是 DNA特異的， RNA不會帶來干擾。這樣既減少純化步驟，也節(jié)約了開支。35關(guān)于 cDNA的最正確的說法是： ( )(a)同 mRNA互補(bǔ)的單鏈 DNA (b) 同 mRNA互補(bǔ)的雙鏈 DNA(c)以 mRNA為模板合成的雙鏈 DNA (d) 以上都正確

20、 36用堿法分離質(zhì)粒 DNA時，染色體 DNA之所以可以被除去，是因?yàn)椋?( )(a) 染色體 DNA斷成了碎片 (b) 染色體 DNA分子量大，而不能釋放(c) 染色體變性后來不及復(fù)性 (d) 染色體未同蛋白質(zhì)分開而沉淀37. 關(guān)于堿解法分離質(zhì)粒 DNA，下面哪一種說法不正確 ( )(a) 溶液 I 的作用是懸浮菌體 (b) 溶液的作用是使 DNA變性(c) 溶液的作用是使 DNA復(fù)性(d) 質(zhì)粒 DNA分子小，所以沒有變性，染色體變性后不能復(fù)性38. Clark 做了一個有趣的實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn) TaqDNA聚合酶可以不需要模板，在雙鏈DNA的末端加一個堿基，主要是加 ( ) (a)dGTP (b

21、)dATP (c)dCTP (d)dTTP 39根據(jù)構(gòu)建方法的不同，基因文庫分為基因組文庫、cDNA文庫等。在下列文庫中，( )屬 cDNA文庫(a) YAC 文庫 (b) MAC 文庫 (c) 扣減文庫 (d) BAC 文庫 40下面關(guān)于多克隆位點(diǎn) (multiple clone site,MCS) 的描述，不正確的句是 ( )(a) 僅位于質(zhì)粒載體中 (b) 具有多種酶的識別序列(c) 不同酶的識別序列可以有重疊 (d) 一般是人工合成后添加到載體中41在 cDNA技術(shù)中，所形成的發(fā)夾環(huán)可用 ( )(a) 限制性內(nèi)切核酸酶切除 (b) 用 31 外切核酸酶切除(c) 用 S1 核酸酶切除

22、(d) 用 51 外切核酸酶切除42在 DNA的酶切反應(yīng)系統(tǒng)中，通常： ( )(a) 用 SSC緩沖液 (b) 加入 Mg2+ 作輔助因子(c) 加入 BSA等保護(hù)劑 (d) 上述說法中，有兩項(xiàng)是正確的43 黏性末端連接法，不僅操作方便，而且 ( )(a) 產(chǎn)生新切點(diǎn) (b) 易于回收外源片段 (c) 載體不易環(huán)化 (d) 影響外源基因的表達(dá) 44在下列表型中， ( ) 是基因工程上理想的受體菌表型(a)r +m+rec * (b)r -m-rec - (C)r -m-rec + (d)r +m+rec -45關(guān)于 DNA接頭在基因工程中的作用，下列說法中哪一項(xiàng)不正確( )(a) 給外源 DN

23、A添加適當(dāng)?shù)那悬c(diǎn)(b) 人工構(gòu)建載體(c) 調(diào)整外源基因的可讀框 (d) 增加調(diào)控元件46 cDNA文庫包括該種生物的 ( )(a) 某些蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因 (b) 所有蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因(c) 所有結(jié)構(gòu)基因 (d) 內(nèi)含子和調(diào)控區(qū)47下列關(guān)于建立 cDNA文庫的敘述中，哪一項(xiàng)是錯誤的 ( )(a) 從特定組織或細(xì)胞中提取 DNA或 RNA(b) 用反轉(zhuǎn)錄酶合成 mRNA的對應(yīng)單鏈 DNA(c) 以新合成的單鏈 DNA為模板合成雙鏈 DNA(d) 新合成的雙鏈 DNA甲基化 48下列對黏性末端連接法的評價中，哪一項(xiàng)是不正確的( )(a) 操作方便 (b) 易于回收片段(c) 易于定向重組 (d)

24、載體易于自身環(huán)化，降低重組率 49關(guān)于感受態(tài)細(xì)胞性質(zhì)的描述，下面哪一種說法不正確( )( 功具有可誘導(dǎo)性 (b) 具有可轉(zhuǎn)移性(c) 細(xì)菌生長的任何時期都可以出現(xiàn) (d) 不同細(xì)菌出現(xiàn)感受態(tài)的比例是不同的50下面關(guān)于用 T4 多核苷酸激酶標(biāo)記 5' 端制備探針的描述中 ( ) 是不正確的。DNA(a) 既能標(biāo)記 DNA，又能標(biāo)記 RNA (b) 既能標(biāo)記雙鏈 DNA又能標(biāo)記單鏈(c) 只能標(biāo)記突出的 5' 端不能標(biāo)記其他類型末端(d) DNA 或 RNA必須有 5'-OH 的存在51 Southem印跡的 DNA探針 ( ) 雜交。(a) 只與完全相同的片段 (b) 可

25、與任何含有相同序列的 DNA片段(c) 可與任何含有互補(bǔ)序列的 DNA片段'(d) 可與用某些限制性內(nèi)切核酸酶切成的 DNA片段 (e) 以上都是 52 用下列方法進(jìn)行重組體的篩選，只有 ( ) 說明外源基因進(jìn)行了表達(dá)。(a)Southem 印跡雜交 (b)Northem 印跡雜交(c)Western 印跡 (d) 原位菌落雜交 53下列哪一個不是 Southern 印跡法的步驟 ( )(a) 用限制酶消化 DNA (a)DNA 與載體的連接(c) 用凝膠電泳分離 DNA片段 (d)DNA 片段轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上(e) 用一個標(biāo)記的探針與膜雜交54 報告基因 ( )(a) 以其易于分

26、析的編碼序列代替感興趣基因的編碼序列(b) 以其易于分析的啟動子區(qū)代替感興趣基因的啟動子區(qū)(c) 能用于檢測啟動子的活性 (d) 能用于確定啟動子何時何處有活性 55 在利用 lacZ 失活的顯色反應(yīng)篩選法中， IPTG 的作用是 ( )(a) 誘導(dǎo)宿主的 肽的合成(b) 誘導(dǎo)宿主的 肽的合成(c) 作為酶的作用底物 (d) 作為顯色反應(yīng)的指示劑56. 切口移位是指在 ( ) 作用下，使 ( ) 帶上放射性標(biāo)記。(a)DNA 聚合酶 I ， RNA (b)DNA 聚合酶 I ， DNA(c)DNA 聚合酶， RNA (d)DNA 聚合酶， DNA 57用于核酸分子雜交的探針可以是放射性標(biāo)記的

27、( )1658 Southern 印跡是用DNA探針檢測 DNA片段，而 Northern印跡則是：(a)用 RNA探針檢測 DNA片段(b)用 RNA探針檢測 RNA片段(c)用 DNA探針檢測 RNA片段(d)用 DNA探針檢測蛋白質(zhì)片段59用免疫化學(xué)法篩選重組體的原理是 ( )(a) 根據(jù)外源基因的表達(dá)(b) 根據(jù)載體基因的表達(dá)(c)根據(jù) mRNA同 DNA的雜交(d) 根據(jù) DNA同 DNA的雜交60 隨機(jī)引物標(biāo)記探針，下列各項(xiàng)中哪一項(xiàng)是不正確的 ( )(b) 不需要用 Dnase I 預(yù)處理(a) 雙鏈 DNA、單鏈 DNA、 RNA都是可以標(biāo)記的(c) 反應(yīng)時可用 Klenow 酶

28、 (d) 反應(yīng)時可用 DNA聚合酶 161 在切口移位標(biāo)記 DNA探針時只能使用 ( )(a)Klenow酶(b)DNA聚合酶 I(c)DNA 聚合酶(d)DNA 聚合酶62 要對一雙鏈的 DNA分子進(jìn)行 31 末端標(biāo)記，可用 ( )(a)Klenow酶(b)DNA聚合酶 I(c)T4DNA 聚合酶(d)T7DNA 聚合酶1、質(zhì)粒的構(gòu)型中，線性 L 型是最簡單的構(gòu)型，因而，電泳時，泳動的速度最快。( × )2、甲基化酶和 DNA連接酶均需要引物。 ( ×)3、轉(zhuǎn)化子就是重組子。 ( × )4、重組 DNA技術(shù)所用的工具酶是限制酶、連接酶和過氧化物酶。( ×

29、; )5、載體自主復(fù)制是基因工程擴(kuò)增基因的依據(jù)。( )6、只要目的基因進(jìn)入了受體細(xì)胞就能成功實(shí)現(xiàn)表達(dá)。(× )7、啟動子與克隆基因間的距離對基因表達(dá)有影響。( ) 1、基因工程所用的工具酶有 核酸酶、聚合酶、連接酶、修飾酶 四大酶類。2、限制性內(nèi)切酶 1U 酶定義為 在建議使用的 Buffer 及溫度下，在 20l (50l )反應(yīng)體系中反應(yīng) 1 小時，使 1g 入 DNA完全消化所需的酶量 ， weiss 和 TNB為 連接酶 酶活性單位。3、在抽提 DNA中，酚的作用是去除蛋白 ，氯仿的作用是 增加比重，有助于分相 。加入異戊醇的作用是 防止起泡把 DNA碰斷，同時有助于離心后界

30、面更清晰。4、限制性內(nèi)切酶識別序列具有旋轉(zhuǎn)對稱，反向重復(fù) 結(jié)構(gòu)特征。5、質(zhì)粒有 嚴(yán)緊型 和 松弛型 兩種類型，在克隆基因中常用的是 松弛 型，在表達(dá)研究中常用的是 嚴(yán)緊 型。6、在沉淀 DNA時，常用 2 倍體積的無水乙醇。若反應(yīng)體系中無單價離子存在，常加入 1/10 體積的 3MNaAc或 KAc, 其 作用是中和 DNA上的負(fù)電荷，減小排斥力，使其易于沉淀。7、為提高重組轉(zhuǎn)化效果，對同一種酶切后載體進(jìn)行脫磷 處理。8、在制備感受態(tài)細(xì)胞時，為了提高轉(zhuǎn)化率，常用冰凍的CaCl 2處理 和短暫的 42 0C 熱擊處理。9、當(dāng)目的片段無限長時，使用識別堿基數(shù)為4 和 6 的限制性內(nèi)切酶進(jìn)行切割時，

31、理論上產(chǎn)生的片段數(shù)之比是1 。10、DNA分子標(biāo)記的方法有缺口平移法、隨機(jī)引物法、末端標(biāo)記法、交換反應(yīng)標(biāo)記法四種。11 DNA帶 負(fù) 電荷，在電場中從 負(fù) 極向 正 極移動。三、判斷題錯）1、雙酶切不需脫磷，單酶切一定要脫磷。 （對）2、在基因工程實(shí)驗(yàn)中，為了保證實(shí)驗(yàn)成功，所有的器具包括槍頭、培養(yǎng)皿和所有試劑都需要高溫高壓滅菌。3、不同構(gòu)型質(zhì)粒電泳的速率判斷。超螺旋線性 開環(huán)4、無水乙醇消毒效果最好，但價格昂貴，因此用70%酒精消毒。（錯）5、酶切后的載體和目的片段（不用脫）都必須脫磷。（錯）6重組子一定是轉(zhuǎn)化子，轉(zhuǎn)化子不一定都是重組子。（對）答案1 702 （1） 分子水平上的操作； （2）

32、 細(xì)胞水平上的表達(dá)3 克隆基因的類型；受體的選擇；載體的選擇4限制性酶切圖譜5屬名的第一個字母；種名的前兩個字母；株名6 （1） 減少酶量； （2） 縮短反應(yīng)時間； （3） 增大反應(yīng)體積7 EcoK； EcoRl8 GGC；C 異源同工酶9 枯草桿菌蛋白酶； (1)5'-3' 合成酶的活性； (2)3'-5' 外切核酸酶10堿性磷酸酶； 5'端的磷酸基團(tuán)11 Ca2+12 5'-3' 合成；3'-5' 外切13 DNA 聚合酶 I ：5' 一 3' 外切核酸酶； 5' 一 3' 合成酶14

33、S1核酸酶切割；DNA聚合酶補(bǔ)平15 核酸水解酶 H； RNA16質(zhì)粒 DNA；病毒DNA；質(zhì)粒和病毒 DNA雜合體17 復(fù)制區(qū)： 含有復(fù)制起點(diǎn)；選擇標(biāo)記： 主要是抗性基因；克隆位點(diǎn)： 便于外源 DNA的插入18 質(zhì)粒消除 (或治愈 )19， pMBl ； pSCl01 ； pSF2124(R質(zhì)粒 )20 1000kb ； 300kb21. 嚴(yán)緊22 pBR322 和 M13； pMBl；轉(zhuǎn)座子23 它在細(xì)菌中能夠大量繁殖，這樣有利于外源DNA的擴(kuò)增；對某些噬菌體 (如 噬菌) 的遺傳結(jié)構(gòu)和功能研究得比較清楚，其大腸桿菌宿主系統(tǒng)的遺傳也研究得比較詳盡24 沒有合適的限制性內(nèi)切核酸酶識別位點(diǎn)；選擇標(biāo)記25質(zhì)粒； 噬菌體； 4526 (1) 分子量大， (2) 酶的多切點(diǎn)， (3) 無選擇標(biāo)記27復(fù)制區(qū)； IG 區(qū)28 75