nm23基因在人肺癌組織中的表達(dá)及其臨床意義

1、nm23基因在人肺癌組織中的表達(dá)及其臨床意義(作者:單位:郵編:)【摘要】目的：觀察nm23基因在人肺癌中的表達(dá)，探討其與肺癌臨床生物學(xué)行為的關(guān)系。方法：采用免疫組織化學(xué)ultrasensitivetms p三步法，檢測(cè)49例肺癌及40例癌旁正常組 織肺切片中nm23蛋白表達(dá)的情況，結(jié)合臨床資料，應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 對(duì)其與肺癌臨床生物學(xué)行為的關(guān)系進(jìn)行分析。結(jié)果：在49例肺癌組織中，nm23蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率為55.1% ,顯著低于正常肺組織的 87.5%(p0.01);在病理分級(jí)高 中分化、低分化和未分化癌組織中 nm23蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率分別為82.6%、41.2%和11.1% ,差異具有 統(tǒng)計(jì)學(xué)意

2、義(p0.01);在不同年齡、性別、吸煙指數(shù)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及tnm 分期中,nm23蛋白表達(dá)情況的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。結(jié)論： nm23蛋白的表達(dá)水平隨肺癌組織分化程度升高而增加，而與肺癌轉(zhuǎn) 移抑制作用可能無(wú)關(guān)【關(guān)鍵詞】免疫組織化學(xué)；肺癌;nm23基因；組織分化程度肺癌已成為人類癌癥死亡的主要原因之一。在我國(guó)，肺癌發(fā)病率及死亡率增長(zhǎng)迅速。癌癥的預(yù)后與診斷時(shí)的臨床分期密切相關(guān)。肺癌的 發(fā)生發(fā)展是一個(gè)多基因參與、多階段發(fā)生、長(zhǎng)時(shí)間形成的極其復(fù)雜的 病變過(guò)程。nm23基因是近年來(lái)研究較多的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因之一， 但是目前，nm23基因的蛋白直接或間接調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)移過(guò)程的機(jī)制仍未明 確，nm23蛋

3、白的表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌轉(zhuǎn)移及預(yù)后關(guān)系的結(jié)論也不明 確。本研究通過(guò)檢測(cè)肺癌患者癌組織中nm23蛋白的表達(dá)與肺癌臨床 生物學(xué)行為間的關(guān)系，為進(jìn)一步探討肺癌的發(fā)病機(jī)制提供理論依據(jù)， 推測(cè)其可能的作用機(jī)制。1材料與方法1.1標(biāo)本來(lái)源選取西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院1998年3月2004年12月經(jīng)手術(shù)切除或氣管鏡活檢的63例肺癌，去除資料不全病例，取術(shù)前未進(jìn)行放療和(或)化療、無(wú)其他疾病或并發(fā)癥及臨床資料齊全的病例49例用于本研究。其中33例，女16例;年齡34-72歲，平均(59.2±11.3)歲。按1981年who肺癌病理類型分類標(biāo)準(zhǔn)：鱗癌19 例，腺癌20例，小細(xì)胞癌10例;分化程度：

4、高 中分化23例，低分 化仃例，未分化9例。按美國(guó)聯(lián)合癌癥分類委員會(huì)(ajcc)和國(guó)際抗 癌聯(lián)盟(uicc)2002年制定的tnm分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分期，其中|期15 例,ii期13例,iii+iv期21例;有區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者28例。對(duì)原h(huán)e切片進(jìn)行復(fù)習(xí)，調(diào)取存檔石蠟包埋組織標(biāo)本，每例標(biāo)本均經(jīng)病理科有經(jīng)驗(yàn)的醫(yī)師選擇1-2塊，制成4 pm厚連續(xù)切片4張，3張切片供 免疫組化染色，1張供he染色復(fù)核診斷。取40例癌旁正常肺組織作為對(duì)照。1.2方法病例標(biāo)本為病灶中央常規(guī)取材，10%福爾馬林定，石蠟包埋，連續(xù)切片厚約4 pm。采用免疫組化ultrasensitivetms p三步法檢 測(cè)nm23蛋白的表達(dá)。

5、1.3質(zhì)量控制每次染色均設(shè)計(jì)對(duì)照，以作為染色質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，陽(yáng)性對(duì)照采 用已知的陽(yáng)性對(duì)照片(購(gòu)于福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司)，空白對(duì) 照采用磷酸鹽緩沖液(pbs)代替一抗，所有對(duì)照均與實(shí)驗(yàn)標(biāo)本在相同 條件下嚴(yán)格按照實(shí)際和推薦方法進(jìn)行染色。1.4判定標(biāo)準(zhǔn)免疫組化陽(yáng)性反應(yīng)為細(xì)胞漿或細(xì)胞核中有黃色顆粒。蛋白累積 的評(píng)分方法：參照f(shuō)romwitz綜合計(jì)分法并略加修改行半定量分析， 在高倍鏡(10x40)下，隨機(jī)選擇5-10個(gè)不同的視野各計(jì)數(shù)10-20 個(gè)癌細(xì)胞，約100個(gè)癌細(xì)胞，記錄陽(yáng)性細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)和染色特征。 陽(yáng)性細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)計(jì)算公式：陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)=(陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)/總癌細(xì) 胞數(shù))x100%。陽(yáng)性百分

6、率5%-25%為1分，26%50%為2分， 51 %-75%為3分，75%為4分。著色強(qiáng)度以多數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞呈現(xiàn)的染 色計(jì)分，淺棕色為1分，棕色為2分，深棕色為3分。行綜合評(píng)分， 0-1分為陰性(-),2-3分為弱陽(yáng)性(+) ,45分為中度陽(yáng)性(+) ,6 7分為強(qiáng)陽(yáng)性(+)。讀片在2位有經(jīng)驗(yàn)的病理科醫(yī)師指導(dǎo)下進(jìn)行， 有爭(zhēng)議的結(jié)果由3位醫(yī)師共同討論決定。1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用spss 11.5 for windows統(tǒng)計(jì)軟件包行卡方檢驗(yàn)和fisher 確切概率法，結(jié)果均以雙側(cè)p0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果2.1 nm23蛋白在正常肺組織及肺癌中的表達(dá)nm23在正常肺組織及肺癌組織中陽(yáng)性率分別為

7、87.5%. 55.1%(p0.01)o nm23蛋白陽(yáng)性表達(dá)為胞漿有棕黃色顆粒，以癌巢邊 緣和散在的癌細(xì)胞表達(dá)較多，染色較深(圖1)o nm23蛋白在鱗癌中 以弱 中度陽(yáng)性為主，在腺癌中以中度陽(yáng)性為主，小細(xì)胞癌則以弱陽(yáng) 性為主(圖2)。結(jié)果顯示在肺癌中nm23蛋白表達(dá)水平明顯降低(表1)o2.2 nm23蛋白表達(dá)與肺癌臨床病理特征的關(guān)系由表2可以看出，在不同的年齡、性別、吸煙指數(shù)、組織學(xué)類 型及tnm分期中，nm23蛋白表達(dá)情況的差別均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (p0.05);在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺癌組與無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺癌組中,nm23 蛋白表達(dá)的差異亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);肺癌中nm23蛋白陽(yáng)性表達(dá)

8、 率隨病理分級(jí)升高而增加，高 中分化與低分化肺癌間以及高 中分 化與未分化肺癌間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。表1 nm23蛋白 在正常肺組織及肺癌中的表達(dá)表2 nm23蛋白表達(dá)與肺癌臨床病理特 征的關(guān)系3討論nm23基因是一個(gè)多功能的基因，與細(xì)胞的生長(zhǎng)、分裂、轉(zhuǎn)錄、 翻譯調(diào)控、分化抑制、信號(hào)傳導(dǎo)、微管組裝，癌的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移 等有關(guān)。而研究最多的是nm23基因的抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的功能口 2。 nm23基因是steeg等3應(yīng)用差別克隆雜交技術(shù)于1998年發(fā)現(xiàn)并克 隆的第1個(gè)腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因。人類的nm23基因主要有nm23 h1和nm23 h2亞型onm23基因的編碼產(chǎn)物為一種二磷酸核昔

9、激酶ndpk ,其功能是將二磷酸核 昔轉(zhuǎn)變成除atp以外的三磷酸核昔。ndpk在細(xì)胞生長(zhǎng)和腫瘤轉(zhuǎn)移 中至少具有3個(gè)主要作用：（1）通過(guò)催化gtp-gdp的轉(zhuǎn)化參與微管 蛋白的解聚與聚合，利用微管系統(tǒng)，包括有絲分裂紡錘體形成和細(xì)胞 移動(dòng)，來(lái)調(diào)節(jié)細(xì)胞功能。（2）通過(guò)調(diào)節(jié)gtp合成，使腫瘤細(xì)胞的多種 生長(zhǎng)因子與細(xì)胞膜結(jié)合后的信號(hào)傳導(dǎo)發(fā)生障礙，從而抑制腫瘤細(xì)胞的 生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移。（3）直接與腫瘤細(xì)胞膜上g蛋白結(jié)合，參與調(diào)控跨膜信 息傳遞，從而對(duì)細(xì)胞分化及癌基因的轉(zhuǎn)化起作用。研究證明4 5,腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的各個(gè)階段，都與腫瘤細(xì)胞的跨膜機(jī)制密切相關(guān)， 特別是通過(guò)影響g蛋白的信號(hào)傳遞發(fā)揮負(fù)性的調(diào)控作用?，F(xiàn)已證

10、實(shí)，nm23基因是一個(gè)腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因，不少動(dòng)物腫瘤模型都顯示nm23基因在轉(zhuǎn)移腫瘤中表達(dá)下降，在多種人類腫瘤如 乳腺癌、腎癌、黑色素瘤、肺癌、結(jié)腸癌等的組織中，nm23 h2表達(dá)與患者預(yù)后或腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)6。國(guó)內(nèi)外對(duì)于 nm23 h1基因及其表達(dá)產(chǎn)物和肺癌的研究報(bào)道很不一致。國(guó)內(nèi)外很多研究顯示，nm23 h1基因表達(dá)水平與肺癌的分化程度密切相關(guān)7 8,說(shuō)明nm23基因在肺癌的演進(jìn)過(guò)程中可能起著重要調(diào)節(jié)作用，這提示nm23 h1基因表達(dá)水平可以作為判斷預(yù)后的指標(biāo)。本研究中nm23蛋白在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的陽(yáng)性表達(dá)率高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，但兩者相比差異并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),因 此尚不

11、能證實(shí)nm23基因具有抑制肺癌轉(zhuǎn)移的轉(zhuǎn)移，相反提示可能為 肺癌的不良預(yù)后指標(biāo)o okada等9研究發(fā)現(xiàn),nm23 h1. nm23 h2 基因與轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)不同，說(shuō)明nm23 h1和nm23 h2是通 過(guò)不同方式被調(diào)節(jié)，具有相互獨(dú)立性，因而可能具有組織差異性。國(guó)內(nèi)外亦有研究發(fā)現(xiàn)，nm23基因特別是nm23 h1基因與肺 癌轉(zhuǎn)移存在相關(guān)趨勢(shì)10o聶強(qiáng)等x研究發(fā)現(xiàn)，nm23 h1基因可 明顯抑制l9981肺癌細(xì)胞株的細(xì)胞增殖力和侵襲力。nm23 h1基 因?qū)θ烁咿D(zhuǎn)移大細(xì)胞肺癌細(xì)胞株l9981的生物學(xué)行為的影響可能與 其抑制蛋白激酶c(pkc)信號(hào)傳導(dǎo)有關(guān)。研究結(jié)果不一致的原因可能在于nm23基

12、因在腫瘤中的表達(dá)受許多因素的影響和作用，如其他腫瘤相關(guān)基因、蛋白分子、激素、受體等，并且這些因子調(diào)節(jié)形式也不同，這些都說(shuō)明nm23基因?qū)δ[瘤 演進(jìn)過(guò)程的調(diào)節(jié)是一個(gè)復(fù)雜的事件。總之，目前對(duì)nm23基因的作用 機(jī)制，特別是發(fā)揮作用的具體生化途徑尚未完全明了，尚需進(jìn)行更深入 的研究。【參考文獻(xiàn)】1jmilin l,rousseau merck m f,munief a,et al.nm23h1 a new member of the family of human nm23/nucleos nediphoshate kinase gene located on chromosome 16pl13j.

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