裂細(xì)胞蛋白步驟_第1頁(yè)
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裂細(xì)胞蛋白步驟_第3頁(yè)
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1、-作者xxxx-日期xxxx裂細(xì)胞蛋白步驟【精品文檔】裂解細(xì)胞蛋白實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程：1待細(xì)胞密度達(dá)到90%以上時(shí)準(zhǔn)備裂解細(xì)胞蛋白。2準(zhǔn)備工作：冰盒，冰的PBS，標(biāo)記好的1.5ml Ep管，冰上配裂解液（1×SDS liysis buffer ：PMSF =100：1），戴口罩。3裂解細(xì)胞：將dish取出（蓋和底都做好標(biāo)記），用冰的PBS洗三遍，最后一遍要把液體吸干凈，把洗好的dish放在冰上，立即向底部均勻加入適量裂解液，封口后置于平整的冰面上晃動(dòng)20min。若冰面不平，可用槍頭盒將冰壓平。期間可將dish拿起晃動(dòng)，使裂解液作用于整個(gè)底部。4收集蛋白：用槍頭帶著粘稠液體在dish底部垂直

2、著轉(zhuǎn)圈，取細(xì)胞刮，用自來(lái)水沖凈之后擦干，將dish立起來(lái)但不能離開(kāi)冰面，然后用干凈的細(xì)胞刮轉(zhuǎn)圈刮將液體集中于一側(cè)，收集dish中和細(xì)胞刮上的液體于標(biāo)記好的Ep管中，冰上靜置2h以上。刮完后立即清洗細(xì)胞刮，擦干置于75%的酒精中。5蛋白變性：將封口的Ep管在沸水中（900）煮10min，之后拆掉封口膜立即在冰上晾涼。6離心：12000rpm離心10min后，避開(kāi)沉淀和局部粘稠液體，將蛋白轉(zhuǎn)入新的標(biāo)記好的Ep管。6保存：不封口，4或20。注意事項(xiàng)：1操作過(guò)程中最好帶上口罩，以免唾液蛋白摻入。3配裂解液事要將1×SDS liysis buffer和 PMSF分別混勻，配好之后要吹勻后使用。4不能用吸水紙來(lái)回擦細(xì)胞刮，以免碎紙屑?xì)埩粼诩?xì)胞刮上，并且細(xì)胞刮用完之后要立即清洗，否則細(xì)胞蛋白會(huì)固定在細(xì)胞刮上。5刮細(xì)胞時(shí)，注意不能將dish離開(kāi)冰面，否則PMSF不能發(fā)揮作用造成蛋白損失。6煮蛋白時(shí)使沸水浸沒(méi)液體即可，不必讓整個(gè)Ep管浸入沸水中，否則Ep管在煮的過(guò)程

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