白血病淋巴瘤免疫分型PPT課件

1、1散射光信號和熒光信號散射光信號和熒光信號=前向角散射光（FSC, Forward Scatter）入射激光的前向散射光信號細胞相對大小及其表面積=側向角散射光（SSC, Side Scatter）入射激光90角的散射光信號細胞粒度及細胞內(nèi)相對復雜性=熒光素與特異抗體結合，熒光抗體與細胞抗原結合越多，產(chǎn)生的熒光信號越強。第1頁/共102頁2CD45/SS示意圖示意圖第2頁/共102頁3實驗對照的設計空白對照：ALL陰性對照：常用同型抗體對照 單色分析：設同型抗體對照 多色分析：同型對照，單陽性對照（用于儀器校正）陽性對照：檢測陰性時第3頁/共102頁4空白對照和陰性對照的比較：空白對照和陰性對

2、照的比較：第4頁/共102頁5CD3CD8 需要用多少的標志來確證感興趣的細胞群? 它們在細胞上的分布是不是很近? 它們是否在不同的細胞上表達不同? 他們表達強還是弱?抗原表達CD3CD4CD3CD8第5頁/共102頁6抗原分布 表面,胞漿,核內(nèi) 是共同檢測還是分別檢測?CD3, CD4, CD8, tetramer cytokinesDNACD3,4,8, tetramer+CytokinesCD3,4,8, tetramer+DNACytokines+DNACD3,4,8, tetramer+Cytokines+DNA第6頁/共102頁7設門08-03307第7頁/共102頁8設門全部 細

3、胞門內(nèi)細胞08-03307第8頁/共102頁9第9頁/共102頁10第10頁/共102頁11血液腫瘤分類進程第11頁/共102頁12目前最完善的血液腫瘤免疫分型文獻第12頁/共102頁13白血病免疫分型的理論基礎白血病免疫分型的理論基礎 白血病/淋巴瘤免疫分型采用的抗原標志是表達于正常造血細胞不同分化發(fā)育階段的分化抗原。雖然是惡性腫瘤細胞，但仍能表達正常血細胞所具有的抗原，因而仍可依據(jù)其抗原的表達譜對白血病/淋巴瘤進行免疫分型。為了正確分析白血病/淋巴瘤細胞，必須對正常造血細胞分化抗原的表達模式有充分的了解。只有熟悉正常細胞的抗原表達模式，才能辨認白血病/淋巴瘤細胞的存在。 第13頁/共102

4、頁14細胞類型鑒定Borowitz et al (1993) AJCP 100:534-40.Steltzer et al (1993) Ann NY Acad Sci 667:265-280第14頁/共102頁15CD45/SS示意圖示意圖正常骨髓細胞正常骨髓細胞 血液腫瘤細胞血液腫瘤細胞老化粒細胞 、噬酸細胞 早幼成熟粒細胞 M3、CML單核細胞 M4、M5 LGL淋巴細胞 CLL、ALL、CLD正常前體細胞 M0、M1、M2、 嗜堿性粒細胞 M4、M5、ALL成熟紅細胞、血小板 M6、M7、MM細胞碎片 Pre-B-ALL 非血液來源細胞第15頁/共102頁16B淋巴細胞分化與抗原表達關

5、系圖Wood and Borowitz (2006) Henrys Laboratory Medicine第16頁/共102頁17T淋巴細胞分化與抗原表達關系圖Wood and Borowitz (2006) Henrys Laboratory Medicine第17頁/共102頁18粒細胞分化與抗原表達關系圖Wood and Borowitz (2006) Henrys Laboratory Medicine第18頁/共102頁19單核細胞分化與抗原表達關系圖Wood and Borowitz (2006) Henrys Laboratory Medicine第19頁/共102頁20非腫瘤T

6、淋巴細胞表型第20頁/共102頁21非腫瘤B淋巴細胞表型第21頁/共102頁22非腫瘤粒細胞、單核細胞表型第22頁/共102頁23非腫瘤粒細胞、單核細胞表型第23頁/共102頁24白血病免疫分型白血病免疫分型 根據(jù)白血病細胞表達的系列相關抗原，確定其系列來源。如：淋系T/B、粒單系、紅系、巨核系等。 根據(jù)白血病細胞表達的系列分化其相關抗原進一步分型。如：早前B，前B，普通B第24頁/共102頁25EGILEGIL，19981998年白血病積分系統(tǒng)年白血病積分系統(tǒng) 分值 B系 T系 髓系 2 CD79a CD3 MPO (cyt)CD22 TCR/ (cyt)IgM TCR/ 1 CD19 CD

7、2 CD117 CD20 CD5 CD13 CD10 CD8 CD33 CD10 CD65 0.5 TdT TdT CD14 CD24 CD7 CD15 CD1a CD64 *當髓系和一個淋系積分均2分時，則診斷為急性混合細胞型白血病。第25頁/共102頁26急性白血病的四大免疫類型急性白血病的四大免疫類型 單表型急性白血病 表達某一個系列抗原為主的急性白血病 雙表型/雙克隆急性白血病 未分化型急性白血病第26頁/共102頁27初治急白分型Acute Leukemia Blasts Present 20%Myeloid LineageCD13+ and/orCD117+ and/orCD33+

8、CD7+ and/orCD2+CD19+T-LineageB-LineageMyeloid, no or minimal maturationCD34+/-CD117+/-HLADR+CD56+CD15-/+CD11b-, CD14-PromyeloidCD15+/-CD117+/-CD34-HLADR-CD11b-, CD14-CD14+CD4+/-HLADR+CD15+CD11b+Myelomonocytic & Monocytic紅系和巨核系的鑒定需要另外增加二線抗體。如:CD71、GPA、CD41、CD61第27頁/共102頁28AML-M1第28頁/共102頁29第29頁/共

9、102頁30第30頁/共102頁31第31頁/共102頁32第32頁/共102頁33AML-M4第33頁/共102頁34第34頁/共102頁35第35頁/共102頁36第36頁/共102頁37初治急淋分型Acute Leukemia Blasts Present 20%CD7+ and/or CD2+CD19+T-LineageB-LineageCommonThymocyteMatureThymocyteCD2+CD5+Dual CD4+/CD8+sCD3-CD2+CD5+CD4+ or CD8+sCD3+CD2-/+CD5-/+sCD3-CD4-CD8-TdT+CD10-clg-sig-Pr

10、e-BCD10+cig+TdT+sig-Bsig+CD10+/-clg+/-TdT-CommonTdT+CD10+clg-sig-EarlyThymocyteEarly B-Precursor第37頁/共102頁38 B細胞系ALL的免疫分型 亞型 CD19 CD20 HLA-DR CD10 CyIg SmIg FAB分型早前B-ALL + + L1,L2 前 B-ALL + /+ + + + L1普通B-ALL + +/ + + L1,L2成熟B-ALL + + + +/ /+ + L3第38頁/共102頁39B-ALL第39頁/共102頁40第40頁/共102頁41第41頁/共102頁42

11、 T細胞系ALL的免疫分型 亞型 CD7 CD1a CD2 TdT FAB分型早前T-ALL + + L1,L2胸腺皮質T-ALL + + + + L1,L2 T-ALL + + + L1,L2第42頁/共102頁43T-ALL第43頁/共102頁44T-ALL第44頁/共102頁45HAL（T/M雙克?。┑?5頁/共102頁46第46頁/共102頁47 白血病免疫分型的價值n確定ALL的細胞類型（B細胞或T細胞）和 ALL的分化階段。n鑒定AML的特征。n對形態(tài)學上未分化的急性白血病有助于鑒定細胞類型。n診斷一些少見類型的白血病。如：M6、M7、M0等。第47頁/共102頁48 n診斷雙表型

12、/混合細胞型急性白血病。n鑒別診斷ALL伴有髓系抗原表達（My+）或AML伴有淋系抗原表達（Ly+）。n鑒別急性白血病與其他造血系統(tǒng)和非造血系統(tǒng)惡性腫瘤。n根據(jù)一些特殊的免疫表型特征診斷與某核型異常相關的亞型。如：M3/t(15;17); M2/t(8;21);M4Eo/inv(16)等。第48頁/共102頁49淋巴瘤免疫分型淋巴瘤免疫分型 非何杰金淋巴瘤(non-Hodgkins lymphoma)是淋巴系統(tǒng)的一類具有組織和生物學異質性的惡性克隆性疾病。世界衛(wèi)生組織（WHO）結合形態(tài)學、免疫表型、基因分型、正常細胞組成及臨床行為，新修訂了歐美淋巴瘤分類系統(tǒng)（REAL分類）對淋巴系統(tǒng)腫瘤的分類

13、。這種分類方法在觀察者的組內(nèi)及組間的重復率為85-95%。WHO淋巴瘤分類是建立在疾病病理形態(tài)、免疫表型、遺傳學特征、臨床特點的綜合資料基礎上：病理形態(tài)是分類的基礎，大多數(shù)淋巴瘤僅靠病理形態(tài)就能做出明確診斷；免疫表型和遺傳學特征是確定每一淋巴瘤的重要指標，是達成共識的客觀依據(jù)，有助于提高診斷的可重復性，具有鑒別診斷和預后判斷的輔助作用，但在淋巴瘤診斷中并非必不可少；臨床特點，特別是腫瘤原發(fā)部位，如節(jié)內(nèi)或節(jié)外（皮膚、中樞神經(jīng)、胃腸、縱膈、鼻腔），是確定某些淋巴瘤的重要指標。雖然定義淋巴瘤是綜合考慮的結果，但在具體確定一種淋巴瘤時其側重點有所不同。第49頁/共102頁50淋巴瘤病理分類的演進形態(tài)學

14、（Kiel分期）形態(tài)學加臨床特點(IWF) 形態(tài)學、免疫表型、遺傳特點和臨床特點(REAL WHO分類）第50頁/共102頁51 WHO認為，淋巴細胞性白血病和淋巴瘤為同一種疾?。簜鹘y(tǒng)上淋巴瘤和白血病是兩種不同的疾病，現(xiàn)在從形態(tài)、免疫和遺傳學來看，淋巴瘤和白血病是同一疾病的不同時相（瘤體期或彌散期/循環(huán)期），將它們分開純粹是人為的。淋巴瘤的臨床行為決定了臨床工作中的治療策略，WHO分類系統(tǒng)更多的采用與生物學特點相關的淋巴瘤診斷和分類方法，基于淋巴瘤的免疫和分子生物學特點的治療方法也不斷涌現(xiàn)，這些在將來會大大提高針對淋巴瘤的不同特點進行的治療。第51頁/共102頁52淋巴瘤免疫分型意義淋巴瘤免疫

15、分型意義 淋巴瘤免疫分型可以區(qū)分反應性與瘤性細胞：活檢、細針穿刺與體液標本均可；確定腫瘤細胞的系列：T、B、組織細胞、髓系、非造血系。分類中根據(jù)免疫表型和DNA含量，可確定低、中、高度惡性程度。區(qū)別不同類型腫瘤細胞：伯基特細胞，淋巴母細胞，濾泡型細胞（小細胞混合和/或大細胞），小淋巴細胞，套細胞，彌散小細胞或大細胞，免疫母細胞。確定淋巴瘤的分期：檢測有否血液、骨髓和體液的累及。疾病監(jiān)測：微小殘留病的監(jiān)測，判斷療效（血液、骨髓、細針穿刺標本），確定瘤細胞表型變化，監(jiān)測Retuximab(抗CD20)治療前后的CD20定量變化，自體干細胞移植中干細胞收獲時的瘤細胞檢測等等.第52頁/共102頁53

16、淋系腫瘤淋系腫瘤WHO分類分類第53頁/共102頁54淋巴瘤診斷的必查項目淋巴瘤診斷的必查項目 根據(jù)淋巴結或骨髓活檢進行診斷,至少需要對一個腫瘤組織的石蠟塊的所有切片進行血液病理學檢查.如果認為樣本組織不能確診,則需要重新活檢。 腫塊細針穿刺（FNA）不宜作為淋巴瘤初始診斷的依據(jù)。但是在某些情況下，F(xiàn)NA結合細胞形態(tài)學和流式細胞學檢查也可以為診斷提供足夠的信息，特別是在診斷CLL時。 某些情況下還需要進行免疫組化、分子/細胞遺傳學檢查。第54頁/共102頁55流式細胞術檢測到的成熟淋巴細胞常見異常表型 淋巴細胞某一亞群的擴增 異?？乖磉_高/低/缺失/異常共表達 細胞形態(tài)增大第55頁/共102

17、頁56淋巴細胞淋巴細胞正常淋巴細胞正常淋巴細胞淋巴細胞增殖性疾?。寺U增）淋巴細胞增殖性疾?。寺U增）第56頁/共102頁57第57頁/共102頁58R6R7R6R7R6R7R6R7R6R7R6R7R6R7R6R7第58頁/共102頁59慢性淋巴細胞增殖性疾病慢性淋巴細胞增殖性疾病 （Chronic Lymphoproliferative Disease） CLL來源于B細胞，具有免疫球蛋白重鏈或輕鏈基因重排，CLL細胞主要為較正常淋巴細胞稍大的小淋巴細胞。免疫分型主要為：SIgM、SIgD弱表達，B系抗原為CD19、CD20、CD23、CD79a與CD5共表達。而CD38,ZAP-70,

18、Ki67等抗原的表達與CLL預后有密切關系。CLL與其它某些淋巴瘤在形態(tài)學上相似，但在免疫表型上卻各有特點。 第59頁/共102頁60慢淋和B淋巴瘤分類CLL and Non-Hodgkins LymphomaNK LGLCD2+CD3+T-Cell LineageCD38+CD2-, CD19-Plasma CellLeukemia/ MyelomaB-Cell LineageCD19+Clonal IgCD16+ and/or CD56+CD2+, CD3-CD5-CD10-CD10+Follicular Cell Or Burkitts LymphomaSLVL or Marginal

19、Zone LymphomaorHairy Cell LeukemiaCD5+B-CLLorMantle Cell LymphomaMCL：t(11;14)；NCCN要求對所有要求對所有CLL患者檢測患者檢測t(11;14)或或CCND1表達表達第60頁/共102頁61ALL/CLL?第61頁/共102頁62評估CLD的抗體 First: CD5,CD19,kappa,lamda CD3,CD20,CD23,CD10,CD45B-cell:CD22,FMC7,CD11c,CD103 CD38,CD25,CD79b,heavychain (約12-15Ab)T-cell:CD4,CD7,CD8,C

20、D2,CD56 CD16, TCR/，TCR/ 特殊用途: CD30,bcl-2,TdT CD1a,CD34,CD71 Total:約12-16個b第62頁/共102頁63B-CLLB-CLL與類似淋巴瘤的免疫表型與類似淋巴瘤的免疫表型Antigen B-CLL HCL Mantle Cell Lymphoma SLVL Follocular LymphomaSIg +/- + + + +CD5 + + CD19 + + + + +CD20 + + + +CD22 +/- + + + +CD23 + CD79b +/- + + + +FMC-7 + + +CD10 +CD103 + CD25

21、+ + _ +/- CD11c +/- + +/- Antigen：抗原；SIg：膜免疫球蛋白；B-CLL：B慢淋；HCL：毛細胞型白血??；Mantle Cell Lymphoma：套狀淋巴瘤：SLVL：絨毛樣脾淋巴瘤：Follocular Lymphoma：濾泡型淋巴瘤第63頁/共102頁64濾泡中心B細胞淋巴瘤增殖第64頁/共102頁65慢性慢性B淋巴細胞白血?。馨图毎籽。˙-CLL）積分）積分系統(tǒng)系統(tǒng)MarkerScore Points10CD5PositiveNegativeCD23PositiveNegativeFMC7NegativePositiveSmIgWeakStron

22、gCD22/CD79b WeakStrongB-CLL：3-5分；非B-CLL：0-2分第65頁/共102頁66ALL/CLL？-MZL第66頁/共102頁67CLL第67頁/共102頁68CLL第68頁/共102頁69MCLMCL第69頁/共102頁70HCL第70頁/共102頁71HCL第71頁/共102頁72FL第72頁/共102頁73FL第73頁/共102頁74DLBCL第74頁/共102頁75DLBCLDLBCL第75頁/共102頁76CLL and Non-Hodgkins LymphomaNK LGLCD2+CD3+T-Cell LineageCD38+CD2-, CD19-Pl

23、asma CellLeukemia/ MyelomaB-Cell LineageCD19+Clonal IgCD16+ and/or CD56+CD2+, CD3-CD4+T-Cell CLLT-Cell LymphomaT-PLLATLL(Adult T-CellLeukemia)T-Cell LGLLCD8+CD7-Sezary Syndrome慢淋和T淋巴瘤分類第76頁/共102頁77T-CLLT-CLL與類似淋巴瘤的免疫表型與類似淋巴瘤的免疫表型Antigen T-CLL ATLL T-PLL T-LGL (CD3+) NK-LGL(CD3-)TdT CD1 CD2 + + + + +

24、C D 3 + + + + + + + C D 5 + + + + + + + CD7 +/- +/- +s + +CD16 +/- +CD56 +/- +CD57 + +CD4+CD8+ +/- +/- CD4-CD8+ +/- + +/-CD4+CD8- + + + CD25 +/- +s +/- +/- NRHLADR +/- +/- + +第77頁/共102頁78第78頁/共102頁79T-PLL第79頁/共102頁80T-PLL第80頁/共102頁81T細胞克隆（細胞克?。═CR V分析）分析）第81頁/共102頁82單克隆單克隆T細胞細胞第82頁/共102頁83第83頁/共102頁

25、84第84頁/共102頁85第85頁/共102頁86NK- NK- 淋巴瘤淋巴瘤第86頁/共102頁87NK-NK-淋巴瘤免疫表型淋巴瘤免疫表型第87頁/共102頁88NK-NK-淋巴瘤淋巴瘤/ /白血病白血病第88頁/共102頁89T-NHLT-NHL第89頁/共102頁90DI=1.7LGLLGL第90頁/共102頁91第91頁/共102頁92BL-DNADLBCL-DNA第92頁/共102頁93多發(fā)性骨髓瘤（多發(fā)性骨髓瘤（MM） 多發(fā)性骨髓瘤是漿細胞異常增生性疾病。正常漿細胞為CD38+/CD45dim/-，使用 CD38/CD45雙標記檢測外周血和骨髓標本，可以準確劃定漿細胞群。通常使

26、用CD38和CD45，結合輕鏈檢查，對多發(fā)性骨髓瘤細胞進行分析 。 另 外 ， 正 常 漿 細 胞 的 表 面 標 記 為CD19+/CD56-，而多發(fā)性骨髓瘤細胞通常為CD19-/CD56+。CD138目前認為是漿細胞最特異的指標。這樣，使用流式細胞儀對外周血或骨髓標本進行多參數(shù)分析，并計算異常漿細胞含量，對于多發(fā)性骨髓瘤的診斷和治療評估具有重要意義。 第93頁/共102頁94MM第94頁/共102頁9500440_02.fcsCD45 PERCP PerCP-ASSC-A1001011021031040256512768102400440_04.fcsHLA DR APC APC-ACD3

27、3 PE PE-A10010110210310410010110210310400440_11.fcsCD34 FITC FITC-ACD117 PE PE-A10010110210310410010110210310400440_04.fcsCD15 FITC FITC-ACD33 PE PE-A10010110210310410010110210310400440_01.fcsCD11B APC APC-ACD13 PE PE-A100101102103104100101102103104第95頁/共102頁9600440_08.fcsCD38 FITC FITC-ACD56 PE PE-A10010110210310410010110210310400440_02.fcsCD45 PERCP PerCP-ASSC-A1001011021031040256512768102400440C