高中生物必修二實驗十一__DNA的粗提取與鑒定

1、實驗十一 dna的粗提取與鑒定教學(xué)目的1 初步掌握dna粗提取和鑒定的方法。2 觀察提取出來的dna物質(zhì)。實驗原理1 dna在nacl溶液中的溶解度是隨nacl的濃度變化而改變的。dna在014mol/l的nacl溶液中的溶解度最低，據(jù)此可使溶解于nacl溶液中的dna析出。2 dna不溶于酒精溶液，但細(xì)胞中某些物質(zhì)可以溶于酒精溶液，據(jù)此可提取雜質(zhì)較少的dna。3 dna二苯胺藍(lán)色（用于dna的鑒定）實驗步驟1材料制備0.1g/ml檸檬酸鈉100ml 500ml燒杯玻璃棒攪拌1000r/min離心2min吸去上清液活雞血180ml 即得雞血細(xì)胞液（也可將上述燒杯置于冰箱中，靜置一天使雞血細(xì)胞自

2、行沉淀）2方法步驟 取血細(xì)胞液5-10ml20ml蒸餾水，玻璃棒沿一個方向快速攪拌（1）提取血細(xì)胞核物質(zhì) 紗布過濾，濾液中含dna和其他核物質(zhì)，如蛋白質(zhì) 原理：血細(xì)胞的細(xì)胞膜、核膜吸水脹破，玻璃棒快速攪拌機(jī)械加速血細(xì)胞破裂（2）溶解核內(nèi)dna：濾液2mol/lnacl溶液40ml，玻璃棒沿一個方向攪拌（3）析出含dna的粘稠物：向上述溶液中緩緩加入蒸餾水，并輕輕地沿一個方向攪拌，出現(xiàn)絲狀物，當(dāng)絲狀物不再增加時，停止加水（此時nacl溶液相當(dāng)于稀釋到014mol/l）（4）濾取含dna的粘稠物：用多層紗布過濾，含dna的粘稠物留在紗布上（5）（紗布上的）dna粘稠物再溶解： 20ml2mol/l

3、nacl溶液 50ml燒杯， 上述粘稠物 緩慢攪拌3 min（6）過濾含dna的2mol/lnacl溶液：用2層紗布過濾，濾液中含dna（7）提取含雜質(zhì)較少的dna：上述溶液95%酒精，緩慢攪拌，出現(xiàn)乳白色絲狀物，用玻璃棒將絲裝物卷起。（8）dna鑒定：實驗關(guān)鍵： 本實驗成功的關(guān)鍵是獲取較純凈的dna，因此應(yīng)注意：1充分?jǐn)嚢桦u血細(xì)胞液。dna存在于雞血細(xì)胞核中。將雞血細(xì)胞與蒸餾水混合以后，應(yīng)用玻璃棒沿一個方向快速攪拌，使血細(xì)胞加速破裂，并釋放出dna2沉淀dna必須用冷酒精。實驗前必須準(zhǔn)備好大量95%的酒精，并在冰箱中（5以下）至少存放24小時。3正確攪拌含有懸浮物的溶液。在第（3）、（5）步

4、驟，玻璃棒不要直插燒杯底部，且攪拌要輕緩，以便獲得較完整的dna分子。在步驟（7），要將玻璃棒插入燒杯溶液中間，用手緩慢轉(zhuǎn)動5-10min。【同類題庫】在“dna的粗提取與鑒定”的實驗中分別使用2moll、014moll、2moll、0015moll的氯化鈉溶液，其作用分別是（a）a溶解、析出、溶解、溶解 c溶解、溶解、析出、溶解b析出、溶解、析出、溶解 d溶解、析出、溶解、析出下列圖示中能反映dna溶解度與naci溶液濃度之間關(guān)系的是（c）dna在下列哪種濃度的nacl溶液中溶解度最低（b）a200mol/l b014 mol/l c0015 mol/l d010 mol/l在dna的粗提取

5、過程中，初步析出dna和提取較純凈的dna所用的藥品的濃度和名稱分別是（b）01 g/ml的檸檬酸鈉溶液 200mol/l的nacl溶液 014 mol/l的nacl溶液 體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精溶液 0015 mol/l的nacl溶液 004 mol/l的nacl溶液a b c d與析出dna粘稠物有關(guān)的敘述，不正確的是（c）a操作時緩緩滴加蒸餾水，降低dna的溶解度b在操作a時，用玻璃棒輕緩攪拌，以保證dna分子完整c加蒸餾水可同時降低dna和蛋白質(zhì)的溶解度，兩者均可析出d當(dāng)絲狀粘稠物不再增加時，此時nacl的濃度約為0.14mol/l.（多選）下列有關(guān)“dna粗提取”的操作中，正確的是（a

6、bcd）a在雞血細(xì)胞液中加入蒸餾水b在“析出dna粘稠物”時，要緩緩加入蒸餾水，直至溶液中粘稠物不再增多c在用酒精凝集dna時，要使用冷酒精d用玻璃棒攪拌時要沿一個方向“dna的粗提取與鑒定實驗”中有三次過濾：（1）過濾用蒸餾水稀釋過的雞血細(xì)胞液。（2）過濾含粘稠物的0.14mol/l nacl .（3）過濾溶解有dna的2mol/l nacl.以上三次過濾分別為了獲得（a）a含核物質(zhì)的濾液、紗布上的粘稠物、含dna的濾液b含核物質(zhì)的濾液、濾液中dna粘稠物、含dna的濾液c含核物質(zhì)的濾液、濾液中dna粘稠物、紗布中dnad含較純的dna濾液、紗布上粘稠物、含dna的濾液為獲取較純凈的dna，

7、采集來的血樣可用蛋白酶處理，然后用有機(jī)溶劑除去蛋白質(zhì)。下列有關(guān)敘述，正確的是（d）a除去血漿中的蛋白質(zhì) b除去染色體上的蛋白質(zhì)c除去血細(xì)胞表面的蛋白質(zhì) d除去血細(xì)胞中所有的蛋白質(zhì)在“dna的粗提取與鑒定實驗”中，和“使用蛋白酶從染色體中提取dna”中的蛋白酶具有相似作用的物質(zhì)是（d）anacl溶液 b蒸餾水 c檸檬酸鈉 d冷卻的酒精dna不溶于下列何種溶液（d）anacl溶液 bkcl溶液 cmgcl溶液 d酒精溶液下列不同濃度的nacl溶液中，使dna析出最徹底和溶解度最高的是（a）0.14mol/l 2mol/l 0.25mol/l 0.015 mol/la和 b和 c和 d和下列操作中，

8、對dna的提取量影響較小的是（b）a使雞血細(xì)胞在蒸餾水中充分破裂，放出dna等核物質(zhì)b攪拌時，要用玻璃棒沿一個方向輕緩攪動c在析出dna粘稠物時，要緩緩加入蒸餾水，直至溶液中粘稠物不再增多d在用酒精沉淀dna時，要使用冷酒精，甚至再將混合液放入冰箱中冷卻e在dna的溶解和再溶解時，要充分?jǐn)嚢柙凇癲na的粗提取與鑒定實驗”中：（1）實驗中兩次使用蒸餾水，第一次目的是 ，第二次目的是 。（2）說明不同濃度的nacl溶液的作用：2mol/l nacl的作用 ；0.14mol/l nacl的作用 ；0.015 mol/l nacl的作用 ；（3）提純dna的原理是 ，所用試劑為 。攪拌要 ，目的 。（

9、4）能否用哺乳動物血液代替？簡述理由。 。 （1）使血細(xì)胞吸水破裂，溶解細(xì)胞核內(nèi)的dna；降低nacl溶液的濃度，降低dna分子在nacl溶液中的溶解度析出dna分子（2）溶解含dna的核物質(zhì)；使含dna的絲狀粘稠物析出dna分子；進(jìn)行dna鑒定（3）dna不溶于酒精溶液，但細(xì)胞中某些鹽類蛋白質(zhì)可溶于酒精溶液；95%的冷卻酒精；輕緩、同方向；保持dna分子的完整性（4）不能，成熟的哺乳動物紅細(xì)胞沒有細(xì)胞核此實驗中有幾次用玻璃棒攪拌，每次攪拌的方向是一致的；但每次攪拌的強(qiáng)度不同，請就此予以說明。（1）提取雞血細(xì)胞核內(nèi)物質(zhì)時，應(yīng) 攪拌，目的是 。（2）向含核物質(zhì)的2mol/l nacl 溶液滴加蒸

10、餾水析出dna粘稠物時，應(yīng) 攪拌，目的是 。（3）dna粘稠物再溶解于2mol/l nacl 溶液時，應(yīng) 攪拌，目的是 。（4）用95%的冷卻酒精提取含雜質(zhì)較少的dna時，應(yīng) 攪拌，目的是 。（1）快速；加速血細(xì)胞破裂（2）輕緩；盡量保持dna分子的完整性（3）輕緩；盡量保持dna分子的完整性（4）輕緩；保持dna分子的完整性以下是有關(guān)dna的粗提取實驗的閱讀材料： a核酸極不穩(wěn)定，在較為劇烈的化學(xué)、物理因素和酶的作用下很容易降解。在制備dna時要加入dna酶（水解dna的酶）的抑制劑檸檬酸鈉，以除去mg，防止dna酶的激活。b核酸中的dna和rna在生物體內(nèi)均以核蛋白（由核酸和蛋白質(zhì)組成）的

11、形式存在，dna核蛋白在1 mol/l nacl 溶液中溶解度很大，但在0.14mol/l nacl 溶液中溶解度很低；而rna核蛋白溶于0.14mol/l nacl 溶液。c用苯酚處理，可使蛋白質(zhì)變性，且留在苯酚層內(nèi)；在dna溶液中加入25倍體積，濃度為95%的酒精，可將dna分離出來。此時dna十分粘稠，可用玻璃棒攪成團(tuán)取出。ddna在強(qiáng)酸性環(huán)境下，水解產(chǎn)生脫氧核糖等小分子物質(zhì)，它與二苯胺酸性溶液反應(yīng)，能生成藍(lán)色化合物。e實驗材料與器械：檸檬酸鈉溶液、石英砂、0.14mol/l nacl 溶液、1 mol/l nacl 溶液、苯酚、95%的酒精、二苯胺試劑、濃硫酸、花椰菜、研缽、燒杯、漏斗

12、、玻璃棒、量筒、石棉網(wǎng)、酒精燈、吸管、試管等。以下是dna粗提取實驗的步驟，請根據(jù)以上閱讀材料回答有關(guān)問題：（1）研磨：取10克花椰菜加適量的 、 和石英砂，研磨成勻漿。（2）過濾。（3）將濾液稀釋6倍，其目的是： 。（4）離心處理，產(chǎn)生沉淀。（5）取沉淀物，置于2毫升1 mol/l nacl 溶液中，使dna核蛋白再次溶解，再加2毫升苯酚充分震蕩后靜止，待其分層后棄其上層苯酚。這一步的目的是除去 。（6）如何將剩余溶液中的dna提取出來？ 。（7）如何證明提取物質(zhì)確實是dna分子？ 。其實驗過程的要點(diǎn)是向放有dna的試管中加入適量該試劑，混合均勻后，將試管置于 中5min，待試管 后，觀察試

13、管中的顏色變化。這個實驗也說明dna耐 溫，前次溫度有利于 ，后次溫度則有利于dna 。（1）檸檬酸鈉溶液、1 mol/l nacl 溶液（3）使dna核蛋白溶解度降低而析出（5）（dna核蛋白中的）蛋白質(zhì)（6）向下層溶液中加25倍體積，濃度為95%的酒精，此時用玻璃棒攪動，玻璃棒上成團(tuán)的物質(zhì)即是dna（7）用適量濃硫酸處理提取物，再滴加二苯胺酸性溶液數(shù)滴，如有藍(lán)色物質(zhì)出現(xiàn)即可證明提取物為dna。沸水??；冷卻；高；加快染色反應(yīng)的速度；析出?！癲na的粗提取與鑒定”實驗中，a、b、c、d、e五個小組除下表中所列處理方法不同外，其他操作步驟均相同，而且正確，但實驗結(jié)果卻不同。組別實驗材料提取核物質(zhì)

14、時加入的溶液去除雜質(zhì)時加入的溶液dna鑒定時加入的試劑a雞血蒸餾水95的酒精(25c)二苯胺b菜花蒸餾水95的酒精(冷卻)雙縮脲 ，c人血漿蒸餾水95的酒精(冷卻)二苯胺d人血細(xì)胞2moll的氯化鈉014moll的氯化鈉雙縮脲e雞血蒸餾水95的酒精(冷卻)二苯胺(1)實驗材料選擇錯誤的組別是 。其原因是 。(2)實驗步驟(不包括實驗材料)均正確，但得不到dna的組別是 。(3)沸水浴中試管顏色變藍(lán)的組別是 ；藍(lán)色較淡的是 ，其原因是 。(4)b組實驗不成功的最主要原因是 。(1)c、d 人的血漿中沒有細(xì)胞結(jié)構(gòu)，成熟的紅細(xì)胞中沒有細(xì)胞核，選用這些材料得不到dna或得到的dna很少 (2)c (3

15、)a、e a 冷卻的酒精對dna的凝集效果較佳，該組使用的是25的酒精 (4)菜花細(xì)胞在蒸餾水中不能被破壞，得不到dna(應(yīng)采用研磨的方法)在“dna的粗提取與鑒定”的實驗中，有同學(xué)按書本知識和自己的思路，試做了如下實驗，請你判斷實驗結(jié)果。(1)他把與檸檬酸鈉混合的新鮮血液放在幾層紗布上過濾，紗布上最主要的結(jié)構(gòu)是 。(2)他在含有dna、rna及蛋白質(zhì)等的混合物中加入大量的物質(zhì)的量濃度為20mol/l的氯化鈉溶液后，通過攪拌后，放在幾層紗布上過濾，他得到的濾液中一定含有實驗?zāi)康闹行枰崛〉某煞质?。(3)他在上述濾液中加入冷酒精(體積分?jǐn)?shù)為95)，并用玻璃棒向個方向攪拌，溶液中的絲狀物的主要成

16、分是 。(4)他把含有dna、rna、蛋白質(zhì)與氯化鈉的混合溶液稀釋成物質(zhì)的量濃度為014mol/l的氯化鈉溶液后，放在幾層紗布上過濾，他得到的濾液中含量最多的成分是 。血細(xì)胞 dna dna 水請利用如下實驗材料做相關(guān)實驗，再選擇其中的一種實驗材料，設(shè)計一個實驗，以展示你的科學(xué)素養(yǎng)和創(chuàng)新才能。(1)如用上述材料做觀察植物細(xì)胞的有絲分裂、葉綠體中色素的提取和分離、觀察植物的向性運(yùn)動等實驗。你選擇的最佳材料依次是(填圖中序號即可) 。(2)如用紫色洋蔥表皮做完細(xì)胞的質(zhì)壁分離及復(fù)原實驗后，又用此裝片觀察細(xì)胞分裂，結(jié)果未觀察到處于分裂期的細(xì)胞。請解釋原因 。(3)創(chuàng)新實驗設(shè)計方案實驗課題：探究鎳為植物生活所必需的礦質(zhì)元素材料用具：完全營養(yǎng)液甲、缺鎳的完全營養(yǎng)液乙、適當(dāng)?shù)娜萜骱凸潭ú牧?、長勢相似的玉米幼苗，含鎳的無機(jī)鹽。