八種氟喹諾酮類藥物人工抗原的合成及鑒定

1、八種氟喹諾酮類藥物人工抗原的合成及鑒定摘 要：建立諾氟沙星（ Eoflo_acin，NOR）、環(huán)丙沙星（Ciproflo_acin，CIF）、恩諾沙星（Eoflo_acin，ENR）、沙拉沙星（Saraflo_acin，SAR）、氧氟沙星（Oflo_acin，OFL）、雙氟沙星（Diflo_acin ，DIF）、培氟沙星（Peflo_acin，pef）和氟羅沙星（Flero_acin，F(xiàn)L_，）8種氟喹諾酮類藥物人工抗原的合成及鑒定方法。采用碳二亞胺（EDC）法將8種氟喹諾酮類藥物與載體蛋白進(jìn)行偶聯(lián)，用于制備免疫抗原與包被抗原，通過紫外掃描和SDS- 對人工抗原進(jìn)行鑒定，免疫原免疫Balb/c

2、 小鼠，獲得抗體。試驗結(jié)果表明，采用間接ELISA方法檢測小鼠血清抗體效價均達(dá)到1：8000以上。為進(jìn)一步制備抗氟喹諾酮類藥物單克隆抗體提供了良好的免疫原。【關(guān)鍵詞】：p ：氟喹諾酮；人工抗原；合成；鑒定中圖分類號：R978.1 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A DOI：10.11974/nyyjs.20_08320_5氟喹諾酮藥物（fluoroquinolones，F(xiàn)Qs），又名6-氟喹諾酮類，是第3代喹諾酮類抗菌藥。相比第1代和第2代喹諾酮類藥物（quinolones，QNs）具有抗菌譜更廣、抗菌作用更強、副作用低和不易產(chǎn)生耐藥性等特點，故在醫(yī)學(xué)和獸醫(yī)學(xué)中很快取得廣泛應(yīng)用。FQs是小分子化合物，屬于半抗原，

3、將其與蛋白質(zhì)載體進(jìn)行偶聯(lián)后，再制備成完全抗原，即指小分子物質(zhì)必須和載體蛋白偶聯(lián)之后方能刺激機體產(chǎn)生特異性的抗體，并包被于固相載體上用于ELISA檢測。1 材料與方法1.1 試驗材料1.1.1 試劑諾氟沙星（99.6%）、環(huán)丙沙星（99.7%）、恩諾沙星（100%）、沙拉沙星（99.6%）、氧氟沙星（99.0%）、雙氟沙星（100%）、培氟沙星（98%）和氟羅沙星（99.1%）購買于中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所；弗氏完全佐劑、弗氏不完全佐劑、碳二亞胺（EDC）、卵清蛋白（OVA）、牛血清白蛋白（BSA）、N-羥基琥珀酰亞胺（NHS）均購買于Sigma-Aldrich公司，其余試劑均為國產(chǎn)分析p 純購于鼎國

4、生物技術(shù)有限公司。1.1.2 主要儀器BECKMAN DU-640核酸蛋白分析p 儀（USA）；自動凝膠成像儀（美國伯騰）； SZ-93自動雙重純水蒸餾器（上海壘固）；超純水儀（ELGA）； CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱（力康HF90型氣套式）； -80冰柜（日本三洋）；TECAN酶聯(lián)免疫檢測儀（AUSTRIA）。1.1.3 試驗動物和細(xì)胞雌性，8周齡，體重1416g BALB/c 小鼠購于長春市生物制品所；SP2/0骨髓瘤細(xì)胞，由本室保存。1.2 方法1.2.1 完全抗原的制備采用碳二亞胺法8種氟喹諾酮藥物完全抗原制備方法步驟基本相同，但秤取的量不盡相同，詳見試劑質(zhì)量配比表。實驗步驟如下：準(zhǔn)確稱取N-羥基琥珀酰亞胺（NHS）A mg，碳二亞胺（EDC）B mg，氟喹諾酮藥物 C mg，加入 D L 的N，N-二甲基甲酰胺（DMF）此溶液命名為，并放置在室溫下遮光攪拌孵育24h；準(zhǔn)確稱取牛血清白蛋白（BSA）E mg，