計數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查驗證方案

1、計數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查驗證方案1. 驗證目的:細菌、孫菌及酵母菌計數(shù)用的培養(yǎng)基應進行培養(yǎng)基的適用性檢杳。本次驗證的目的是確 認營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基和玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基適合細菌、霉菌及酵母菌數(shù)測定。2. 參照標準：2010版中國藥典二部附錄x門微牛物限度檢查法。3. 驗證項營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)皐和玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基的適用性檢查。4. 驗證小組人員及職責：4.1驗證小組人員：小組人員職務姓名所在部門職務組長質量部經理組員質量部組員質量部檢驗員4.2驗證人員職責及要求4.2.1按驗證方案及相關文件實施驗證。4.2.2認真觀察并做好驗證原始記錄。4.2.3對實施驗證的結果負責。5. 合格標準：被檢培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)

2、不小于對照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)的70%,且菌 落形態(tài)大小與対照培養(yǎng)基上的菌落一致。6. 試驗材料：6丄被驗證產品：營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基6.2.儀器設備：6.2.1. *蒸汽滅菌器6.2.2.*凈化工作臺6.23* 爭彳匕扌犁臺6.2.4. *霉菌培養(yǎng)箱（2328°c）6 2.5. *電熱恒溫培養(yǎng)箱（3035°c）6.2.6. *遠紅外烘箱627 *電熱鼓風干燥箱6 ? q*63驗證用培養(yǎng)基名稱生產廠家批號營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基改良馬丁培養(yǎng)基改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基營養(yǎng)瓊脂對照培養(yǎng)基玫瑰紅鈉瓊脂對照培養(yǎng)基酵母浸出粉豚葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基6.4.驗證

3、用菌株:（第代）驗證菌株培養(yǎng)基培養(yǎng)溫度培養(yǎng)時間（小時）人腸埃希菌營養(yǎng)肉湯3035 °c1824金黃色葡萄球菌營養(yǎng)肉湯3035 °c1824枯草芽他桿菌營養(yǎng)肉湯3035 °c1824白色念珠菌改良馬丁培養(yǎng)基2328 °c2448黑曲霉菌改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基2328 °c57 （天）7菌液制備7.1. 接種人腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽抱桿菌的新鮮培養(yǎng)物 至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)慕或 營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基屮，培養(yǎng)1824小時；接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁培養(yǎng)基 或改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基中，培養(yǎng)2448小時。上述培養(yǎng)物川0.9%無菌氯化鈉溶液制成每 lml含菌

4、數(shù)為50loocfu的菌懸液。接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng) 基中，培養(yǎng)57天，加入35ml含0.05% （v/v）聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶 液，將抱子洗脫。然后，用適宜方法吸出抱了懸液至無菌試管內，用含0.05% （v/v）聚 山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液制成每lml含抱了數(shù)50loocfu的也了懸液。菌懸液在室溫卜放置應在2小時內使川，若保存在28°c可在24小時內使用。黑 曲霉砲子懸液可保存在28°c,在驗證過的貯存期內使用。8.菌液計數(shù)：（每種菌液接種2個平皿）人腸埃希菌、金黃色葡萄球菌與枯草芽抱桿菌分別収lml接種至營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，

5、置 3035°c培養(yǎng)48小時；白色念珠菌、黑曲每分別取1ml接種至玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，置23 28°c培養(yǎng)72小時。菌落計數(shù)結果(2個平1111計數(shù)取平均值)見下表菌落計數(shù)結來(cfu / ml)試驗次數(shù)io-'稀釋計稀釋ict?稀釋123123123大腸埃希菌金黃色葡萄球菌枯草芽他桿菌口色念珠菌黑曲霉9.適用性檢杳:取大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽抱桿菌各50loocfu,分別注入無菌平皿屮, 立即傾注營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備2個平皿，混勻，凝固，置3035°c培 養(yǎng)48小時,計數(shù);取白色念珠菌、黑曲霉各50loocfu,分別注入無菌平皿中，立即傾 注玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備2個平皿，混勻，凝固，置232lc培養(yǎng)72 小時，計數(shù)；取白色念珠菌50loocfu,注入無菌平皿中，立即傾注酵母浸出粉j東葡萄糖 瓊脂培養(yǎng)基，平行制備2個平血，混勻，凝固，g 2328°c培養(yǎng)72小時，計數(shù)。同時, 用相應的対照培養(yǎng)基替代被檢培養(yǎng)基進行上述試驗。9.2.結果見附表10.結論計數(shù)培養(yǎng)基適用性檢杳驗證記錄驗證菌株平皿號供試品組cfu / ml對照培養(yǎng)基組cfu / ml回收率應 $70%大腸埃希菌（培養(yǎng)3天計數(shù)）12一平均值金黃色葡萄球