第七章體液蛋白質檢驗

1、1第七章第七章 體液蛋白質檢驗體液蛋白質檢驗人人類白蛋白分子類白蛋白分子 2n本章內(nèi)容概要：本章內(nèi)容概要：第二節(jié)第二節(jié) 體液蛋白質測定體液蛋白質測定第一節(jié)第一節(jié) 概述概述31 1、掌握掌握血漿蛋白質的組成、功能及分類；個別血漿蛋白質血漿蛋白質的組成、功能及分類；個別血漿蛋白質（前白蛋白、白蛋白）的來源和生理功能；血清總蛋白和白（前白蛋白、白蛋白）的來源和生理功能；血清總蛋白和白蛋白的測定方法和原理。蛋白的測定方法和原理。2 2、熟悉熟悉急性時相反應蛋白的概念和種類；血清球蛋白和纖急性時相反應蛋白的概念和種類；血清球蛋白和纖維蛋白原的測定方法。維蛋白原的測定方法。3 3、了解了解其他蛋白質的來源

2、和生理功能；尿液蛋白和腦脊液其他蛋白質的來源和生理功能；尿液蛋白和腦脊液蛋白的檢測蛋白的檢測 。n本章教學要求：本章教學要求：第一節(jié)第一節(jié) 概述概述一、血漿蛋白質的分類和功能二、血清蛋白質電泳組分的臨床分析三、血漿蛋白質及其異常四、其他體液蛋白質4一、血漿蛋白質的分類和功能一、血漿蛋白質的分類和功能n組成：組成：種類：種類：1000種種 500種種 200種種含量：含量：g mg g來源：肝臟是蛋白質主要的加工廠來源：肝臟是蛋白質主要的加工廠（一）血漿蛋白質的組成、功能及分類（一）血漿蛋白質的組成、功能及分類6血漿蛋白質血漿蛋白質的功能的功能血漿蛋白質的分類血漿蛋白質的分類7 7分離方法分離方

3、法鹽析法：白蛋白鹽析法：白蛋白/球蛋白球蛋白（pH7.0半飽和的硫酸銨溶液）半飽和的硫酸銨溶液）電泳法：電泳法：醋酸纖維素薄膜電泳：醋酸纖維素薄膜電泳：6種種瓊脂糖凝膠電泳：瓊脂糖凝膠電泳：13種種聚丙烯酰胺凝膠電泳：聚丙烯酰胺凝膠電泳：30種種SDS聚丙烯酰胺凝膠等電雙向電泳：聚丙烯酰胺凝膠等電雙向電泳：300種種分分辨辨率率增增高高-+纖維蛋白原纖維蛋白原醋酸纖維素薄膜醋酸纖維素薄膜醋纖膜電泳或瓊脂糖電泳：5個成分 清蛋白1球蛋白 2球蛋白 球蛋白 球蛋白分辨率高時：可有7個成分 有1和2 2中也可有兩條聚丙烯酰胺凝膠電泳： 可以分出30多種蛋白質醋纖膜電泳或瓊脂糖電泳：5個成分清蛋白 1

4、球蛋白 2球蛋白 球蛋白 球蛋白2.電泳分類法電泳分類法是臨床實驗室常是臨床實驗室常 用的血漿蛋白質用的血漿蛋白質 電泳方法電泳方法分辨率高時：可有7個成分 有1和2 2中也可有兩條聚丙烯酰胺凝膠電泳： 可以分出30多種蛋白質93.功能分類法功能分類法（1）運輸載體類u血漿脂蛋白：包括血漿脂蛋白：包括CMCM、VLDLVLDL、LDLLDL、HDLHDL等等u前清蛋白與清蛋白前清蛋白與清蛋白u甲狀腺素結合球蛋白甲狀腺素結合球蛋白u皮質素結合球蛋白皮質素結合球蛋白u類固醇激素結合球蛋白類固醇激素結合球蛋白u視黃醛結合蛋白視黃醛結合蛋白u轉鐵蛋白轉鐵蛋白u觸珠蛋白觸珠蛋白u血色素結合蛋白血色素結合

5、蛋白u銅藍蛋白銅藍蛋白（2）蛋白酶抑制物：包括1-抗胰蛋白酶、1-抗糜蛋白酶、2-巨球蛋白等6種以上（3）血清酶類：血漿固有酶如LCAT等組織細胞少量釋放的細胞內(nèi)酶 細胞破裂而進入血循環(huán)的細胞內(nèi)酶（4）蛋白類激素：胰島素、胰高血糖素、生長激素等（5）凝血蛋白類（6）免疫球蛋白類（7）補體蛋白類（2）蛋白酶抑制物：包括1-抗胰蛋白酶、1-抗糜蛋白酶、 2-巨球蛋白等6種以上（3）血清酶類：血漿固有酶如LCAT等組織細胞少量釋放的細胞內(nèi)酶 細胞破裂而進入血循環(huán)的細胞內(nèi)酶（4）蛋白類激素：胰島素、胰高血糖素、生長激素等（5）凝血蛋白類（6）免疫球蛋白類（7）補體蛋白類還有許多種類的蛋白質未被認識還有

6、許多種類的蛋白質未被認識2.功能分類法功能分類法 1 1. . 作為運載蛋白作為運載蛋白 2. 2. 組織蛋白酶抑制物組織蛋白酶抑制物 3. 3. 在血漿中起催化作用的酶在血漿中起催化作用的酶 4. 4. 參與代謝調控作用的蛋白質和肽類激素參與代謝調控作用的蛋白質和肽類激素 5. 5. 參與凝血與纖維蛋白溶解參與凝血與纖維蛋白溶解 6. 6. 組成體液免疫防御系統(tǒng)（組成體液免疫防御系統(tǒng)（IgIg與補體與補體 ） 所有血漿蛋白質能所有血漿蛋白質能 維持血漿膠體滲透壓維持血漿膠體滲透壓 組成血液組成血液pHpH緩沖系統(tǒng)緩沖系統(tǒng)（二）血漿蛋白質的功能（二）血漿蛋白質的功能生物生物化學化學急性時相反應

7、（acute phase reaction，APR）： 血漿蛋白質對急性炎癥和組織損傷的非特異性反應。 此時許多蛋白質：如1-抗胰蛋白酶、1-酸性糖蛋白、結合珠蛋白、銅藍蛋白、 C4、C3、纖維蛋白原和C-反應蛋白等濃度顯著升高或升高， 而少數(shù)蛋白質如前清蛋白、清蛋白、轉鐵蛋白則出現(xiàn)相應下降。急性時相反應蛋白(acute phase reactive protein，APP)：對急性炎癥和組織損傷起非特異反應從而出現(xiàn)濃度變化的血漿蛋白質。增加的蛋白質稱為正向APP下降的蛋白質稱為負向APP121. 急性時相反應（三）影響血漿蛋白質濃度的因素（三）影響血漿蛋白質濃度的因素機體哪些情況會出現(xiàn)急性時

8、相反應？急性細菌性感染如急性肺炎、鏈球菌感染性腎炎急性非特異性炎癥如風濕性關節(jié)炎、類風濕性關節(jié)炎、風濕性心臟病等急性心肌梗死惡性腫瘤手術、創(chuàng)傷13APR的機制的機制v炎癥損傷部位釋放的細胞因子，包括白介素、炎癥損傷部位釋放的細胞因子，包括白介素、腫瘤壞死腫瘤壞死因子因子和和、干擾素以及血小板活化因子等，、干擾素以及血小板活化因子等， 引發(fā)肝細引發(fā)肝細胞中上述蛋白質合成量的改變胞中上述蛋白質合成量的改變。v正向正向APPAPP是機體防御機制的一個部分，如：是機體防御機制的一個部分，如： 增加的蛋白酶抑制劑控制組織中的酶活性增加的蛋白酶抑制劑控制組織中的酶活性 觸珠蛋白保護從破壞紅細胞中釋放的觸珠

9、蛋白保護從破壞紅細胞中釋放的HbHb C C反應蛋白等可活化反應蛋白等可活化補體補體v負向負向APPAPP多作為營養(yǎng)蛋白，此時合成減少，可為多作為營養(yǎng)蛋白，此時合成減少，可為合成正向合成正向APPsAPPs提供更多的氨基酸原料。提供更多的氨基酸原料。14 APR的時相的時相vC-C-反應蛋白：首先升高反應蛋白：首先升高v1-1-酸性糖蛋白：酸性糖蛋白：1212小時內(nèi)也升高小時內(nèi)也升高v1-1-抗胰蛋白酶、觸珠蛋白、抗胰蛋白酶、觸珠蛋白、C4C4和纖維蛋白原然后和纖維蛋白原然后升高升高vC3C3和銅藍蛋白：最后是升高和銅藍蛋白：最后是升高v通常在通常在2 25 5天內(nèi)這些天內(nèi)這些APPsAPPs

10、達到最高值達到最高值15測定測定APP的臨床意義的臨床意義幫助幫助監(jiān)測炎癥的發(fā)生、變化和觀察治療監(jiān)測炎癥的發(fā)生、變化和觀察治療反應，反應，尤其尤其是那些升高最早和最多的蛋白質是那些升高最早和最多的蛋白質1630二、血清蛋白質電泳組分的臨床分析二、血清蛋白質電泳組分的臨床分析血漿蛋白質和血清蛋白質有何不同？ 血漿：為生理狀況血清：為常用檢測標本血漿蛋白質和血清蛋白質有何不同？ 血漿：為生理狀況血清：為常用檢測標本31（一）血清蛋白質電泳的正常組分及其含量（一）血清蛋白質電泳的正常組分及其含量清蛋白：5768 1球蛋白：1.05.7 2球蛋白：4.911.2 球蛋白：713 球蛋白：9.818.2

11、醋纖膜電泳正常百分含量清蛋白：5768 1球蛋白：1.05.7 2球蛋白：4.911.2 球蛋白：713 球蛋白：9.818.2醋纖膜或瓊脂糖電泳正常區(qū)帶區(qū)帶圖譜區(qū)帶圖譜掃描圖譜掃描圖譜kk1.腎病綜合征2. 肝硬化肝硬化正常圖譜典型的典型的-橋橋不典型不典型-橋橋IgG型IgA型3.多發(fā)性骨髓瘤多發(fā)性骨髓瘤2典型的異常電泳圖譜及其掃描曲線典型的異常電泳圖譜及其掃描曲線（四）（四）球蛋白增多與球蛋白增多與M蛋白蛋白Ig多克隆性增多：區(qū)帶呈彌散性升高見于反復或慢性感染、自身免疫性疾病、肝細胞 疾病或寄生蟲感染。Ig單克隆性增多M蛋白：區(qū)帶局部有深染窄帶漿細胞病、尤其惡性漿細胞病時， 異常漿細胞單

12、克隆增殖， 產(chǎn)生大量單克隆Ig或輕鏈或重鏈片段， 病人血清或尿液中可出現(xiàn)結構單一的M蛋白Ig多克隆性增多：區(qū)帶呈彌散性升高見于反復或慢性感染、自身免疫性疾病、肝細胞 疾病或寄生蟲感染。Ig單克隆性增多M蛋白：區(qū)帶局部有深染窄帶漿細胞病、尤其惡性漿細胞病時， 異常漿細胞單克隆增殖， 產(chǎn)生大量單克隆Ig或輕鏈或重鏈片段， 病人血清或尿液中可出現(xiàn)結構單一的M蛋白2223二、血漿蛋白質二、血漿蛋白質（一）前白蛋白（一）前白蛋白（PAPA）（二）白蛋白（二）白蛋白（ALBALB）（三）（三）1-1-酸性糖蛋白（酸性糖蛋白（AAGAAG） （四）甲胎蛋白（四）甲胎蛋白(AFP)(AFP)（五）結合珠蛋白（

13、五）結合珠蛋白( (HpHp) ) （六）（六）2-2-巨球蛋白巨球蛋白(AMG) (AMG) （七）銅藍蛋白（七）銅藍蛋白(CER/CP) (CER/CP) （八）轉鐵蛋白（八）轉鐵蛋白(TRF) (TRF) （九）（九）2 2 微球蛋白微球蛋白(BMG) (BMG) （十）（十）C-C-反應蛋白質反應蛋白質(CRP) (CRP) 24n結構：結構： MW=54000MW=54000，四個相同亞基構成的四聚體。，四個相同亞基構成的四聚體。n理化性質：理化性質：p p4.74.7，肝細胞合成，肝細胞合成，半壽期半壽期12 12 小時小時。n測定方法：測定方法：免疫比濁法免疫比濁法免疫擴散技術免

14、疫擴散技術。25n功能：功能：營養(yǎng)指標，載體功能（甲狀腺素維生素）。營養(yǎng)指標，載體功能（甲狀腺素維生素）。n臨床意義臨床意義：1.1.作為營養(yǎng)不良的早期指標；作為營養(yǎng)不良的早期指標；2.2.作為肝功能不全的指標，比作為肝功能不全的指標，比AlbAlb更靈敏；更靈敏；3.3.負性急性時相反應蛋白，負性急性時相反應蛋白，急性炎癥，惡性腫瘤，急性炎癥，惡性腫瘤， 肝硬化肝硬化及腎炎等情況下，及腎炎等情況下，PAPA迅速降低。迅速降低。n參考值參考值： 0.180.180.45g/L 0.45g/L 。26 急性時相反應蛋白急性時相反應蛋白 272829n結構結構：585585個個aaaa殘基構成的單

15、鏈多肽，殘基構成的單鏈多肽， MW=66458MW=66458，含，含17個個二硫二硫鍵。鍵。n理化性質理化性質：pI=4pI=45.85.8，肝細胞合成但不儲存，半衰期為，肝細胞合成但不儲存，半衰期為15-19 15-19 天，占總蛋白的天，占總蛋白的40%40%60%60%，p p7.47.4時帶負電。時帶負電。n測定方法測定方法：色素結合法：色素結合法: :溴甲酚綠（溴甲酚綠（BCGBCG），溴甲酚紫（），溴甲酚紫（BCPBCP）, ,鹽析等。鹽析等。（二）白蛋白（二）白蛋白（ALBALB）急性時相反應蛋白急性時相反應蛋白 30n功能功能：營養(yǎng)作用，載體功能（高親和力），維持血漿滲透壓：

16、營養(yǎng)作用，載體功能（高親和力），維持血漿滲透壓和正常和正常p p值。值。n臨床意義臨床意義：合成受食物影響，敏感性較低。：合成受食物影響，敏感性較低。降低降低: :在營養(yǎng)不良，肝功不全，急慢性肝疾病時在營養(yǎng)不良，肝功不全，急慢性肝疾病時; ;增高增高: :少見少見, ,假性升高。假性升高。n參考值參考值：35-50 g/35-50 g/31n功能功能：蛋白酶抑制物（具有：蛋白酶抑制物（具有9090的抑制蛋白酶活力）。如的抑制蛋白酶活力）。如糜蛋白酶，彈性蛋白酶，但此抑制作用有明顯的糜蛋白酶，彈性蛋白酶，但此抑制作用有明顯的p p依賴性。依賴性。n臨床意義：臨床意義：降低：血漿降低：血漿AATA

17、AT僅見于胎兒呼吸迫綜合癥。僅見于胎兒呼吸迫綜合癥。升高：炎癥、術后，某些激素治療后。升高：炎癥、術后，某些激素治療后。n參考值：參考值： 0.83 0.831.99g/L 1.99g/L 32n結構：結構：181181個個aaaa殘基構成的單鏈多肽，殘基構成的單鏈多肽， MW=4MW=4萬，萬，含含45%45%的糖，的糖，其中唾液酸占其中唾液酸占11%11%12%12%。n理化性質：理化性質：pIpI值值2.72.73.53.5，肝合成，膿毒癥時粒細胞和單核，肝合成，膿毒癥時粒細胞和單核細胞及某些腫瘤組織也可合成。細胞及某些腫瘤組織也可合成。 位于位于1-1-球蛋白區(qū)帶。球蛋白區(qū)帶。n測定方

18、法：測定方法：免疫化學法（擴散免疫化學法（擴散, ,濁度）濁度）, ,化學法（間接法），化學法（間接法），ELISAELISA法等法等（三）（三）1-1-酸性糖蛋白（酸性糖蛋白（AAGAAG） 急性時相反應蛋白急性時相反應蛋白 33n功能：功能：與免疫防御功能有關，機制不詳；抑制血小板凝集與免疫防御功能有關，機制不詳；抑制血小板凝集影響膠原纖維形成；參與脂類運輸。影響膠原纖維形成；參與脂類運輸。n臨床意義：臨床意義：升高：急性炎癥，組織損傷，風濕，腫瘤，升高：急性炎癥，組織損傷，風濕，腫瘤，AMI AMI ，潰結時；，潰結時；降低：營養(yǎng)不良降低降低：營養(yǎng)不良降低, , 嚴重肝損傷和雌激素作用。

19、嚴重肝損傷和雌激素作用。n參考值：參考值：.25.252.0g/L 2.0g/L 。34n結構：結構：590590個個aaaa殘基構成的單鏈多肽，殘基構成的單鏈多肽， MW=6.5萬萬，含萬萬，含4%4%的糖。的糖。n理化性質理化性質：pIpI值值.7.7- -.8.8，在白蛋白和，在白蛋白和1-1-球蛋白之間。胎球蛋白之間。胎兒肝卵黃囊合成，成人量微，升高由于腫瘤細胞合成。兒肝卵黃囊合成，成人量微，升高由于腫瘤細胞合成。n測定方法：測定方法：免疫化學法（擴散免疫化學法（擴散, ,火箭電泳）火箭電泳）,ELISA,ELISA等等（四）（四）甲胎蛋白甲胎蛋白(AFP)(AFP)35n功能：功能：

20、胎兒血漿主要蛋白質，調節(jié)肝細胞生長和腦細胞發(fā)胎兒血漿主要蛋白質，調節(jié)肝細胞生長和腦細胞發(fā)育；抑制細胞和體液的免疫反應；維持正常妊娠，防止母嬰育；抑制細胞和體液的免疫反應；維持正常妊娠，防止母嬰排斥。排斥。n臨床意義：臨床意義：胎兒產(chǎn)前監(jiān)測（羊水或母血）胎兒產(chǎn)前監(jiān)測（羊水或母血）增高：原發(fā)性肝癌患者診斷和鑒別（增高：原發(fā)性肝癌患者診斷和鑒別（80%80%原發(fā)增高），原發(fā)增高）， 其他其他癌癥也可見增高。癌癥也可見增高。n參考值：參考值：20-100g/L(20-100g/L(成人成人) ) 5g/L( 5g/L(新生兒新生兒) ) 36n結構：結構： 兩對肽鏈形成四聚體，有變異體。兩對肽鏈形成四

21、聚體，有變異體。n理化性質：理化性質：肝合成，肝合成， pIpI 值值為為4.14.1，電泳位，電泳位a2 -a2 -球蛋白區(qū)帶球蛋白區(qū)帶n測定方法：測定方法：電泳法，免疫化學法（擴散電泳法，免疫化學法（擴散, ,濁度）濁度）, ,化學法等化學法等（五）結合珠蛋白（五）結合珠蛋白( (HpHp) ) 急性時相反應蛋白急性時相反應蛋白 37n功能：功能：與紅細胞中釋出自由與紅細胞中釋出自由Hb Hb 結合結合, ,防止防止Hb Hb 從尿中丟失保存從尿中丟失保存鐵鐵, , 急性溶血后一周再生恢復。急性溶血后一周再生恢復。高效的過氧化物酶。高效的過氧化物酶。需鐵細菌的天然抑菌劑。需鐵細菌的天然抑菌

22、劑。n臨床意義：臨床意義：升高：急性時相反應；升高：急性時相反應；降低：血管內(nèi)溶血時；雌激素作用。降低：血管內(nèi)溶血時；雌激素作用。n參考值參考值：0.5-2.2 g/L0.5-2.2 g/L38n結構：結構： MW=62MW=6280 80 萬萬, ,分子量最大，由四個相同的亞基組分子量最大，由四個相同的亞基組成，含糖量約。成，含糖量約。n理化性質：理化性質：肝細胞與單核吞噬細胞系統(tǒng)中合成，半壽期肝細胞與單核吞噬細胞系統(tǒng)中合成，半壽期5 5 天。天。n測定方法：測定方法：免疫化學等免疫化學等（六）（六）2-2-巨球蛋白巨球蛋白(AMG) (AMG) 不屬于急性時相反應蛋白不屬于急性時相反應蛋白

23、 39n功能：功能：與多種分子和離子結合，影響蛋白水解酶活性（主要與多種分子和離子結合，影響蛋白水解酶活性（主要的蛋白酶抑制劑具有選擇性保護某些酶的作用）。的蛋白酶抑制劑具有選擇性保護某些酶的作用）。n臨床意義臨床意義：嬰幼兒及兒童比成人高；：嬰幼兒及兒童比成人高； 升高：雌激素，低蛋白血癥尤其是腎病綜合征時，可顯升高：雌激素，低蛋白血癥尤其是腎病綜合征時，可顯著升高以維持血漿膠體滲透壓；著升高以維持血漿膠體滲透壓； 降低：胰腺炎及前列腺癌時。降低：胰腺炎及前列腺癌時。n參考值：參考值：1.31-2.93g/L1.31-2.93g/L40n結構：結構： MW=12-16 MW=12-16 萬萬

24、, 1046, 1046個個aaaa殘基構成的單鏈多肽，含殘基構成的單鏈多肽，含糖約，每分子銅藍蛋白可結合個銅原子。糖約，每分子銅藍蛋白可結合個銅原子。n理化性質理化性質：肝合成：肝合成, ,巨噬細胞和淋巴細胞合成少量；巨噬細胞和淋巴細胞合成少量；p pI I 值值為為4.44.4， 具遺傳基因多態(tài)性。具遺傳基因多態(tài)性。n測定方法測定方法：免疫化學（擴散或比濁）等：免疫化學（擴散或比濁）等（七）（七）銅藍蛋白銅藍蛋白(CER(CER/CP/CP) ) 急性時相反應蛋白急性時相反應蛋白 41n功能：功能：具氧化酶活性且起抗氧化劑作用，銅的無毒代謝庫具氧化酶活性且起抗氧化劑作用，銅的無毒代謝庫n臨

25、床意義：臨床意義：增加增加感染感染, ,創(chuàng)傷創(chuàng)傷, ,腫瘤腫瘤; ; 降低降低-營養(yǎng)不良，嚴重肝病及腎綜營養(yǎng)不良，嚴重肝病及腎綜; ;協(xié)助診斷協(xié)助診斷WilsonWilson病（肝?。ǜ味範詈俗冃裕┒範詈俗冃裕﹏參考值：參考值：0.21-0.53g/L0.21-0.53g/L42n結構結構： MW=7.7 MW=7.7 萬萬, ,單鏈糖蛋白，含糖約。單鏈糖蛋白，含糖約。n理化性質：理化性質：肝細胞合成，肝細胞合成， pIpI 值值為為5.5-5.9,5.5-5.9,半壽期半壽期7 7 天，可天，可逆結合多價離子如逆結合多價離子如FeFe、CuCu、ZnZn、Co Co 等，一分子等，一分子TR

26、F TRF 可結合兩可結合兩個三價鐵。個三價鐵。n測定方法：測定方法：免疫擴散法，放免法和免疫比濁法等。免疫擴散法，放免法和免疫比濁法等。（八）（八）轉鐵蛋白轉鐵蛋白(TRF(TRF/Tf/Tf) ) 急性時相反應蛋白急性時相反應蛋白 43n功能：功能：運輸鐵。運輸鐵。n臨床意義：臨床意義：血血TRF TRF 濃度受鐵供應調節(jié)，缺鐵濃度受鐵供應調節(jié)，缺鐵TRFTRF升高，鐵治升高，鐵治療后恢復?？捎糜诏熀蠡謴汀？捎糜谪氀脑\斷貧血的診斷（缺鐵性低色素性貧血（缺鐵性低色素性貧血TRFTRF升升高，再障時高，再障時TRFTRF正?；蛘呓档停┱；蛘呓档停┖蛯χ委煹谋O(jiān)測和對治療的監(jiān)測。降低降低: :

27、急性時相反應、慢性肝病、營養(yǎng)不良及蛋白丟失時；急性時相反應、慢性肝病、營養(yǎng)不良及蛋白丟失時；升高：妊娠或雌激素會使其降低升高：妊娠或雌激素會使其降低; ;缺鐵性低色素貧血。缺鐵性低色素貧血。n參考值：參考值： 2.5-4.3 g/L (2.5-4.3 g/L (成人成人) ) 1.30-2.75 g/L (1.30-2.75 g/L (新新生兒生兒) )44n結構：結構： MW=11800MW=11800， 100100個個aaaa殘基構成的單鏈多肽，分子中含殘基構成的單鏈多肽，分子中含一對二硫鍵，不含糖。一對二硫鍵，不含糖。n理化性質：理化性質： pIpI 值值為為5.75.7，淋巴細胞合成

28、，存在細胞表面，特，淋巴細胞合成，存在細胞表面，特別是淋巴和腫瘤細胞。釋放入血循環(huán)。半衰期別是淋巴和腫瘤細胞。釋放入血循環(huán)。半衰期107 107 分鐘，幾乎分鐘，幾乎由腎小管回收。由腎小管回收。n測定方法：測定方法：放射免疫化學等。放射免疫化學等。（九）（九）2 2 微球蛋白微球蛋白(BMG) (BMG) 45n功能：功能：分子量小，可自由通過腎小球濾過膜，在腎小管分子量小，可自由通過腎小球濾過膜，在腎小管幾乎全部重吸收，可監(jiān)測腎小管功能；是幾乎全部重吸收，可監(jiān)測腎小管功能；是HLAHLA（人類白細胞抗原）鏈的輕鏈部分。鏈的輕鏈部分。 n臨床意義：臨床意義：增高：腎功能衰竭，炎癥及腫瘤時。增高

29、：腎功能衰竭，炎癥及腫瘤時。n參考值：參考值：1.0 1.0 2.5 mg/L 2.5 mg/L （血漿）（血漿） n性質：性質：因在急性炎癥病人血清中出現(xiàn)，可結合肺炎球菌細胞因在急性炎癥病人血清中出現(xiàn)，可結合肺炎球菌細胞壁壁C-C-多糖的蛋白質而命名。多糖的蛋白質而命名。n結構：結構： MW11.5-14 MW11.5-14 萬萬，分子含個相同的亞基，亞基間靠，分子含個相同的亞基，亞基間靠非共價鍵連接成圓盤狀多聚體。非共價鍵連接成圓盤狀多聚體。n理化性質：理化性質：肝合成，肝合成， pIpI 值值為為6.26.2，電泳位于，電泳位于 區(qū)帶區(qū)帶。n測定方法：測定方法：半定量沉淀法（早），免疫化

30、學法。半定量沉淀法（早），免疫化學法。（十）（十）C-C-反應蛋白質反應蛋白質(CRP) (CRP) 急性時相反應蛋白急性時相反應蛋白 47n功能：功能：結合多糖，磷脂和核酸；激活補體，抗凝。結合多糖，磷脂和核酸；激活補體，抗凝。n臨床意義：臨床意義：n第一個認定的急性時相反應蛋白第一個認定的急性時相反應蛋白, ,是急性時相反應的一個是急性時相反應的一個敏感指標敏感指標，在、創(chuàng)傷、感染、外科手術、腫瘤浸潤，在、創(chuàng)傷、感染、外科手術、腫瘤浸潤時含量迅速升高，達到正常的時含量迅速升高，達到正常的2000倍。倍。nCRPCRP是非特異性指標是非特異性指標，需結合臨床病史。，需結合臨床病史。n參考值：

31、參考值： 8.0mg/L 8.0mg/L （血漿）（血漿） 48n急性時相反應蛋白分類：急性時相反應蛋白分類：升高：升高：其他種蛋白質。其他種蛋白質。降低：降低：前白蛋白、白蛋白、轉鐵蛋白前白蛋白、白蛋白、轉鐵蛋白49第二節(jié)第二節(jié) 體液蛋白質測定體液蛋白質測定總蛋白測定總蛋白測定個別個別蛋白質的測定蛋白質的測定蛋白分離測定技術蛋白分離測定技術p發(fā)展趨勢發(fā)展趨勢: :p測定體液標本測定體液標本: :血漿血漿：普遍：普遍尿液，腦脊液和胸腹水等尿液，腦脊液和胸腹水等：有選擇性的組織病變檢查：有選擇性的組織病變檢查50免疫化學法特異定量個別蛋白質免疫化學法特異定量個別蛋白質p體液蛋白質的測定方法概括：

32、體液蛋白質的測定方法概括：常規(guī)：免疫濁度法、免疫擴散法，免疫電泳法，常規(guī)：免疫濁度法、免疫擴散法，免疫電泳法，微量：放射免疫測定（微量：放射免疫測定（RIARIA），酶免疫測定法（），酶免疫測定法（ELA/ELISAELA/ELISA）51電泳測定：電泳測定：定量化學測定定量化學測定TPr，Alb電泳電泳 組成圖譜組成圖譜 半定量半定量 定量定量染料結合法，染料結合法，UVUV法，折光法等法，折光法等52一、血清總蛋白測定n假設：假設：、 純多肽鏈，含氮量平均為純多肽鏈，含氮量平均為16 % 16 % 、各種蛋白質與化學試劑反應性一致，僅為相對定量、各種蛋白質與化學試劑反應性一致，僅為相對定量

33、53n測定依據(jù)：蛋白質測定一般利用蛋白質以下的結構或性質測定依據(jù)：蛋白質測定一般利用蛋白質以下的結構或性質1 1、元素組成測定：、元素組成測定：含含N N穩(wěn)定；穩(wěn)定；2 2、重復的肽鏈結構：、重復的肽鏈結構：具有多個肽鍵；具有多個肽鍵；3 3、酪氨酸和色氨酸與、酪氨酸和色氨酸與Folin-Folin-酚試劑反應酚試劑反應顯色顯色或或UV UV 吸收；吸收；4 4、與色素結合的能力：、與色素結合的能力：與染料以離子鍵或共價鍵連接；與染料以離子鍵或共價鍵連接；5 5、沉淀后借濁度測定：、沉淀后借濁度測定：光度計測定；光度計測定；6 6、光折射測定：、光折射測定：折射儀測定。折射儀測定。54n方法方

34、法：1.1.凱氏定氮法參考方法凱氏定氮法參考方法2.2.雙縮脲法雙縮脲法( ( 推薦推薦) ) 3.3.酚試劑法酚試劑法4.4.散射比濁法散射比濁法5.5.染料結合法染料結合法6. UV 6. UV 法法. .折光測定法折光測定法551.凱氏定氮法參考標準方法凱氏定氮法參考標準方法(0.05mg N 0.3g pro)消化消化用濃硫酸將蛋白質消化為硫酸銨；（耗時）用濃硫酸將蛋白質消化為硫酸銨；（耗時） 蒸餾蒸餾用堿性溶液堿化消化液并蒸餾揮發(fā)；用堿性溶液堿化消化液并蒸餾揮發(fā)； 吸收吸收用酸性溶液（硼酸）吸收氣態(tài)氨（使用酸性溶液（硼酸）吸收氣態(tài)氨（使HH+ + ）滴定滴定用已標定的無機酸滴用已標定

35、的無機酸滴（使（使H+ 恢復），恢復），計算總氮量計算總氮量定蛋白定蛋白（總氮量總氮量- -非蛋白氮）非蛋白氮）6.25=6.25=蛋白含量蛋白含量納氏試劑：碘化汞和碘化鉀的堿性溶液與氨反應生成淡黃棕色膠態(tài)化合物，其色度與氨氮含納氏試劑：碘化汞和碘化鉀的堿性溶液與氨反應生成淡黃棕色膠態(tài)化合物，其色度與氨氮含 量成正比。量成正比。 n原理：原理：56n評價：評價：優(yōu)點：準確度高，精密度優(yōu)點：準確度高，精密度高，靈敏度高，是公認的參高，靈敏度高，是公認的參考方法?？挤椒?。缺點：操作復雜，費時，缺點：操作復雜，費時，不適合常規(guī)檢測，血清各蛋不適合常規(guī)檢測，血清各蛋白含氮量會有所變化尤其是白含氮量會有

36、所變化尤其是疾病時。疾病時。 n應用：應用：標準蛋白的標定標準蛋白的標定及校正其它常規(guī)方法及校正其它常規(guī)方法572.雙縮脲法雙縮脲法n原理：原理： 蛋白質中的肽鍵蛋白質中的肽鍵（-CONH-CONH-）在在堿性堿性溶液中能與溶液中能與Cu2+作用而產(chǎn)生作用而產(chǎn)生紫紅色絡合物紫紅色絡合物，其顏色的深淺與蛋白質的濃度成正比，而與蛋白質的分子量及氨基酸成分無關。其顏色的深淺與蛋白質的濃度成正比，而與蛋白質的分子量及氨基酸成分無關。條件：至少含兩個肽鍵（條件：至少含兩個肽鍵（-CONH-CONH-）基團才能和）基團才能和CuCu2+2+形成絡合物形成絡合物, ,氨基酸及二肽無反氨基酸及二肽無反 應應,

37、 ,三肽以上才能反應。三肽以上才能反應。 雙縮脲生成 加熱加熱NH322H180022222N 端端C 端端58n評價：評價：優(yōu)點：簡便，準確，重復性好，優(yōu)點：簡便，準確，重復性好，10g-120g/L10g-120g/L線性好，線性好，特異性與精密度好，批內(nèi)特異性與精密度好，批內(nèi)CV%CV%2%2%，顯色穩(wěn)定。，顯色穩(wěn)定。缺點：靈敏度較差，對蛋白質含量低的體液標本不適缺點：靈敏度較差，對蛋白質含量低的體液標本不適合。合。 n應用：應用：常規(guī)推薦方法。手工或上機使用。常規(guī)推薦方法。手工或上機使用。593.3.酚試劑法酚試劑法n原理：原理： 蛋白質分子中的蛋白質分子中的酪氨酸殘基酪氨酸殘基和和色

38、氨酸殘基色氨酸殘基能夠和能夠和酚試劑酚試劑中的中的磷鎢酸磷鎢酸- -磷鉬酸磷鉬酸反應生成藍色化合物，反應生成藍色化合物， LowryLowry改良法：改良法：在在酚試劑中加入酚試劑中加入CuCu2+2+（75%75%呈色），提高了呈色），提高了呈色的靈敏度，為呈色的靈敏度，為雙縮脲法的雙縮脲法的100100倍左右。倍左右。60n評價及應用：評價及應用：優(yōu)點：操作簡單，改良法靈敏度高（優(yōu)點：操作簡單，改良法靈敏度高（10g-6010g-60g），適合，適合測定蛋白含量少的標本。測定蛋白含量少的標本。缺點：各種蛋白質缺點：各種蛋白質酪氨酸酪氨酸和和色氨酸色氨酸比例不同，只適合測定比例不同，只適合測

39、定單一蛋白質。受一些藥物干擾。單一蛋白質。受一些藥物干擾。 614.4.比濁法比濁法n原理：原理： n評價及應用：評價及應用：優(yōu)點：簡便不需特殊儀器。優(yōu)點：簡便不需特殊儀器。缺點：濁度形成的干擾因素多（加試劑方法，反應溫度，蛋缺點：濁度形成的干擾因素多（加試劑方法，反應溫度，蛋白絮狀沉淀等）白絮狀沉淀等） 某些酸類（磺基水楊酸等）和血清蛋白質結合產(chǎn)生沉淀，某些酸類（磺基水楊酸等）和血清蛋白質結合產(chǎn)生沉淀，測其濁度，與標準對比，可求蛋白含量。測其濁度，與標準對比，可求蛋白含量。625.5.染料結合法染料結合法 在酸性環(huán)境下，帶正電的蛋白質（在酸性環(huán)境下，帶正電的蛋白質（-NH3+)與染料的陰離子

40、與染料的陰離子產(chǎn)生顏色反應，使染料的吸收峰改變，可既而用分光光度法產(chǎn)生顏色反應，使染料的吸收峰改變，可既而用分光光度法比色測定。比色測定。n原理：原理：常用染料：常用染料：氨基黑，考馬斯亮藍等氨基黑，考馬斯亮藍等n評價及應用：評價及應用：優(yōu)點：操作簡便，重復性好，靈敏度高，且干擾因素少。優(yōu)點：操作簡便，重復性好，靈敏度高，且干擾因素少。缺點：特異性不高；不同蛋白質和染料的結合力不一致，標準物不易缺點：特異性不高；不同蛋白質和染料的結合力不一致，標準物不易確定。確定。 636.6.紫外分光光度法紫外分光光度法 蛋白質分子中的蛋白質分子中的酪氨酸酪氨酸和和色氨酸等芳香族氨基酸可使蛋色氨酸等芳香族氨

41、基酸可使蛋白質溶液在白質溶液在280nm280nm處有一吸收峰處有一吸收峰?？捎糜跍y定蛋白質但需避可用于測定蛋白質但需避免核酸干擾。免核酸干擾。 （1 1）Lowry-Kalcker Lowry-Kalcker 公式公式 蛋白質濃度（蛋白質濃度（mg/mlmg/ml）=1.45 A =1.45 A 280280 - 0.74 A - 0.74 A 260260 （2 2）Warburg-Christian Warburg-Christian 公式公式 蛋白質濃度（蛋白質濃度（mg/mlmg/ml）=1.55 A =1.55 A 280280 - 0.76 A - 0.76 A 260260 n

42、原理：原理：64n評價及應用：評價及應用：優(yōu)點：敏感而簡便，可優(yōu)點：敏感而簡便，可保留蛋白生物活性保留蛋白生物活性，常用與較純的酶，常用與較純的酶和免疫球蛋白。需和免疫球蛋白。需紫外分光光度計及石英比色皿。紫外分光光度計及石英比色皿。缺點：各種蛋白質中芳香族氨基酸含量和比例不同；在缺點：各種蛋白質中芳香族氨基酸含量和比例不同；在280nm280nm測定易受游離色測定易受游離色aaaa和酪和酪aaaa以及尿酸和膽紅素的干擾；導以及尿酸和膽紅素的干擾；導致準確性和特異性受影響。致準確性和特異性受影響。措施：在措施：在220-225nm220-225nm波長區(qū)域，用波長區(qū)域，用0.15mol/l0.

43、15mol/l的的NaClNaCl稀釋稀釋1000-20001000-2000倍可消除干擾。倍可消除干擾。657.7.折光測定法折光測定法 溶解在溶液中的固體可增加溶液的光折射率，在固定溶解在溶液中的固體可增加溶液的光折射率，在固定波長和溫度下，光折射率和血清中蛋白質含量成正比。波長和溫度下，光折射率和血清中蛋白質含量成正比。n原理：原理：n評價及應用：評價及應用：優(yōu)點：簡便、快速，易掌握，重復性較好，適合臨床急診，體檢篩查優(yōu)點：簡便、快速，易掌握，重復性較好，適合臨床急診，體檢篩查和胸腹水蛋白質測定。和胸腹水蛋白質測定。缺點：準確性較差，易受高血脂癥，高膽紅素血癥以及溶血等因素影缺點：準確性

44、較差，易受高血脂癥，高膽紅素血癥以及溶血等因素影響，會由于響，會由于A/GA/G比值變化而產(chǎn)生誤差。比值變化而產(chǎn)生誤差。 66p參考范圍：成人參考范圍：成人606080g/L80g/Lp臨床意義：臨床意義：總蛋白升高：總蛋白升高：總蛋白降低總蛋白降低：丟失過多丟失過多 消耗增加消耗增加 白蛋白合成減少白蛋白合成減少 水腫水腫真性升高：真性升高：MMMM、巨球蛋白血癥、自身免疫性疾病等、巨球蛋白血癥、自身免疫性疾病等假性升高：機體明顯失水，總蛋白含量相對升高，假性升高：機體明顯失水，總蛋白含量相對升高，A/GA/G幾乎不變幾乎不變67二、血清白蛋白測定p方法方法：1.1.染料結合法染料結合法(

45、( 推薦推薦) ) 2.2.鹽析法鹽析法3.3.電泳法電泳法4.4.免疫化學法免疫化學法681.1.染料結合法染料結合法( ( 推薦推薦) )n原理原理: : 血清血清ALBALB可通過可通過離子鍵或疏水鍵離子鍵或疏水鍵與包括與包括染料染料在內(nèi)的各種在內(nèi)的各種有機離子結合有機離子結合, ,而而GLBGLB很少結合外源性染料很少結合外源性染料, ,可在可在不分離不分離ALBALB與與GLBGLB的情況下直接測定的情況下直接測定ALBALB。染料染料BCGBCGBCPBCP優(yōu)點優(yōu)點 缺點缺點 易于和非人源性白蛋白結合易于和非人源性白蛋白結合 與白蛋白結合特異性較差與白蛋白結合特異性較差 與與非人源

46、性白蛋白結合力弱非人源性白蛋白結合力弱 與白蛋白結合特異性好與白蛋白結合特異性好 在在3030秒內(nèi)測可提高特異性秒內(nèi)測可提高特異性69n應用及評價應用及評價: : 嚴格控制反應時間的嚴格控制反應時間的BCGBCG法法既適合既適合手工手工也適合也適合自動自動化分析?；治觥ＥR床上推薦使用臨床上推薦使用。70n原理原理: : 鹽析是由于加入大量的中性鹽破壞了蛋白質的鹽析是由于加入大量的中性鹽破壞了蛋白質的水化膜、水化膜、中和其所帶的中和其所帶的電電荷荷從而使蛋白質分子聚集而從而使蛋白質分子聚集而沉淀沉淀析出。析出。 各種蛋白質的各種蛋白質的親水性親水性和和帶電荷不同帶電荷不同，故鹽析時所需，故鹽析

47、時所需鹽濃度與鹽濃度與pHpH不同。不同。GLBGLB在生理在生理pHpH下帶電荷及水化膜比下帶電荷及水化膜比ALBALB少少，可被較低濃度中性鹽沉淀。，可被較低濃度中性鹽沉淀。2.2.鹽析法鹽析法中性鹽：中性鹽：硫酸銨、硫酸鈉等硫酸銨、硫酸鈉等71n應用及評價應用及評價: :操作繁瑣，操作繁瑣，不宜自動化，基本不用不宜自動化，基本不用723.3.電泳法電泳法n操作：操作：醋纖膜電泳醋纖膜電泳染色染色晾干晾干透明透明光密度儀掃描光密度儀掃描洗脫洗脫比色比色染色染色分離分離測得蛋白組分百分比測得蛋白組分百分比計算得出各種蛋白質含量計算得出各種蛋白質含量半定量半定量定量定量73n評價及應用：評價及

48、應用：優(yōu)點優(yōu)點：電泳特異性好，可了解血清蛋白質全貌：電泳特異性好，可了解血清蛋白質全貌缺點缺點：電泳技術繁瑣，不易自動化；白蛋白與染料：電泳技術繁瑣，不易自動化；白蛋白與染料親和力高會導致結果偏高親和力高會導致結果偏高744.4.免疫化學法免疫化學法n原理及特點原理及特點:n應用：應用：特異性高特異性高,但成本較高但成本較高,費時費時,生化檢驗用的不多生化檢驗用的不多.75p參考范圍參考范圍: :成人成人353555g/L.55g/L.p臨床意義：臨床意義：白蛋白升高：白蛋白升高：白蛋白降低：白蛋白降低：丟失過多丟失過多 消耗增加消耗增加 白蛋白合成減少白蛋白合成減少 水腫水腫 先天性先天性A

49、LBALB缺乏病缺乏病真性升高：未見真性升高：未見假性升高：機體明顯失水，或治療輸入過多白蛋白假性升高：機體明顯失水，或治療輸入過多白蛋白76三、血清球蛋白測定三、血清球蛋白測定p方法方法：間接法間接法: :TP-ALB=GLBTP-ALB=GLB直接法直接法: :乙醛酸比色法乙醛酸比色法(GLB(GLB中的色氨酸遠大于中的色氨酸遠大于ALBALB中的色氨酸含量中的色氨酸含量) )色氨酸色氨酸+ +乙醛酸乙醛酸 紫色化合物紫色化合物H H+ +Hopkins-ColeHopkins-Cole反應反應: :p參考范圍參考范圍: : 成人成人202030g/L.30g/L. A/G A/G：1.5

50、1.52.52.5A/G1,A/G1,比例倒置，清蛋白降低亦可因球蛋白增高引起，見比例倒置，清蛋白降低亦可因球蛋白增高引起，見于嚴重肝功能損傷及于嚴重肝功能損傷及M M蛋白血癥，如慢性重度以上持續(xù)性肝蛋白血癥，如慢性重度以上持續(xù)性肝炎、肝硬化、原發(fā)性肝癌、多發(fā)性骨髓瘤、原發(fā)性巨球蛋炎、肝硬化、原發(fā)性肝癌、多發(fā)性骨髓瘤、原發(fā)性巨球蛋白血癥等。白血癥等。 77p臨床意義：臨床意義：球蛋白升高球蛋白升高：球蛋白降低球蛋白降低：合成減少、低或無合成減少、低或無-球蛋白血癥球蛋白血癥 真性升高（常見）：自身免疫性疾病、感染反真性升高（常見）：自身免疫性疾病、感染反應、應、MMMM、巨球蛋白血癥。、巨球蛋白血癥。假性升高（少見）：機體明顯失水。假性升高（少見）：機體明顯失水。78四、血漿纖維蛋白原測定p血漿纖維蛋白原：血漿纖維蛋白原：結構特點：凝血因子結構特點：凝血因子，肝合成，肝合成，MW=3.4萬，大分子糖蛋白，萬，大分子糖蛋白，pI5.3，222功能特點：參與凝血功能特點：參與凝血血凝過程中的作用血凝過程中的作用：纖維蛋白原纖維蛋白原纖維蛋白網(wǎng)纖