羊水細(xì)胞染色體分析在產(chǎn)前的應(yīng)用

1、羊水細(xì)胞染色體分析在產(chǎn)前的應(yīng)用王亞群童克婷（安徽省婦幼保健院遺傳室230001）【摘要】目的研究羊水細(xì)胞染色體檢查在臨床產(chǎn)前診斷中的實(shí)用性和在染色體 疾病診斷中的意義。方法 對(duì)孕中期有穿刺指征的孕婦羊水細(xì)胞培養(yǎng)并進(jìn)行染色 體分析，檢出異常核型及類型并統(tǒng)計(jì)。結(jié)果在成功培養(yǎng)的474例羊水中，檢出 異常核型22例，其中常染色體數(shù)目異常15例，性染色體數(shù)目異常1例，染色體 結(jié)構(gòu)異常6例，異常檢出率為4.64%,染色體多態(tài)性核型22例。結(jié)論孕中期對(duì) 染色體高危孕婦進(jìn)行羊水染色體檢查是產(chǎn)前診斷的重要手段?！娟P(guān)鍵詞】產(chǎn)前診斷羊水細(xì)胞染色體唐氏綜合征【中圖分類號(hào)】r394【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】a【文章編號(hào)】2095-

2、1752（2013） 04-0017-02據(jù)報(bào)道，我國(guó)每年染色體異常的新牛兒約10萬(wàn)，活產(chǎn)嬰兒中染色體異常 約0.5%,唐氏綜合征在新牛兒中發(fā)病率最高，其次是性染色體異常，因此，對(duì)孕婦 進(jìn)行常規(guī)產(chǎn)前診斷,對(duì)優(yōu)牛優(yōu)育具有重要意義。通過(guò)羊水細(xì)胞培養(yǎng)進(jìn)行胎兒染色 體核型分析，可對(duì)一系列的胎兒染色體異常疾病進(jìn)行診斷。木次試驗(yàn)研究從2010 年8月到2012年12月羊水細(xì)胞染色體檢查的478例樣木，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。資料與方法一、對(duì)象2010年8月至2012年12月在我院產(chǎn)前診斷門診就診，符合產(chǎn)前診斷 羊水穿刺指征且無(wú)禁忌癥的孕婦，簽署知情同意書后進(jìn)行產(chǎn)前羊水染色體診斷。 孕婦平均年齡34歲（1942歲

3、），平均孕周20周（1824周）行羊膜腔穿刺術(shù)，進(jìn) 行羊水細(xì)胞培養(yǎng)。二、方法1. 取樣:無(wú)菌條件下羊膜腔穿刺，b超引導(dǎo)，最初抽取的12ml羊水 保留制成干濾紙片長(zhǎng)期保存，隨后抽取羊水20ml左右置兩只15ml無(wú)菌離心管中。2. 接種:羊水標(biāo)本以1800r/min離心lomin后棄上清液，留0.5ml將沉 淀制成一定濁度的細(xì)胞懸液，接種于3-4mlamnio max-c100完全羊水培養(yǎng)基中， 避免岀現(xiàn)大量氣泡，混勻后置于5% co2, 37°c培養(yǎng)。3收獲：細(xì)胞培養(yǎng)6天換液后觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，當(dāng)培養(yǎng)瓶中有610 個(gè)大的細(xì)胞克隆貼壁生長(zhǎng)，且細(xì)胞克隆中有較多圓、折光性強(qiáng)的分裂細(xì)胞吋，加

4、秋水仙素后繼續(xù)培養(yǎng)lh后進(jìn)行收獲。4.制片：經(jīng)過(guò)低滲、預(yù)固定、刮細(xì)胞(從培養(yǎng)瓶中轉(zhuǎn)移到玻璃離心管中)、 固定等步驟，將獲得的沉淀制成胞懸液，冰片滴片，每瓶培養(yǎng)物分開制片編號(hào)， 80°c烤片2h后g顯帶。5分析：每例標(biāo)本選擇形態(tài)適中、顯帶清楚、帶數(shù)320條以上的核型分 析至少5個(gè)，計(jì)數(shù)至少30個(gè)分裂組，遇異?；蛴幸蓡?wèn)的標(biāo)本則增加分析和計(jì)數(shù) 的分裂相數(shù)。本實(shí)驗(yàn)室從實(shí)驗(yàn)到核型分析均分兩組，由兩人進(jìn)行，兩組分析478 例羊水染色體結(jié)果均一致。結(jié)果一、羊水異常染色體核型檢出結(jié)果研究期間共采集478例羊水標(biāo)本，成功培養(yǎng)474例,培養(yǎng)成功率為99.2%。 在成功培養(yǎng)的474例羊水中,檢出異常核型2

5、2例,其中常染色體數(shù)目異常15例， 性染色體數(shù)目異常1例，染色體結(jié)構(gòu)異常6例，異常檢出率為4.64%。474例羊 水細(xì)胞染色體核型中多態(tài)性變異22例，其中孕婦與男方做外周血染色體核型對(duì) 照共21例，系女方遺傳6例，男方遺傳14例，其中一例inv (y)其父檢測(cè)y正 常來(lái)源不清。二、羊水異常染色體核型分布在22例異常染色體核型分析中，數(shù)目異常16例，包括21三體10例；18三體1例；47, xy, +marl例；69, xxxi例(圖1, 2)；性染色體單體1例， 核型為45, xo/46,xy；其他嵌合體1例。結(jié)構(gòu)異常6例，包括易位、插入(見(jiàn)表 1);染色體多態(tài)性變異22例，包括d組和g組短臂

6、隨體增加(ps+/s+),異染色質(zhì) 區(qū)增加(qh+),倒位(inv)。圖1三倍體染色體(69, xxx)圖圖2三倍體染色體(69, xxx)核型表1不同產(chǎn)前診斷指征中羊水染色體異常情況討論結(jié)果顯示,染色體病高危胎兒檢出異常的比率為4.64%,與文獻(xiàn)報(bào)道的相 近。在本次實(shí)驗(yàn)中，孕婦血清篩查高風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行羊水染色體檢查共檢出異常染色 體10例，占總異常數(shù)的45.5% (10/22),其中21三體僅占5例8三體1例,孕 母血清篩查還發(fā)現(xiàn)其他染色體數(shù)目異常及結(jié)構(gòu)異常(包括69, xxx；易位和性染 色體異常，見(jiàn)表1),與已有報(bào)道符合3。對(duì)35歲以上高齡孕婦是先進(jìn)行孕母血清篩查，還是直接進(jìn)行羊水穿刺檢 查一

7、直存有爭(zhēng)議。在本實(shí)驗(yàn)中，單純以高齡因素進(jìn)行檢查的有165例，共發(fā)現(xiàn) 異常染色體核型7例，數(shù)s異常6例；高齡因素與血清篩查在染色體病檢出率上 無(wú)顯著差別，與有關(guān)報(bào)道吻合2。三倍體多為葡萄胎，但在本次實(shí)驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)一例69, xxx的病例，目前 國(guó)內(nèi)外均有報(bào)道5。為此加大計(jì)數(shù)并行羊水傳代培養(yǎng)核型仍為69, xxx；另取胎 兒父母雙方血液標(biāo)本和胎兒的羊水細(xì)胞-起送檢行microdna分析，經(jīng)過(guò)15個(gè) 標(biāo)志物分析，證實(shí)胎兒多余的單倍體來(lái)源于母親卵細(xì)胞在減數(shù)分裂是發(fā)生錯(cuò)誤, 不分離。在超生異常的病例中有三例是胎兒頸部淋巴水囊瘤。淋巴水囊瘤是常見(jiàn) 的胎兒淋巴系統(tǒng)異常，多見(jiàn)于頸部，在胎兒發(fā)育異常中較為常見(jiàn)，此

8、類病例中約 有60%-80%染色體核型異常，20%-40%染色體核型正常7,染色體核型異常者中 turner綜合征最為多見(jiàn)，其次為21三體、18三體等染色體三體綜合征，還有 lq+, 7q+的報(bào)道。本次試驗(yàn)三例胎兒頸部淋巴水囊瘤中2例羊水培養(yǎng)失敗，原因均為細(xì)胞過(guò)少；一 例結(jié)果為46, xn?10q+o本次實(shí)驗(yàn)中易位攜帶父母胎兒的染色體異常率最高，達(dá)50%,除卻自然 選擇，對(duì)染色體平衡易位的夫婦及時(shí)進(jìn)行羊水染色體檢查是防止染色體病患兒出 生的重要手段。2010年8月至2012年12月在我院產(chǎn)前診斷門診就診進(jìn)行產(chǎn)前羊水染 色體診斷的孕婦中不良產(chǎn)史的有30例，其中29例曾育有21三體患兒，1例曾 育

9、有18三體患兒，這是一個(gè)驚人的數(shù)字，如此多的缺陷兒給社會(huì)和家庭帶來(lái)了 巨大的經(jīng)濟(jì)和精神負(fù)擔(dān)，所以普及產(chǎn)前診斷(產(chǎn)前篩查、超聲診斷和羊水穿刺三 者有效地結(jié)合)會(huì)有效地預(yù)防出生缺陷、降低出生缺陷率、提高出生人口素質(zhì)和 生命質(zhì)量。由于羊水細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程較長(zhǎng)，收獲中期細(xì)胞的方法較為繁瑣，需要 2-4w的吋間才能出診斷報(bào)告，所以它仍然需要我們細(xì)胞遺傳工作者在這一方面 去努力改進(jìn)。參考文獻(xiàn)1陸國(guó)輝產(chǎn)前遺傳病診斷m廣東：科技出版社,1989:181.周玉春，王華，黃定梅，等1034例羊水細(xì)胞染色體核型分析j.中華圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)雜 志，2006,9:421-423.3 shafferlg, buith. molecu

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