藥品潔凈實(shí)驗(yàn)室微生物控制和監(jiān)測

1、 藥品潔凈實(shí)驗(yàn)室微生物控制和監(jiān)測藥品潔凈實(shí)驗(yàn)室微生物控制和監(jiān)測 概 述2015版藥典參考國家及國外標(biāo)準(zhǔn)制定了統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)參考標(biāo)準(zhǔn) USP(35)1116藥品無菌操作環(huán)境的微生物控制和監(jiān)測指導(dǎo)原則 ISO 14644 潔凈室及相關(guān)受控環(huán)境附錄無菌藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范 GB/T16292-2010 醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游和沉降菌的測試方法 概 述懸浮粒子數(shù)和微生物數(shù)控制適用潔凈級別控制的實(shí)驗(yàn)室。浮游菌和沉降菌、工作臺(tái)面和墻壁、表面微生物檢測，控制和監(jiān)測潔凈室微生物污染狀況確保藥品質(zhì)量安全及檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。單向流空氣區(qū)域、工作臺(tái)面及環(huán)境應(yīng)定期按醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌

2、的測試方法的現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行監(jiān)測。GB/T16292-2010 醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法 - 2010版中國藥典 檢驗(yàn)環(huán)境國際要求:制藥潔凈環(huán)境分級為A級、B級、C級、D級。A（百級）、B（千級）、C（萬級）、D（十萬級）2015版藥典對藥品檢驗(yàn)環(huán)境的要求無菌檢查 在無菌的環(huán)境單向流空氣區(qū)域內(nèi)或隔離系統(tǒng)中進(jìn)行，符合無菌檢查的環(huán)境要求。微生物限度檢查 在無菌的環(huán)境單向流空氣區(qū)域內(nèi)進(jìn)行，符合微生物檢查的環(huán)境要求。 。空氣懸浮粒子標(biāo)準(zhǔn) 潔凈度級別潔凈度級別懸浮粒子最大允許數(shù)懸浮粒子最大允許數(shù)/立方米立方米靜態(tài)靜態(tài)動(dòng)態(tài)動(dòng)態(tài)(3)0.5m5.0m(2)0.5m5.0m A級

3、級(1)352020352020 B級級3520293520002900C級級3520002900352000029000D級級352000029000不作規(guī)定不作規(guī)定不作規(guī)定不作規(guī)定ISO14644-1:2010 潔凈度等級及懸浮粒子要求 環(huán)境的要求ISOISO等級序數(shù)等級序數(shù)（N N）0.1m0.1m0.2m0.2m0.3m0.3m0.5m0.5m1m1m5m5m 1 110102 24 42 2100100242410103 31000100023723710210235358 84 41000010000237023701020102035235283835 5100000100000

4、237002370010200102003520352083283229296 6100000010000002370002370001020001020003520035200832083202932937 73520003520008320083200293029308 83520000352000083200083200029300293009 9352000003520000083200008320000293000293000中國（2010）、歐盟、WHO GMP對潔凈環(huán)境微生物監(jiān)測動(dòng)態(tài)標(biāo)準(zhǔn)潔凈度級別 浮游菌cfu/m3 沉降菌（90mm）cfu /4小時(shí)表面微生物 接觸碟（55mm

5、）cfu /碟 5指手套cfu /手套 A級1111B級10555C級1005025D級20010050注： 表中各數(shù)值均為平均值。 單個(gè) 沉降碟的暴露時(shí)間可以少于4小時(shí)，同一位置可使用多 個(gè)沉降碟連續(xù)進(jìn)行監(jiān)測并累積計(jì)數(shù)。ISO14644-1:2010 潔凈度等級及懸浮粒子要求 環(huán)境的要求潔凈度級別 物理參數(shù)過濾完整性氣流組織空氣流速換氣次數(shù)壓差溫度相對濕度5檢漏試驗(yàn)、監(jiān)測周期24個(gè)月單向流監(jiān)測周期12個(gè)月.2m/s0.2-0.5監(jiān)測周期12個(gè)月潔凈區(qū)與非潔凈區(qū)之間壓差不小于10Pa;不同級別潔凈區(qū)之間的壓差不小于5Pa監(jiān)測周期12個(gè)月30-65%6非單向流- -70-160h-1非單向流-

6、-30-70h-178非單向流-10-20h-1 人員從事藥品潔凈實(shí)驗(yàn)室微生物監(jiān)測和控制的人員應(yīng)符合現(xiàn)行中國藥典附錄中“藥品微生物實(shí)驗(yàn)室指導(dǎo)原則”的相關(guān)要求。 參數(shù)確認(rèn)初次使用的潔凈實(shí)驗(yàn)室應(yīng)進(jìn)行參數(shù)確認(rèn)，物理參數(shù)的測試應(yīng)當(dāng)在微生物監(jiān)測方案實(shí)施之前進(jìn)行。為 確保操作順暢，保證設(shè)備系統(tǒng)的運(yùn)行能力和可靠性。確認(rèn)主要的物理參數(shù)過濾系統(tǒng)完整性，空氣流速，氣流組織、換氣次數(shù)、壓差、溫度和相對濕度等。 空氣懸浮粒子和微生物當(dāng)人員流動(dòng)、超凈工作臺(tái)等重大設(shè)備運(yùn)轉(zhuǎn)、空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)等重大變化時(shí)應(yīng)重新進(jìn)行參數(shù)測試。測試結(jié)果不能作為最終判斷依據(jù)，應(yīng)進(jìn)行綜合分析判斷。 監(jiān)測方法懸浮粒子、沉降菌、浮游菌、表面菌的測試方法GB

7、/T 16292-2010醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子的測試方法；GB/T 16294-2010醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）沉降菌的測試方法；GB/T 16293-2010醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）浮游菌的測試方法。藥品潔凈實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測項(xiàng)目及頻次（參考） 受控區(qū)域 潔凈度級別采樣頻次 監(jiān)測項(xiàng)目隔離系統(tǒng)內(nèi)部每次實(shí)驗(yàn)空氣懸浮粒子、浮游菌、沉降菌、表面微生物（手套）相鄰?fù)獠棵吭乱淮慰諝鈶腋×Ｗ印⒏∮尉?、沉降菌、表面微生物微生物潔凈?shí)驗(yàn)室無菌檢查（以A/B級或A/C級為例）每次實(shí)驗(yàn)空氣懸浮粒子、浮游菌、沉降菌、表面微生物（手套及操作服）微生物限度檢查以A/C級為例）每周一次空氣懸浮粒子、浮游菌、沉降菌、表面微生物（手

8、套及操作服）C級每季度一次空氣懸浮粒子、浮游菌、沉降菌、表面微生物D級每半年一次空氣懸浮粒子、浮游菌、沉降菌、表面微生物以下情況及時(shí)調(diào)整檢測頻率連續(xù)超過糾偏限和警戒限。關(guān)鍵區(qū)域內(nèi)發(fā)現(xiàn)有污染存在?？諝鈨艋到y(tǒng)進(jìn)行任何重大的維修。消毒規(guī)程改變。設(shè)備有重大維修。潔凈室（區(qū)）結(jié)構(gòu)或區(qū)域分布有重大變動(dòng)。引起微生物污染的事故。日常操作記錄反映出傾向性的數(shù)據(jù)。 2010版 GMP 潔凈室 檢測 采樣及監(jiān)測空氣懸浮粒子、浮游菌、沉降菌的采樣點(diǎn)、數(shù)量、位置、次數(shù)、采樣量、最少平皿數(shù)及采樣注意事項(xiàng)參見國家標(biāo)準(zhǔn)；GB/T 16292-2010GB/T 16293-2010GB/T 16294-2010 潔凈室環(huán)境

9、檢測培養(yǎng)基胰酪大豆胨瓊脂（TSA） 細(xì)菌、酵母菌和霉菌的生長必要時(shí)可加入添加劑消除和減少消毒劑和抗生素的作用。，沙氏葡萄糖瓊脂(SDA)或玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基酵母菌和霉菌的監(jiān)測。通常，不監(jiān)控厭氧菌，因?yàn)檫@些微生物在環(huán)境中不能生存。如需要應(yīng)對微需氧和低氧環(huán)境下生長的微生物進(jìn)行監(jiān)測。用于環(huán)境微生物監(jiān)測的培養(yǎng)基須特別防護(hù)。雙層包裝和終端滅菌，否則使用前應(yīng)進(jìn)行100%的預(yù)培養(yǎng)以防止外來的污染物帶到環(huán)境中及避免出現(xiàn)假陽性結(jié)果。胰酪大豆胨瓊脂（TSA），培養(yǎng)溫度為30-35，時(shí)間不少于2天。沙氏葡萄糖瓊脂(SDA)，培養(yǎng)溫度為20-25，時(shí)間不少于5天。如需要可以延長至7天。稀釋劑稀釋劑0.9%無菌氯化鈉溶

10、液、pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液胰酪大豆胨肉湯（TSB）或其他適宜的稀釋劑。在凈化空氣系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于10min后開始測試。靜態(tài)測試時(shí)測試人員不得多于2人。 潔凈室微生物監(jiān)測培養(yǎng)皿的直徑為90mm，培養(yǎng)皿的有效期為14天TSA（胰酪大豆瓊脂）將已制備好的培養(yǎng)皿，放置在主要操作區(qū)內(nèi)并接近于操作高度，打開培養(yǎng)皿蓋，將蓋子倒扣放置，使培養(yǎng)基表面暴露4h，培養(yǎng)。 C級，D級區(qū)域每個(gè)房間放置2個(gè)點(diǎn)。動(dòng)態(tài)檢測沉降時(shí)間為操作全過程，可以不足4h；若生產(chǎn)操作超過 4h，需要更換新的培養(yǎng) 皿。A級區(qū)域每個(gè)房間4個(gè)點(diǎn)，根據(jù)操作人員活動(dòng)頻率和風(fēng)險(xiǎn)影響放置。 沉降菌的檢測 浮游菌檢測 準(zhǔn)備及檢測程序培養(yǎng)皿直徑

11、為90mm，培養(yǎng)皿的有效期為14天。TSA（胰酪大豆瓊脂）檢測程序 按儀器說明書規(guī)定程序進(jìn)行操作。注意點(diǎn)使儀器中的殘余消毒劑蒸發(fā)，時(shí)間不少于5min。每個(gè)點(diǎn)采集結(jié)束后，都需要等消毒劑蒸發(fā)之后再檢測下個(gè)點(diǎn)。 表面菌檢測檢測范圍 環(huán)境、設(shè)備和人員采用接觸碟或棉拭子擦拭接觸碟法操作人員出A級區(qū)前，在規(guī)定房間進(jìn)行取樣。直徑為55mm的凸碟， TSA （胰酪大豆瓊脂）。將充滿規(guī)定的瓊脂培養(yǎng)基的接觸碟取樣后置規(guī)定溫度下培養(yǎng)計(jì)數(shù)結(jié)果以cfu/碟報(bào)告。 人員表面菌檢測接觸碟先分別取2只手套五指樣，再取額頭、前胸、手肘和膝蓋樣。打開接觸碟蓋子，將五指輕輕按于接觸碟培養(yǎng)基上10秒鐘后，蓋回上蓋，做上標(biāo)識(shí)。再用接觸

12、碟分別輕壓潔凈服額頭部、前胸部、手肘部(任一邊)、膝蓋部(任一邊)10秒鐘后，蓋回上蓋，做上標(biāo)識(shí)，標(biāo)明操作人員代號、取樣位置時(shí)間。 設(shè)備環(huán)境表面菌的檢測試驗(yàn)結(jié)束清場前檢測用接觸碟或棉簽擦拭對主要生產(chǎn)操作設(shè)備表面、地面和墻面進(jìn)行取樣后立即對取樣位置用消毒液擦拭。 設(shè)備表面擦拭樣為操作時(shí)人員易接觸位置，如反應(yīng)釜釜體、抽濾器外表面、烘箱門把手等部位。 棉簽擦拭法 用于不規(guī)則表面的取樣，如地面、臺(tái)面、墻壁、設(shè)備、門把手等。用孔面積為2Ocm2的無菌的金屬模飯壓在測試面上，將無菌棉簽用O. 9無菌氯化納溶液占濕，在板孔范圍內(nèi)擦抹5次，換1支棉簽再擦抹5次，共擦抹10次，5個(gè)位置100cm2 ， 每支棉簽

13、抹完后立即剪斷(或燒斷)，投入盛有30mlO.9%無菌氧化納需液的錐型瓶(或大試管中 ，搖晃約1分鐘，即得供試液。取供試液，按 中國藥典2015年版微生物計(jì)數(shù)方法測定。 每個(gè)棉簽取樣面積為25 cm2，微生物計(jì)數(shù)結(jié)果以CFU。 潔凈區(qū)環(huán)境微生物的控制 警戒限 用來指示環(huán)境中的微生物數(shù)是否有偏離正常水平的可能性。 結(jié)果超出警戒限應(yīng)采取的措施; 鑒別微生物 調(diào)查是否存在的取樣/檢驗(yàn)程序的偏差并分析操作過程中環(huán)境系統(tǒng)，生產(chǎn)工藝是否存在的偏差。評估結(jié)果趨勢。行動(dòng)限 測試同一個(gè)房間不同點(diǎn)的微生物數(shù)連續(xù)三次超過警戒線., 表示環(huán)境中的微生物數(shù)污染水平已嚴(yán)重偏離正常水平， 并且對產(chǎn)品質(zhì)量造成高度的污染風(fēng)險(xiǎn)。

14、 警戒限度和糾偏限度微生物監(jiān)測警戒限度和糾偏限度的制定根據(jù)歷史數(shù)據(jù)，結(jié)合不同潔凈區(qū)域的標(biāo)準(zhǔn)，采用數(shù)理統(tǒng)計(jì)方法 ，制定適當(dāng)?shù)奈⑸锉O(jiān)測警戒限度和糾偏限度。一般可將平均值加上2倍的標(biāo)準(zhǔn)差作為警戒限度。加上3倍標(biāo)準(zhǔn)差作為糾偏限度。定期回顧評價(jià)，如歷史數(shù)據(jù)表明環(huán)境有所改善，限度應(yīng)作出相應(yīng)調(diào)整以反映環(huán)境實(shí)際質(zhì)量狀況。 潔凈環(huán)境微生物糾偏限度參考值潔凈環(huán)境微生物糾偏限度參考值 潔凈度級別浮游菌糾偏限度cfu/m3沉降菌糾偏限度（）cfu /4小時(shí)A級11B級73C級105D級10050 注：數(shù)據(jù)表示建議的環(huán)境質(zhì)量水平，也可根據(jù)檢測或分析方法的類型確定 微生物糾偏限度標(biāo)準(zhǔn)?？筛鶕?jù)需要增加沉降碟數(shù)。A級環(huán)境的

15、樣品，正常情況下應(yīng)無微生物污染。 數(shù)據(jù)分析及偏差處理對日常環(huán)境監(jiān)測的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析和回顧 通過收集的數(shù)據(jù)和趨勢分析；總結(jié)和評估無菌生產(chǎn)環(huán)境或潔凈實(shí)驗(yàn)室是否受控，評估警戒限度和糾偏限度是否適合及所采取的糾偏措施是否正確。正確評估微生物污染 不僅僅關(guān)注微生物數(shù)量，更應(yīng)關(guān)注微生物污染檢出的頻率在一個(gè)采樣周期內(nèi)同一環(huán)境中多點(diǎn)發(fā)現(xiàn)污染，預(yù)示風(fēng)險(xiǎn)增加，應(yīng)仔細(xì)評估。幾個(gè)點(diǎn)同時(shí)有污染的現(xiàn)象可能由不規(guī)范采樣操作引起。應(yīng)仔細(xì)回顧采樣操作過程。在污染后的幾天對環(huán)境進(jìn)行重新采樣是沒有意義的，因?yàn)椴蓸舆^程不具有可重復(fù)性 偏差處理當(dāng)微生物監(jiān)測結(jié)果超出警戒限度和糾偏限度時(shí)，應(yīng)當(dāng)按照偏差處理規(guī)程進(jìn)行處理并采取糾正措施，并進(jìn)行評

16、估。重大偏差 關(guān)鍵區(qū)域（A級）微生物監(jiān)測數(shù)值若大于15 cfu，應(yīng)迅速調(diào)查原因。分析是獨(dú)立是與其他聯(lián)系，應(yīng)回顧和追溯兩周前的微生物監(jiān)測數(shù)據(jù)，并考慮是否對樣品召回。-USP(35)1116品無菌操作環(huán)境的微生物控制和監(jiān)測指導(dǎo)原則 潔凈區(qū)環(huán)境微生物的控制措施措施 鑒別微生物。鑒別微生物。調(diào)查調(diào)查 是否存在的取樣是否存在的取樣/ /檢驗(yàn)程序的偏差。檢驗(yàn)程序的偏差。 操作過程中環(huán)境系統(tǒng)，生產(chǎn)工藝是否存在偏差。操作過程中環(huán)境系統(tǒng)，生產(chǎn)工藝是否存在偏差。 評估結(jié)果趨勢。評估結(jié)果趨勢。 根據(jù)現(xiàn)行程序?qū)ο嚓P(guān)區(qū)域再清潔消毒根據(jù)現(xiàn)行程序?qū)ο嚓P(guān)區(qū)域再清潔消毒 按程序通知有關(guān)部門。按程序通知有關(guān)部門。 在開始生產(chǎn)前復(fù)測。在開始生產(chǎn)前復(fù)測。 人員培訓(xùn)。人員培訓(xùn)。 當(dāng)有當(dāng)有2 2次超過行動(dòng)限時(shí)采取以下措施；次超過行動(dòng)限時(shí)采取以下措施； 潔凈區(qū)環(huán)境微生物的控制確定可能污染微生物的原因并調(diào)查樣品是獨(dú)立的還是涉及整個(gè)區(qū)域，人員 的水平，健康，技術(shù)，清潔程序等。更衣程序房間/潔凈空氣裝置的HEPA過濾器完整性已進(jìn)行的過程趨勢圖中的以前的檢測結(jié)果或其他已確定的問題。調(diào)查范圍- 無菌生產(chǎn)人員- 微生物檢查人員- QA/QC人員 報(bào)告書 檢測結(jié)束，由QC及時(shí)出具檢驗(yàn)報(bào)告書報(bào)告書 一式兩 份，一份附在檢驗(yàn)原始記錄中，一份發(fā) 給車間。 潔凈區(qū)環(huán)境微生物的控制檢驗(yàn)原始記錄由質(zhì)量保證部存檔。附件: 微生物檢測記