禽多殺性巴氏桿菌病病原分離鑒定與藥敏試驗(yàn)

1、禽多殺性巴氏桿菌病病原分離鑒定與藥敏試驗(yàn)【摘要】本文通過研究從梧州送檢的疑似多殺性 巴氏桿菌病死雞的肝臟中分離出了一株細(xì)菌，根據(jù)其培養(yǎng)特 性與典型的染色特征并結(jié)合生化試驗(yàn)鑒定為巴氏桿菌。【關(guān)鍵詞】巴氏桿菌；多殺性巴氏桿菌；病原；生化試 驗(yàn)；分離鑒定；藥敏試驗(yàn)1巴氏桿菌屬概述巴氏桿菌1屬(pasteurella)分類地位未定的1屬， 為無芽胞，不運(yùn)動(dòng)，兼性厭氧，菌體兩端常染色濃重的革蘭 氏染色陰性小桿菌2,因1880年巴斯德氏首先自病雞分離 到本屬中的多殺巴氏桿菌而得名。3該屬已確定的種有多 殺巴氏桿菌、嗜肺巴氏桿菌、溶血巴氏桿菌、尿巴氏桿菌和 鴨疫巴氏桿菌等。屬中的多殺巴氏桿菌危害畜、禽最嚴(yán)重

2、， 主要引起動(dòng)物發(fā)生出血性敗血癥。從發(fā)病動(dòng)物體液或組織中 培養(yǎng)分離到的菌落基本有兩型：一為在過45°折光，低倍顯 微鏡下，呈現(xiàn)鮮明的藍(lán)綠色而帶金光，邊緣有狹窄的紅黃色 帶的fg菌落型，相當(dāng)于血清型乙型；另一為在45°折光下, 低倍顯微鏡下，菌落呈現(xiàn)橘紅色、邊緣稍帶狹窄的黃綠光的 fo菌落型，相當(dāng)于血清型甲型4。在中國，牛、豬、驢和 馬的多殺巴氏桿菌病絕大多數(shù)為fg型菌所致，家禽流行性 巴氏桿菌病都是f0型菌所致5。多殺巴氏桿菌菌體抗原有 12個(gè)型，莢膜抗原有5個(gè)型，前者以阿拉伯?dāng)?shù)字表示，后者 以英文大寫字母表示，如1： a, 2； a, 1： b等，已知組成 的菌型有16個(gè)

3、。本菌血清型與宿主的分布有一定關(guān)系，其 細(xì)胞壁含有明顯的內(nèi)毒素活性，但未發(fā)現(xiàn)外毒素。本菌可引 起家禽霍亂的暴發(fā)性流行，牛的出血性敗血病、原發(fā)性或繼 發(fā)性肺炎等，國外免疫用的菌苗以加不同佐劑的滅活菌為 主，也使用禽霍亂弱毒活菌，中國已于1959年使用弱毒活 苗6 o2多殺性巴氏桿菌及其危害多殺性巴氏桿菌(pasteurella multocida, pro)是 一種重要的病原菌，對多種動(dòng)物和人均有致病性，可以導(dǎo)致 豬肺疫、禽霍亂、牛羊兔出血性敗血癥等危害嚴(yán)重的畜禽傳 染病。多殺性巴氏桿菌正常存在于多種健康動(dòng)物的肺和咽喉 部黏膜，當(dāng)動(dòng)物處于應(yīng)激狀態(tài)、機(jī)體抵抗力低下時(shí)，細(xì)菌侵 入體內(nèi)，大量繁殖并致病

4、，發(fā)生內(nèi)源性傳染。此菌類在同種 或不同種動(dòng)物間可相互傳染，蟬和蚤被認(rèn)為是自體傳播的媒 介昆蟲7。本病的廣泛性及其傳染性，使得它在養(yǎng)禽業(yè)中 造成的危害僅次于新城疫。3生化試驗(yàn)原理各種微生物細(xì)胞所含的酶系統(tǒng)不完全相同，這決定其在 代謝類型上存在差異，對糖、蛋白質(zhì)等營養(yǎng)物質(zhì)的分解能力 也不一致，因而其代謝產(chǎn)物也有差異，即使針對同一營養(yǎng)物 質(zhì)的代謝途徑和代謝產(chǎn)物也會(huì)不同。因此通過生化反應(yīng)方 法，根據(jù)微生物對糖，蛋白質(zhì)等基質(zhì)的利用情況及其不同的 代謝產(chǎn)物的生化特性可以作為鑒定細(xì)菌的重要依據(jù)之一。3. 1糖類分解試驗(yàn)細(xì)菌分解糖的能力與該菌是否含有分解某種糖的酶密 切相關(guān)，是受遺傳基因所決定的，是細(xì)菌的重要

5、表型特征， 有助于鑒定細(xì)菌，含糖培養(yǎng)基中加入指示劑，若細(xì)菌分解則 產(chǎn)酸或產(chǎn)酸產(chǎn)氣，使培養(yǎng)基顏色變化，從而判斷細(xì)菌是否分 解某種糖或其他碳水化合物。細(xì)菌發(fā)酵糖類可以產(chǎn)生各種酸 （乳酸、乙酸等）和氣體（甲烷、氫氣、二氧化碳），酸和 氣的產(chǎn)生與否可根據(jù)培養(yǎng)后試管中指示劑的顏色變化和小 套管中有無氣泡判定，指示劑酸性復(fù)紅在堿性環(huán)境呈黃色， 酸性環(huán)境呈紅色。3.2石蕊牛乳試驗(yàn)石蕊是一種ph指示劑，當(dāng)ph值降至4. 5時(shí)酸性顯紅色, ph值接近中性時(shí)，未接種的培養(yǎng)基為紫藍(lán)色故稱紫乳。石蕊 也是一種氧化還原劑，可以還原為白色，所以石蕊牛乳（紫 乳）是用來測定被檢細(xì)菌幾種代謝性質(zhì)的一種鑒別培養(yǎng)基。 將被檢細(xì)菌

6、接種于紫乳，置371溫箱培養(yǎng)，觀察結(jié)果。若細(xì) 菌分解乳糖產(chǎn)酸，指示劑變色（石蕊為紅色，漠甲酚紫為黃 色）。若產(chǎn)酸產(chǎn)氣，使牛乳酸凝，氣體使凝塊中有裂隙；若 為紫色，表示乳糖未分解；若為藍(lán)色表示乳糖雖未發(fā)酵，但 細(xì)菌分解培養(yǎng)基中所出現(xiàn)的氮源物質(zhì)而產(chǎn)堿所致；若指示劑 還原則為無色，常出現(xiàn)在酸凝塊出現(xiàn)后。4研究目的和意義禽巴氏桿菌?。ㄇ莼魜y）一年四季都有散發(fā)，以春秋節(jié) 較多，在我國各地均有發(fā)生，是目前危害養(yǎng)禽業(yè)的重要細(xì)菌 性傳染病之一。如何正確診斷以及合理用藥治療禽巴氏桿菌 病是目前廣大學(xué)者十分關(guān)注的問題。在廣西梧州送檢的一批 6月齡病雞中出現(xiàn)呼吸急促、鼻和口中流出混有泡沫的黏液、 劇烈腹瀉、糞便灰黃

7、色或灰綠色等癥狀，發(fā)病雞群產(chǎn)蛋量下 降30%左右，剖檢病雞可見鼻腔內(nèi)有黏液，胸腔、腹腔、氣 囊上有干枯樣滲出物，肝腫大、質(zhì)脆、呈棕黃色、表面有許 多小米粒大小的灰白色壞死點(diǎn)，心冠脂肪有很多出血點(diǎn)，心 包內(nèi)積有淡黃色液體，我們懷疑雞群患有雞霍亂，但用增效 磺胺治療效果不理想，于是我們進(jìn)行了病原的分離鑒定，涂 片鏡檢發(fā)現(xiàn)典型兩極著色的巴氏桿菌，繼而結(jié)合生化試驗(yàn)結(jié) 果對其進(jìn)行鑒定；由于不同的多殺性巴氏桿菌菌株對藥物的 敏感性不同，有時(shí)甚至出現(xiàn)耐藥性，特別是在長期使用相同 的藥物的情況下，因此進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，以了解該菌對各種抗 生素的敏感程度。高度敏感的藥物推薦為首選臨床用藥，減 少使用中度敏感或耐藥的抗生素，防止產(chǎn)生耐藥性。動(dòng)物試 驗(yàn)驗(yàn)證了其致病力和毒力大小，對臨床診斷禽多殺性巴氏桿 菌有較高的參考價(jià)值.參考文獻(xiàn)1 (美)y.m.saif.禽病學(xué)m.第11版.北京:中國農(nóng) 業(yè)出版社，2005.2 卡爾尼克bw.禽病學(xué)m.第10版.北京：北京農(nóng)業(yè) 大學(xué)出版社，1999.3 陸承平獸醫(yī)微生物學(xué)m.第2版北京：中國農(nóng)業(yè) 出版社，2001.4 甘孟侯中國禽病學(xué)m.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社， 1999.5 曹軍平.禽