典型性印染廢水生物急性毒性水平分析

1、    典型性印染廢水生物急性毒性水平分析    摘要：采用明亮發(fā)光細(xì)菌t3（photobacterium p. t3）和dxy-2型生物毒性測試儀對22類典型性印染廢水樣品的急性毒性效應(yīng)進(jìn)行測定，綜合分析印染生產(chǎn)中印染前處理廢水、染色廢水、印花廢水以及印染處理廢水的生物急性毒性水平。關(guān)鍵詞：印染廢水;污水毒性;毒物質(zhì)中途分類號：x83 ：a ：2095-672x（2019）12-0-03abstract： the bright luminescent bacteria t3 （photobacterium p. t3） and dxy-2 type b

2、iotoxicity tester were used to determine the acute toxicity effects of 22 typical printing and dyeing wastewater samples. a comprehensive analysis of printing and dyeing wastewater， dyeing wastewater， and printing biological acute toxicity levels of wastewater and wastewater from printing and dyeing

3、 processes.keywords： printing and dyeing wastewater; sewage toxicity; toxic substances土壤和污水毒性的測定主要有理化方法和生物學(xué)方法。傳統(tǒng)的理化分析方法只能定量分析環(huán)境中有限污染物種類的含量，而不能直接反映各種有毒物質(zhì)的綜合毒性，生物毒性測試能夠彌補(bǔ)理化方法的不足。1995 年中國制定并頒布了利用發(fā)光細(xì)菌測定水質(zhì)毒性的國家標(biāo)準(zhǔn)gb /t 15441-1995水質(zhì)急性毒性的測定發(fā)光細(xì)菌法1。該標(biāo)準(zhǔn)介紹了明亮發(fā)光細(xì)菌t3的來評價生物毒性的檢測方法。明亮發(fā)光細(xì)菌t3菌（photobacterium phosphor

4、eum t3）是一類非致病的普通細(xì)菌，主要分布在海洋環(huán)境中，在正常的生理條件下能夠發(fā)射出可見光，當(dāng)環(huán)境條件不佳或有毒物質(zhì)存在時，發(fā)光細(xì)菌的熒光素酶活性或細(xì)胞呼吸受到抑制，其發(fā)光能力受到影響，導(dǎo)致發(fā)光強(qiáng)度減弱，且其減弱程度與毒性大小呈正相關(guān)，因此通過發(fā)光率的改變來顯示有毒物質(zhì)對生物體的毒性作用。本研究采用明亮發(fā)光細(xì)菌t3（photobacterium p. t3）和dxy-2型生物毒性測試儀對22個污水樣品的急性毒性效應(yīng)進(jìn)行了測定和分析。1 材料與方法1.1 材料1.1.1 菌株將明亮發(fā)光細(xì)菌t3（photobacterium p. t3）凍干粉（中國科學(xué)院院南京土壤研究所提供）用3% nacl

5、溶液溶解復(fù)蘇，轉(zhuǎn)接到新鮮斜面上培養(yǎng)后轉(zhuǎn)接于50ml的液體培養(yǎng)基中，在25，180r·min -1條件下培養(yǎng)12-14h。將培養(yǎng)后的菌液立即用3% nacl溶液洗滌后在5000r·min -1下離心8min，后將菌液用3% nacl溶液稀釋備用。1.1.2 待測樣品試驗(yàn)所測的22個水樣編號分別為sh1sh22;采樣時間為2019年2月28日。水樣來源：蘇州某集團(tuán)印染廠廢水。對于其中含有固體懸浮物的樣品，事先經(jīng)過過濾去除后再進(jìn)行檢測。1.1.3 主要儀器dxy-2型生物毒性測試儀，南京土壤研究所研制。1.2 實(shí)驗(yàn)方法生物毒性測試儀提前開機(jī)預(yù)熱30 min，將10ml待測樣品與0

6、.3gnacl充分振蕩混勻，吸取1.8ml混合液于玻璃測試管中，加入200 l 菌液，加塞上下振蕩5次，靜置15 min 后測試發(fā)光度（每管在加菌液的當(dāng)時精確計時，精確到秒）。每個檢測樣品采用3 個平行，實(shí)驗(yàn)同時添加3個平行的對照（3% nacl溶液）以保證實(shí)驗(yàn)的有效性并以此為基礎(chǔ)計算樣品液的相對發(fā)光率和相對發(fā)光抑制率。1.3 樣品檢測1.3.1 樣品液的稀釋樣品液預(yù)實(shí)驗(yàn)：將10 ml 待測樣品與0.3 g nacl 充分振蕩混勻，吸取1.8 ml混合液于玻璃測試管中，加入200l 菌液，加塞上下振蕩5次，靜置15 min 后測試發(fā)光度。每個檢測樣品采用3 個平行，實(shí)驗(yàn)同時添加3個平行的對照（

7、3% nacl溶液）以保證實(shí)驗(yàn)的有效性并以此為基礎(chǔ)計算相對發(fā)光抑制率。將相對發(fā)光抑制率大于零的樣品進(jìn)行樣品稀釋。1.3.2 樣品液稀釋濃度的選擇：探測試驗(yàn)：將樣品液按對數(shù)系列稀釋成5個濃度：100%、10%、1%、0.1%、0.01%（它們的對數(shù)依次為0，-1，-2，-3，-4），按以上方法所述初測一遍視1%100%相對發(fā)光度落在哪一個濃度范圍。1.3.3 樣品檢測在1%100%相對發(fā)光度所落在的濃度范圍內(nèi)增配69個濃度，并測定對應(yīng)發(fā)光度，繪制濃度和發(fā)光度的相關(guān)曲線。2 數(shù)據(jù)處理2.1 計算樣品相對發(fā)光率、相對發(fā)光抑制率（%），并算出平均值相對發(fā)光率（%）×100%相對發(fā)光抑制率（%

8、）×100%相對發(fā)光率平均值（%）×100%2.2 建立并檢驗(yàn)樣品稀釋濃度（c）與其相對發(fā)光度（t）%均值的相關(guān)方程，繪制關(guān)系曲線（1）求出一元一次線性回歸方程的a（截距）、b（斜率、回歸系數(shù)）和r（相關(guān)系數(shù)），列出方程：t=a+bc。（2）根據(jù)建立的上述方程繪制關(guān)系曲線。將t=90和50代入上式，分別求出樣品的ec10和ec50值。ec10和ec50值以樣品的稀釋濃度（百分濃度）表示。2.3 毒性等級劃分根據(jù)行業(yè)廢水毒性分級標(biāo)準(zhǔn)/發(fā)光菌2， 把水質(zhì)生物毒性分為五個等級用于本次水質(zhì)毒性評價。3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析3.1 樣品預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果測試結(jié)果表明：22個水樣中的9個樣品顯示對t

9、3細(xì)菌的活性無抑制作用，sh4水樣對t3菌的相對抑制率為1.4%，毒性等級為級;sh14水樣的相對發(fā)光抑制率為35.1%，毒性級別為中毒，毒性等級為級;其他12個樣品包括sh1、sh2、sh4、sh8sh13、sh18、sh21原始樣品的相對發(fā)光抑制率為100%，毒性級別為劇毒，毒性等級為級。3.2 樣品稀釋相關(guān)曲線對初步測定試驗(yàn)中12個相對發(fā)光率低于90%的樣品（即相對抑制率大于10%的樣品）進(jìn)行稀釋實(shí)驗(yàn)，通過預(yù)實(shí)驗(yàn)確定相對發(fā)光率在1100%時，樣品所在的濃度范圍后，增加濃度梯度求得樣品的稀釋濃度c-相對發(fā)光率的一元一次方程曲線。如下圖所示，所有樣品的稀釋濃度相對發(fā)光率的相關(guān)系數(shù)（r2）在0

10、.90380.9886之間，具有較好的線性關(guān)系。3.3 計算結(jié)果通過以上圖1線性方程，求得樣品的ec10和 ec50值如下表。4 總結(jié)本次采樣共采得印染廢水22個樣品，其中9個樣品顯示對t3細(xì)菌的活性無抑制作用，sh4水樣對t3菌的相對抑制率為1.4%，毒性等級為級;sh14水樣的相對發(fā)光抑制率為35.1%，毒性級別為中毒，毒性等級為級;其他11個樣品包括sh1、sh2、sh4、sh8sh13、sh18、sh21原始樣品的相對發(fā)光抑制率為100%，毒性級別為劇毒，毒性等級為級。12個水樣（包括sh1、sh2、sh4、sh8sh13、sh18、sh21及sh14）的ec10的樣品稀釋濃度范圍為0.11%35.5%;sh14原始樣品的抑制率為35.1%，不存在ec50值，其余11個樣品ec50值為0.16%55.3%。參考文獻(xiàn)1國家環(huán)境保護(hù)總局.gb/t 154411995 水質(zhì)急性毒性的測定發(fā)光細(xì)菌s北京： 中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，1995.2farré m