實(shí)驗(yàn)五酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)

1、實(shí)驗(yàn)五酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?、了解溫度對(duì)酶活性及酶促反應(yīng)速度的彩響，加深對(duì)酶特性的認(rèn)識(shí)。2、了解離子對(duì)酶活性及酶促反應(yīng)速度的影響，加深對(duì)酶特性的認(rèn)識(shí)?！緦?shí)驗(yàn)原理】1、每種酶都冇其最適溫度，高于或低于此溫度酶的活性都降低。一般而言， 若酶處于過(guò)高的溫度環(huán)境中，會(huì)使酶活性永久喪失；而若處于極低溫度的 環(huán)境屮只會(huì)使酶活性受到抑制，一旦溫度適宜，酶又會(huì)全部或部分的恢復(fù) 其活性。2、酶的活性常常受某些物質(zhì)的影響，有些物質(zhì)能使酶的活性增加，稱(chēng)為酶的 激活劑；冇些物質(zhì)能使酶的活性降低，稱(chēng)為酶的抑制劑。c是唾液淀粉酶 的激活劑。其它的陰離子，如br no3和i對(duì)該酶也有激活作用，但較 微弱。而c產(chǎn)對(duì)

2、唾液淀粉酶具有抑制作用。激活劑和抑制劑影響酶活性的 劑量是很少的，并且常具有特異性。就木實(shí)驗(yàn)，低濃度c可以增加酶活性，高濃度的c或者低濃度的cu2+則 會(huì)抑制酶活性，同時(shí)低濃度的naj so?-等對(duì)酶活性沒(méi)冇影響。激活劑的 作用機(jī)制是多種多樣的，可能是作為輔酶或輔基的一個(gè)組成部分，也可以 直接作為酶活性中心的構(gòu)成部分?！緦?shí)驗(yàn)用品】1、儀器和器材：冰箱、恒溫水浴鍋、紫外分光光度計(jì)、試管和試管架、移液槍及槍頭、膠頭滴管、燒杯2、試劑:dph6.8的緩沖液:量取15.45ml的0.2m磷酸氫二鈉和4.55ml的檸檬酸混合搖勻即可。2) 0.5%淀粉的0.5%氯化鈉溶液：0.5g可溶性淀粉和0.5g氯

3、化鈉,溶于100ml蒸憾水(需加熱)。3) 碘液4) 1 m hci 溶液5) 1 m naoh 溶液6) 稀釋100倍的唾液7) 冰水浴8) 1%naci 溶液9) 0.1%cuso4 溶液10) 0.1%淀粉液【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】（-）溫度對(duì)酶活性的影響1. 制管和預(yù)溫：由于木實(shí)驗(yàn)對(duì)恒溫反應(yīng)要求較高，故每個(gè)溫度梯度使用兩支試管，分別標(biāo)記 為a管和b管，同時(shí)欲溫底物與酶。a管加入ph6. 8的緩沖液和0. 5%淀粉液; b管使用移液槍加入稀釋100倍的唾液，相對(duì)應(yīng)的兩支試管置于設(shè)定的溫度 下預(yù)溫5mino取12支潔凈試管，參照下表加入試劑:管號(hào)1 (0°c)2（室溫）3(37°c

4、)4(50°c)5(70°c)6（室溫）aph6.8 的 緩沖液(ml)222222含 nacl 的 0.5% 淀粉液(ml)22222用2ml 的蒸餡 水代替b稀釋100 倍的唾液（ml）111111*6號(hào)管為對(duì)照組（比色時(shí)作為0號(hào)管），置于室溫，且淀粉液用蒸憾水代替2. 混合a、b管：將1號(hào)a管試劑迅速加入溫度對(duì)應(yīng)的b管中（為了最大限度保證酶的量），此 時(shí)為計(jì)時(shí)的起點(diǎn)（使用秒表），搖勻后放回對(duì)應(yīng)溫度繼續(xù)水浴。注意：轉(zhuǎn)移a 管試劑前需將其搖勻。3時(shí)間控制然后每隔lmin或2min （時(shí)間自定）按上步操作依次把2、3、4、5、6號(hào)的a、 b管混合，嚴(yán)格控制好時(shí)間。4. 中止

5、反應(yīng)準(zhǔn)確反應(yīng)13min,向1號(hào)管加入2滴im hc1溶液，立即混勻，中止反應(yīng)，按 上一步的順序和吋間間隔依次對(duì)各管進(jìn)行操作，并移至試管架。后再各用2 滴im naoii溶液中和每管。5. 顯色在每管中各加入加1 0. 03175g/l碘液并混勻，觀察現(xiàn)象。6. 比色若不同溫度梯度間現(xiàn)象差別不明顯，則進(jìn)行比色，通過(guò)光密度值來(lái)比較。（二）離子對(duì)酶活性的影響取3支潔凈的試管，編號(hào)后按下表操作:管號(hào)1231%naci(ml)10.1%cuso4(ml)1蒸憾水（ml）10.1%淀粉液（ml）333100倍稀釋唾液（ml）11137°c恒溫水浴15min,取出滴加碘液碘液222結(jié)果【結(jié)果處理】記錄現(xiàn)象（或比較吸光度值），做岀合理分析。【注意事項(xiàng)】嚴(yán)格注意時(shí)間的控制及各物質(zhì)的添加量?！舅伎碱}】1