《動物園飼養(yǎng)貓科動物巴貝斯蟲病防治技術規(guī)程》編制說明

1、安徽省地方標準編制說明標準名稱動物園飼養(yǎng) 貓科動物巴貝斯蟲病防治技術規(guī)程任務來源（項目計劃安徽省市場監(jiān)督管理局關于下達2019年第一批安徽省地方標準制修訂計劃的號）函（皖市監(jiān)函 2019510 號） 2019-1-057負責起草單位安徽省農業(yè)大學單位地址安徽省合肥市長江西路130號安徽省合肥市野生動物園；安徽省蕪湖市野生動物園；安徽省繁昌縣動物疫病與參與起草單位預防控制中心；安徽省績溪縣畜牧水產局；安徽省動物疫病預防與控制中心表 1標準起草人（全部起草人，應與標準文本前言中起草人排序一致）序號姓名單位職務職稱1徐前明安徽農業(yè)大學副教授2王根紅合肥市野生動物園獸醫(yī)師安徽省繁昌縣動物疫病與預3查日

2、華高級獸醫(yī)師防控制中心4胡嘉彥安徽省績溪縣畜牧水產局獸醫(yī)師安徽省繁昌縣動物疫病與預5楊文超副主任高級獸醫(yī)師防控制中心安徽省繁昌縣動物疫病與預6李應列高級獸醫(yī)師防控制中心7魯思光蕪湖市赭山野生動物園獸醫(yī)師8易剛合肥市野生動物園獸醫(yī)師9王艷合肥市野生動物園獸醫(yī)師10張志忠合肥市野生動物園系書記研究員11王桂軍安徽農業(yè)大學教授教授12占松鶴安徽省動物疫病控制中心副主任研究員13劉華安徽省動物疫病控制中心獸醫(yī)師114方海合肥市野生動物園獸醫(yī)師編制情況1、編制過程簡介2018 年 9 月，由安徽省農業(yè)大學發(fā)起，合肥市野生動物園、徽省蕪湖市野生動物園；安徽省繁昌縣動物疫病與預防控制中心；安徽省績溪縣畜牧水

3、產局；安徽省動物疫病預防與控制中心等單位共同參與的成立標準編制小組，成員有徐前明、王根紅、查日華、胡嘉彥、楊文超、李應列、魯思光、易剛、王艷、張志忠、王桂軍、占松鶴和何長生，啟動動物園貓科動物巴貝斯蟲病防治技術規(guī)程編制工作。 2019 年 11 月 5 日，收到安徽省市場監(jiān)督管理局關于下達 2019 年第一批安徽省地方標準制修訂計劃的函 （皖市監(jiān)函 2019510 號），編制動物園貓科動物巴貝斯蟲病防治技術規(guī)程（征求意見稿） 。標 準起草過程：安徽省動物園飼養(yǎng)貓科動物巴貝斯蟲病防治技術規(guī)程編制工作始于2018年 1 月下旬，歷經五個階段。1. 技術準備階段（ 2018 年 5 月 2018 年

4、 8 月）：制定動物園貓科動物巴貝斯蟲病防治技術規(guī)程編制工作方案、技術方案以及基礎數據采集方法，并經省林業(yè)數表專業(yè)委員會審查通過。2. 技術培訓階段（ 2018 年 9 月 2018 年 11 月）：2018 年 9 月 27 日、 10 月 26 日及 11月 17 日分別在合肥市野生動物園、 蕪湖市野生動物園及銅陵市野生動物園等地進行技術培訓。3. 申請階段 2019 年 4 月，我所向安徽省林業(yè)標準化技術委員會提出了 動物園貓科動物巴貝斯蟲病防治技術規(guī)程 安徽省地方標準項目制定申請， 2019 年 10 月安徽省市場監(jiān)督管理局下發(fā)了關于下達 2019 年第一批安徽省地方標準制修訂計劃的函

5、 （皖市監(jiān)函 2019 10 號），本技術規(guī)范被列入該計劃，編號為 2019-03-42 。4.2019 年 6 月，答辯通過后，為了更好地推進標準修訂相關工作，建立了由徐前明松負責，王根紅等人組成技術規(guī)范的編制小組。征求意見情況： 2019 年 1011 月，由規(guī)程起草牽頭單位負責通過網站宣傳、文稿寄送等方式公開征求意見。截止2019 年 11 月 30 日，本次 共向 7 個有關行業(yè)單位、科研院所、大專院校及有代表性的標準利益方征求意見， 截止 2019 年 11 月 30 日，本次征求意見共收到7 家單位34條意見， 最終 33 條采納， 4 條未采納。 未采納的意見主要包括李文超副教授

6、提出將“蜱蟲” 改為“硬蜱” ，2主要考慮硬蜱中含有硬蜱屬的蜱蟲，容易混淆概念。還有蜱蟲防治時間，南京紅山動物園從他們園中實踐中認為時間可縮短到15 天 / 次，這樣重復率太高，而南京農業(yè)大學嚴若峰教授認為3 月 / 次，這樣間隔時間過久， 難以保證藥效。 揚州大學陶建平提出的“是巴貝斯蟲病防治還是蜱蟲防治技術規(guī)程”，巴貝斯蟲病主要依賴于蜱蟲的傳播而發(fā)生的，阻斷巴貝斯蟲病的重要途徑是防治蜱蟲，本規(guī)程對動物園內的所涉及蜱蟲的防治是防治巴貝斯蟲病的重要任務之一。5、成果報告編制審查階段（ 2019 年 5 月 2019 年 9 月）：編制成果報告、成果表，并經安徽省林業(yè)局組織專家審查通過。2、制定

7、標準的必要性和意義必要性：巴貝斯蟲病是危害動物的一種血液原蟲病，其致死率較高，發(fā)病明顯，具有季節(jié)性，其主要通過蜱蟲等媒介進行傳播的。關于野生動物感染巴貝斯蟲時有報道。蜱蟲是人畜共患的自然疫原性疾病的媒介，主要分布于林區(qū)、灌木叢林等地，常寄生于動物體表吸血，造成機械性皮膚損傷，在固著或叮咬部位形成傷口，繼而引起皮膚或傷口蛆病，使得動物體質下降，不僅釋放毒素危害動物，還傳播多種人畜共患疫病。其中巴貝斯蟲病是貓科動物常見病之一，病死率可達65%以上，成為威脅貓科動物生存重要因素之一，因此，建立高效防范貓科動物巴貝斯蟲病是本標準最基本出發(fā)點之一。本屬原蟲約 100 種，蟲體寄生于哺乳動物或人紅細胞而引

8、起的寄生原蟲病，主要以寒戰(zhàn)、發(fā)熱、貧血、黃疸、血紅蛋白尿、脾臟腫大，肌肉和關節(jié)疼痛為特征。感染貓科動物的巴貝斯蟲主要由犬巴貝斯蟲（Babeisia canis）、韋氏巴貝斯蟲（B. vitalii）和吉氏巴貝斯蟲（B. gibsoni），田鼠巴貝斯蟲（B. microti）等諸多線蟲組成，不僅感染線蟲種類多，而且其致病性也較高，往往是成為貓科動物發(fā)病、繼發(fā)感染以及致死的重要因素之一，其嚴重危害貓科動物生命，影響其生長和發(fā)育。然而，目前在國際上尚未關于貓科動物巴貝斯蟲防范技術規(guī)程，其中原因包括：（ 1）國際上對貓科巴貝斯蟲病認識尚處于初步階段，國內報道資料仍然匱乏，缺乏系統性地理解；（ 2）貓科

9、動物不同于家畜家禽，由于其生物學習性不同，生活習性有所差異，其主要在林區(qū)活動，即使動物園因森林覆蓋率高，蜱蟲或其他吸血昆蟲活動仍然頻繁，常稱為貓科動物感染該病的重要因素。意義：目前，關于貓科動物巴貝斯蟲病防控措施尚未形成規(guī)范性材料， 藥物預防無規(guī)范性程序使用。 此外，通過食物投喂藥方式尚無統一的標準。這些客觀因素給野生動物園對貓科動物巴貝斯蟲病的防治提出了挑戰(zhàn)和艱巨任務。林區(qū)滅蜱蟲措施因不同管理方式和管理水平差異較大，難以有效控制蜱蟲的活動，滅蜱蟲幼蟲、滅蜱蟲成蟲舉措不得當，都是導致林區(qū)或園區(qū)真正有效控制蜱蟲重要因素。由此可見，建立3貓科動物巴貝斯蟲病防范技術是十分必要的，對保護貓科動物具有科

10、學價值和實際應用價值。3、制定標準的原則和依據，與現行法律法規(guī)、標準的關系本標準遵循“先進性、規(guī)范性、實用性”的原則。本標準本著科學、規(guī)范、統一和實用的原則，按照等有關法中華人民共和國標準化法、安徽省地方標準管理辦法、中華人民共和國動物防疫法等法律法規(guī)，依據國際和本國關于巴貝斯蟲病的防控實踐經驗，規(guī)范了我省動物園園區(qū)巴貝斯蟲病防控條件和程序、評估驗收的方式和內容。本規(guī)程與現行法律、標準無沖突。本標準與現行法律、法規(guī)沒有沖突。本標準制定的依據：（ 1）相關的政策法規(guī)中華人民共和國標準化法、安徽省地方標準管理辦法（皖質發(fā)2013 61號）。（ 2）相關標準無。4、主要條款的說明，主要技術指標、參數

11、、試驗驗證的論述（詳細說明）主要條款：本標準的章節(jié)由：范圍、規(guī)范性引用文件、術語和定義、防治對象、診斷方法、 藥物防治和監(jiān)測與考核”是本標準的主要技術內容。主要技術指標、參數：本規(guī)程的主要技術指標和參數包括：（ 1）規(guī)程中的 5.3 蜱蟲種鑒定與調查：不同種類的蜱蟲傳播病原體是存在差異的，對蜱蟲種類鑒定是必要的。而形態(tài)學觀察不能確定到種，常需要分子生物學鑒定方法方可確定種類，分子生物學鑒定的靶基因是非常重要的，蜱蟲18S rRNA 基因和 ITS-1 基因（間隔轉錄基因）進行分子生物學鑒定，確定種類。 18S rRNA 基因通常用于蜱蟲屬的鑒定，用于種的鑒定靶基因ITS 基因因為變異度較大，更

12、適合于種的鑒定。（ 2）規(guī)程中的5.4 病原學檢查，巴貝斯蟲形態(tài)學檢查常用吉姆薩方法，染色時間不得低于30 分鐘，但判定標準是十分重要的，否則會引起誤判現象，特別對初學者來說不易判定。在紅細胞內發(fā)現典型的蟲體，大小應為2-4 m，有桿狀、梨籽型的，染色后明顯具有染色質團呈藍色，核呈紫紅色。分子生物學法檢測用 于 擴 增 蜱 蟲 ITS-1基 因 引 物 設 計 如 下 ： TITS1F(5 -TCATAAGCTCGCGTTGATT- 3) 和TITS1R(5 -AGCTGGCTGCGTTCTTCAT- 3)。反應體系： 以 25 l為單位反應體系， 主要由 10×Ex Taq buf

13、fer 2.5 l ，dNTP(2.5 mmol/L) 2.0 l ，P1、P2（ 25 pmol/ L）各 1.0 ，cDNA 5.0 l，Ex Taq（ 1 U/ L） 0.15 l ， ddH2O 調整至 25 l。 PCR擴增 18S rRNA 基因反應條件： 95 預變性 5 min ； 94變性 45 sec ，50退火 1min ， 72延伸 90sec ， 40 個循環(huán)； 72 10min ；4保存。4用于巴貝斯蟲 18SrRNA基因引物序列如下：P1： Bab-1-F： 5-AATTACCCAA TCCTGACACAGG-3；Bab-1-R:5-TTTCGCAGTAGTTCG

14、TCTTTAACA- 3。P2：Bab-2-F:5 -GACACAGGGAGGTAGTGACAAGA-3；Bab-2-R:5 -CCCAACTGCTCCTA TTAACCATTAC-3。 25 l 反應體系包括以下組成： ddH2O 15.85L ；10×buffer2.5L ； 25 mmol/L MgCl2 1.5 L； 2.5 mmol/L dNTP2 L ； P1 和 P2 上、下游引物 (20 pmol/ L)各 1 L ；基因組 DNA 1 L ；Ex Taq 酶 (1 u/L) 0.15 L 。PCR反應條件為95 5min ，95 30s，57 30s，72 40s，

15、 30 個循環(huán)， 72 7min。其中 P1 的退火溫度為 57， P2 內引物的退火溫度為55。所擴增的PCR產物經1%瓊脂糖凝膠電泳分析。（3）中的傳播媒介防治：全年貓科動物實施至少進行4 次給藥，次數應根據貓科動物生長狀態(tài)、流行病學等特征進行酌量增減。通過體內給藥和體表藥浴相結合。體內給藥：應選用伊維菌素、多拉菌素或阿維菌素等給藥，通過皮下注射方式或投喂方式。體表應選用溴氰菊酯類藥物，在夏秋季節(jié)時每隔1 月進行 1 次，從四月初開始，至十月下旬結束） 。周圍環(huán)境凈化和消滅蜱蟲：及時去除虎舍周邊雜草，壓縮蜱蟲等生存空間，對周邊雜草中使用化學藥物消滅蜱蟲卵或成蟲等。防治時間：使用阿維菌素拌料

16、給藥，及時清除體表蜱蟲感染，每隔2-3 月重復給藥一次；溴氰菊酯類藥物藥浴時應在夏秋季節(jié)時每隔1.5 月進行 1 次，從四月初開始，至十月上旬結束，如進行淋浴時應間隔15d 重復一次?？蛇m當調整防治時間。 以咪唑苯脲進行預防和治療虎巴貝斯蟲?。好磕?4 月開始肌肉注射1 次，7 月份重復1 次。中的防治效果評定： 新型抗寄生蟲藥物大范圍推廣應用以及常用抗巴貝斯蟲藥物在連續(xù)使用5 年以上的，須進行臨床藥效試驗或驗證，評價其驅蟲和殺蟲效力。4-5 份月考核防治密度（次數），而 6-8 月份評價防治效果。環(huán)境中媒介防治動物園區(qū)內高密植被或叢林應與畜舍保持不少于50m 的距離。 藥物防治： 定期進行噴

17、灑高效低毒的溴氰菊酯類藥物滅環(huán)境中的蜱蟲。濕地和森林是重點防治區(qū)域，以利凈化，加強動物園區(qū)深草叢的清除和砍伐，同時減少動物到深草叢或灌木林區(qū)活動次數和頻率。規(guī)程 7 中的測與考核：監(jiān)測時間：以貓科動物發(fā)生該病的流行病學規(guī)律為依據，確定監(jiān)測時間。監(jiān)測抽樣：考核抽樣時，樣本數不得低于群體數的35%。監(jiān)測指標及計算方法：（ 1）平均感染率 ( )infection rate貓科動物巴貝斯蟲平均感染率：陽性數抽檢總數×100（ 2）驅凈率 ()eliminating rate驅凈率：蟲體轉陰動物數試驗動物數×100（3）治愈率治愈率：蟲體轉陰動物數試驗動物數×1005試驗驗證的論述本規(guī)程的制定單位 2018 年 10 月以來，按本規(guī)程相關技術要求在我省各地動物園開展了貓科動物巴貝斯蟲病防控等工作，取得了較為豐富的經驗和成果，使得本規(guī)程技術內容的規(guī)范性、科學性和成