山東地方標準醫(yī)療污染物排放標準

1、醫(yī)療污染物排放標準Discharge standard of medical pollutants（山東省地方標準 DB37/ 596 2006）醫(yī)療污染物排放標準 Discharge standard of medical pollutants（山東省地方標準 DB37/ 596 2006）2006-01-04 發(fā)布2006-01-10實施山東省環(huán)境保護局山東省質量技術監(jiān)督局發(fā)布、八刖 言本標準的全部技術內容為強制性。為了貫徹中華人民共和國環(huán)境保護法、中華人民共和國水污染防治法中華人民共和國海洋環(huán)境保護法、中華人民共和國大氣污染防治法、中華人民共和國固體廢物污染環(huán)境防治法、中華人民共和國傳染

2、病防治法以及醫(yī)療廢物管理條例，促進醫(yī)療廢物處置系統(tǒng)的建設和管理，加強醫(yī) 療衛(wèi)生機構廢物的排放控制，保障人民身體健康，維護良好的生態(tài)環(huán)境。特制定本地方標準。本標準的附錄 A、附錄B、附錄C、附錄D為規(guī)范性附錄。本標準由山東省環(huán)境保護局提出。本標準委托濟南市環(huán)境工程設計院、濟南市環(huán)保局直屬分局起草。本標準主要起草人：張成志、高旭光、遲智香、張建國、周蓬、徐志浩本標準于2006年1月4日首次發(fā)布。本標準由山東省環(huán)境保護局負責解釋。醫(yī)療污染物排放標準1范圍本標準規(guī)定了山東省醫(yī)療衛(wèi)生機構醫(yī)療污水排放和醫(yī)療廢物處置（控制）的污染物限值。本標準適用于山東省醫(yī)療衛(wèi)生機構醫(yī)療污水排放和醫(yī)療廢物處置（控制）的管理

3、，也適用于獸醫(yī)院的 污水和醫(yī)療廢物的排放管理。2規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修 改單（不包括勘誤的內容）或修訂版均不適用于本標準，然而，鼓勵根據(jù)本標準達成協(xié)議的各方研究是否 可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標準。GB 3097海水水質標準GB 3838地表水環(huán)境質量標準GB 5085.3 危險廢物鑒別標準浸出毒性鑒別GB 15981消毒與滅菌效果的評價方法與標準GB 15982 醫(yī)院消毒衛(wèi)生標準GB 18466 醫(yī)療機構水污染物排放標準GB 18484危險廢物焚燒污染控制標準GB 185

4、98危險廢物填埋污染控制標準GB 18918 城鎮(zhèn)污水處理廠污染物排放標準GB 19218醫(yī)療廢物焚燒爐技術要求（試行）HJ/T 91地表水和污水監(jiān)測技術規(guī)范醫(yī)療廢物集中處置技術規(guī)范（試行）» （環(huán)發(fā) 2003206號）3術語及定義下列術語及定義適用于本標準。3.1醫(yī)療衛(wèi)生機構從事與醫(yī)療、預防、保健以及其他相關活動的，由各級衛(wèi)生行政主管部門負責管理或監(jiān)管的單位。3.2醫(yī)療污水醫(yī)療機構門診、病房、手術室、各類檢驗室、病理解剖室、放射室、洗衣房、太平間等處排出的診療、 生活及糞便污水。當醫(yī)療機構其他污水與上述污水混合排出時一律視為醫(yī)療機構污水。3.3醫(yī)療廢物醫(yī)療衛(wèi)生機構在醫(yī)療、預防、保健

5、以及其他相關活動中產生的具有直接或者間接感染性、毒性以及其 他危害性的廢物。具體分類名錄依照國家危險廢物名錄和國務院衛(wèi)生行政主管部門和環(huán)境保護行政主 管部門共同制定的醫(yī)療廢物分類目錄執(zhí)行。3.4醫(yī)療廢物集中處置中心具有環(huán)境保護行政主管部門頒發(fā)的醫(yī)療廢物處置資格的區(qū)域性醫(yī)療廢物集中處置單位。4技術內容4.1水污染物排放標準4.1.1 處理要求4.1.1.1 醫(yī)療衛(wèi)生機構應將傳染病房的污水與其他污水分別收集。傳染病醫(yī)院（包括設傳染病房的綜合性醫(yī)院）應設專用化糞池，進行預消毒處理。4.1.1.2 醫(yī)療衛(wèi)生機構的各種特殊排水，如含重金屬廢水、含油廢水、洗印廢水等應單獨收集，分 別采取不同的預處理措施后

6、排入醫(yī)療污水處理系統(tǒng)。4.1.1.3 同位素治療和診斷產生的放射性廢水，必須單獨收集處理。4.1.1.4 醫(yī)療污水不得排入 GB 3838中的I、II類水域和ID類水域的集中式生活飲用水地表水源地二級保護區(qū)、游泳區(qū)以及GB 3097中的一、二類海域。4.1.2排放要求4.1.2.1 根據(jù)水污染物的來源及性質，將水污染物控制項目分為必測項目和選測項目兩類。必測項 目為環(huán)境保護行政主管部門為了保護水環(huán)境，在日常監(jiān)測過程中必須監(jiān)測的水污染物控制項目，主要包括影響水環(huán)境和污水處理系統(tǒng)一般處理工藝可以去除的基本控制項目及部分一類污染物，共15項。選測項目為地方環(huán)境保護行政主管部門根據(jù)當?shù)蒯t(yī)療衛(wèi)生機構的污

7、染狀況及水環(huán)境保護狀況對污水排放可以選 擇監(jiān)測的控制項目，共計4項。4.1.2.2 必測項目必須執(zhí)行。選測項目由縣級及其以上人民政府環(huán)境保護行政主管部門根據(jù)當?shù)蒯t(yī) 療衛(wèi)生機構的具體情況和水環(huán)境質量要求選擇控制。4.1.3標準分級根據(jù)醫(yī)療衛(wèi)生機構排入地表水域環(huán)境功能和保護目標，將必測項目的常規(guī)污染物標準值分為一級標 準、二級標準、三級標準、四級標準。一類重金屬污染物和選測項目不分級。4.1.3.1 排入GB3838II類水域中除集中式生活飲用水地表水源地二級保護區(qū)及游泳區(qū)之外的區(qū)域， 執(zhí)行一級標準。4.1.3.2 排入GB383印、V類水域或排入GB3097中三類海域以及排入未設置城鎮(zhèn)污水處理廠

8、的城鎮(zhèn) 污水排放系統(tǒng)的醫(yī)療污水，執(zhí)行二級標準。4.1.3.3 排入設置城鎮(zhèn)污水處理廠的城鎮(zhèn)污水排放系統(tǒng)的醫(yī)療污水，執(zhí)行三級標準。4.1.3.4 床位小于20床以及不設床位的醫(yī)療衛(wèi)生機構產生的醫(yī)療污水，應當設消毒處理設施，執(zhí)行 四級標準。4.1.3.5 傳染病爆發(fā)期間，應當根據(jù)環(huán)境保護行政主管部門和醫(yī)療衛(wèi)生行政主管部門的要求執(zhí)行應急處置措施要求。4.1.4 標準值4.1.4.1 醫(yī)療衛(wèi)生機構水污染物排放，必測項目執(zhí)行表1和表2的規(guī)定。4.1.4.2 選測項目按表3的規(guī)定執(zhí)行。表2基本控制項目最高允許排放濃度（日均值）單位為毫克每升表1 一類污染物最高允許排放濃度（日均值）單位為毫克每升序號污染物

9、最高允許排放濃度1總汞0.052總神0.5序號基本控制項目一級標準二級標準三級標準四級標準1糞大腸菌群數(shù)（MPN/D5010050050002腸道致病菌不得檢出不得檢出3腸道病毒不得檢出不得檢出4結核桿菌不得檢出不得檢出5化學需氧量（CODr）40601206生化需氧量（BOD）1020307懸浮物（SS） a10(5)20608動植物油1.05159揮發(fā)酚0.10.50.510氨氮b5(8)15(20)25(30)11磷酸鹽（以P計）0.50.5二 1.0 士12余氯c0.50.5匚8二13pH69a括號內為用于沖洗地面及洗車用水水質指標。b括號外數(shù)值為水溫12C時的控制指標，括號內數(shù)值為水

10、溫V 12C時的控制指標。c消毒接觸池接觸時間A 1h,接觸池出口總余氯3mg/l 10mg/l。序號污 染物最高允許排放濃度1氟化物102氯化物2503甲醛類1.04總有機碳（TOC）30表3選測項目最高允許排放濃度（日均值）單位為毫克每升4.1.4.3污水處理過程中產生的廢氣按照GB18466執(zhí)行4.1.5 取樣與監(jiān)測4.1.5.1 水質取樣在污水處理站處理工藝末端排放口。其中一類污染物的取樣按照HJ/T 91執(zhí)行。4.1.5.2 檢測取樣頻率為至少每2h 一次，取24h混合樣，以日均值計。4.1.5.3 監(jiān)測分析方法按表4或國家環(huán)境保護總局認定的替代方法、等效方法執(zhí)行。表4水污染物監(jiān)測分

11、析方法序號控制項目測定萬法測定下限（mg/l）方法來源1總汞冷原子吸收分光光度法0.0001GB7468雙硫月宗分光光度法0.002GB74692總神乙基硫代氨基甲酸銀 分光光度法0.007GB74853糞大腸菌群數(shù)多管發(fā)酵法-附錄A4沙門氏菌-附錄B5志賀氏菌-附錄C6結核桿菌-附錄D7化學需氧量（COB）重銘酸鹽法30GB119148BOD稀釋與接種法2GB7488微生物傳感器快速測定法1HJ/T869懸浮物（SS）重量法-GB1190110動植物油紅外分光光度法0.1GB/T1648811揮發(fā)酚4-氨基安替比林分光光度去0.002GB749012總氮（以N計）堿性過硫酸鉀-消解紫外分 光

12、光度法0.05GB1189413磷酸鹽（以P計）鑰酸鉉分光光度法0.01GB1189314pH玻璃電極法-GB692015F離子選擇電極法0.05GB7484西素磺酸錯目視比色法-GB7482氟試劑分光光度法-GB748316氯化物硝酸銀滴定法-GB1189617甲醛乙酰丙酮分光光度法0.05GB1319718TOC非紅外吸收法0.5GB1318319余氯N,N-二乙基-1,4-苯二胺滴定法-GB11897N,N-二乙基-1,4-苯二胺分光光度法-GB118984.2醫(yī)療廢物控制標準4.2.1醫(yī)療衛(wèi)生機構不得將醫(yī)療廢物隨意棄置。4.2.2醫(yī)療衛(wèi)生機構應將醫(yī)療廢物與生活垃圾分開收集；醫(yī)療廢物應進

13、行無害化集中處置，生活垃圾按城 市生活垃圾處理原則進行處理。4.2.3醫(yī)療衛(wèi)生機構應對醫(yī)療廢物進行分類，并采用醫(yī)療廢物集中處置技術規(guī)范（試行）中要求的容 器、轉運器械進行包裝、轉運，包裝、轉運期間應注意防護措施。4.2.4醫(yī)療衛(wèi)生機構應設置醫(yī)療廢物的暫存場所。具有100張床位以上的醫(yī)療衛(wèi)生機構應建立專門的醫(yī)療廢物暫存庫房，暫存庫房必須滿足醫(yī)療廢物集中處置技術規(guī)范（試行）中關于暫存庫房的設計要求； 具有100張床位以下的醫(yī)療衛(wèi)生機構及門診、部、所應設立專門的醫(yī)療廢物暫存場所，并滿足醫(yī)療廢物 集中處置技術規(guī)范（試行）中暫存場所的要求。4.2.5醫(yī)療廢物可以根據(jù)當?shù)厍闆r采用表5的處置方法進行處置。表

14、5醫(yī)療廢物處置方法序號醫(yī)療廢物種類醫(yī)療廢物處置方法備注1病理性廢物（包括人體組織、死胎、器官、肢體和動物尸體、血液、體液）火化或焚燒按國家有關法律法規(guī)處置2感染性廢物（包括傳染病人手術或尸 解后的廢棄物，如污染的材料和儀器； 來自傳染病房的廢棄物，如排泄物、 手術或感染傷口的敷料、嚴重污染的 衣物；傳染病人血透析中廣生的廢棄 物；實驗室感染的動物；傳染病人或 動物接觸過的任何其他設備和材料； 實驗室所用的菌落及病原株培養(yǎng)基和 保菌液；使用過的一次性注射器、輸 液器、輸血器等廢棄物）焚燒或消毒3鋒利物（銳器）（包括針頭、手術刀、 解剖刀、司官、手術鋸、玻璃制品等 易對人體造成損傷的廢物）焚燒4藥

15、物性廢物（包括過期、被淘汰、壓 碎或污染的藥品、疫苗、血清）焚燒5遺傳病毒性廢棄物（包括已明確的抑 制細胞的藥物，化學或放射治療病人 的嘔吐物、尿或糞便。如苯、環(huán)抱霉 素、環(huán)磷酰胺等）焚燒對環(huán)磷酰胺、異環(huán)磷酰胺、 硫酸長春新堿等可米用化學 降解法或封存或使之自動失 效6化學性廢棄物（包括在診斷、試驗、 清潔、管理、消毒過程中產生的，具 有毒性、腐蝕性、易燃性、反應性或 遺傳毒性的物質。如甲醛、攝影用劑、 有機化合物等）焚燒或化學處理對于一般的化學廢棄物，如 糖、氨基酸和特定的鹽類可 按城市生活垃圾進行處置或 排入下水道。7低放射性廢物（包括診斷或治療用的 棉簽、注射器、輸液器等）焚燒8污水處理

16、過程中產生的污泥焚燒4.2.6 醫(yī)療廢物進行無害化處置的技術要求4.2.6.1 采用高溫熱處理技術要求按GB19218執(zhí)行。4.2.6.2 高溫蒸汽滅菌按GB15982執(zhí)行4.2.6.3 其他處理技術采用微波處理法、化學消毒法、電熱去活技術（ EDT等其它經(jīng)環(huán)境保護行政主管部門及衛(wèi)生行政主管部 門認可的醫(yī)療廢物處理技術時，污染物的排放應當達到環(huán)境保護行政主管部門及衛(wèi)生行政主管部門的要 求。4.2.7無害化處置后的醫(yī)療廢物應達到的排放標準4.2.7.1 采用焚燒法處置醫(yī)療廢物，其焚燒爐排放氣體的排放限值不應高于GB18484規(guī)定的限值。檢測方法按GB18484執(zhí)行。4.2.7.2 采用焚燒法處置

17、醫(yī)療廢物，其焚燒殘留物中的含菌量應為零。4.2.7.3 醫(yī)療廢物焚燒過程中除塵設備收集到的飛灰必須密閉收集貯存，并按照GB18598固化填埋處理；焚燒產生的爐渣可以送生活垃圾填埋場填埋處理；其他煙氣凈化裝置產生的固體廢物按GB 5085.3進行鑒別，并確定是否屬于危險廢物，如屬于危險廢物，按危險廢物處置，否則可以送生活垃圾填埋場填埋處理，無法進行鑒別實驗的，按危險廢物處置。4.2.7.4 采用高溫蒸汽滅菌法處置醫(yī)療廢物產生的固體廢物將其粉碎后按城市生活垃圾進行處置。4.2.7.5 采用高溫蒸汽滅菌法處置醫(yī)療廢物，生物指示劑應選擇耐熱的嗜熱性脂肪桿菌芽孑包（Bacillusstearotherm

18、ophilus spores），檢測方法按 GB 15981 執(zhí)行。4.2.7.6 每批醫(yī)療廢物進行高溫蒸汽滅菌處置需用化學檢測方法對滅菌效果進行檢測，可采用化學指示 管（卡）檢測方法或化學指示膠帶檢測法，檢測需將化學指示管（卡）放入滅菌室內滅菌效果最難保證的空間位置，或將化學指示膠帶粘貼于每一待滅菌物品包外，經(jīng)一個滅菌周期后，觀察所放置的指示管（卡）或膠帶的性狀或顏色，如果均變至規(guī)定的條件，判為滅菌合格；若未達到規(guī)定的條件，則滅菌過程不合格。5標準的實施與監(jiān)督本標準由縣級以上人民政府環(huán)境保護行政主管部門負責監(jiān)督實施。附錄 A（規(guī)范性附錄）醫(yī)療污水中糞大腸菌群的檢驗方法A.1A.1.1A.1.

19、2A.1.3A.1.4A.1.5A.1.6A.1.7A.1.8A.1.9A.2A.2.1A.2.1.1 蛋白月東 豬膽鹽 乳糖儀器和設備高壓蒸汽滅菌器干燥滅菌箱培養(yǎng)箱：37 C恒溫水浴箱電爐天平滅菌平皿滅菌刻度吸管酒精燈培養(yǎng)基和試劑乳糖膽鹽培養(yǎng)液成分20g（或牛、羊膽鹽）5g5g2.5mL0.4 %漠甲酚紫水溶液蒸儲水1000mLA.2.1.2 制法將蛋白腺、豬膽鹽及乳糖溶解于1000mL蒸儲水中，調整pH到7.4 ,加入指示劑，充分混勻，分裝于內有倒管的試管中。115C下滅菌 20min。貯存于冷暗處備用。A.2.2A.2.2.1蛋白月東豬膽鹽乳糖三倍濃度乳糖膽鹽培養(yǎng)液成分60g（或牛、羊膽

20、鹽）15g15g7.5mL0.4 %漠甲酚紫水溶液蒸儲水1000mLA.2.2.2 制法制法同附錄A.2.1.2。A.2.3伊紅美蘭培養(yǎng)基（EMB培養(yǎng)基）A.2.3.1 成分蛋白月東乳糖磷酸氫二鉀瓊脂2%伊紅水溶液0.5 %美藍水溶液蒸儲水A.2.3.2 制法將瓊脂加到900mL蒸儲水中，加熱溶解，然后加入磷酸氫二鉀和蛋白月東，混勻使溶解，再加入蒸儲水補足至1000ml,調整pH至7.27.4。趁熱用脫脂棉和砂布過濾，再加入乳糖，混勻，定量分裝于燒瓶內，115C火菌20min。作為儲備培養(yǎng)基貯存于冷暗處備用。10g10g2g20g20mL13mL1000mL臨用時，加熱融化儲備培養(yǎng)基，待冷至6

21、0 C左右，根據(jù)燒瓶內培養(yǎng)基的容量，加入一定量的已滅菌的2%伊紅水溶液和0.5 %美藍水溶液，充分搖勻（防止產生氣泡）。傾注平皿備用。A.2.4 乳糖蛋白月東培養(yǎng)液A. 2.4.1 成分蛋白月東10g牛肉膏3g乳糖5g氯化鈉5g1.6%漠甲酚紫乙醇溶液1mL蒸儲水1000mLA. 2.4.2 制法將蛋白月東、牛肉膏、乳糖及氯化鈉加熱溶解于1000mL蒸儲水中，調整pH到7.27.4，加入1.6%漠甲酚紫乙醇溶液1mL充分混勻，分裝于內有倒管的試管中。115C下滅菌20min。貯存于冷暗處備用。A. 2.5 革蘭氏染色液A.2.5.1結晶紫染色液結晶紫1g95%乙醇溶液20mL1%草酸鉉水溶液1

22、000mL將結晶紫溶于乙醇中，然后與草酸鉉水溶液混合。A.2.5.2 革蘭氏碘液碘1g碘化鉀2g蒸儲水300mL將碘與碘化鉀混合，加入蒸儲水少許，充分搖勻，待完全溶解，再加入蒸儲水至300ml.A.2.5.3 脫色液95%乙醇A.2.5.4 沙黃復染液沙黃1g95%乙醇2g蒸儲水90mL將沙黃溶于95%乙醇中，然后用蒸儲水稀釋。A.2.6 染色法染色的基本步驟為：a）涂片：在載玻片上滴加一滴生理鹽水，用滅菌的接種環(huán)取菌落少許，與生理鹽水混勻，涂布成薄膜；b）干燥：在室溫中使自然干燥；c） 固定：將涂片迅速通過火焰23次，以載玻片反面接觸皮膚，熱而不燙為度；d）染色：滴加結晶紫染色液，染色 1m

23、in,水洗；e）媒染：滴加革蘭氏碘液，作用 1min,水洗；f）脫色：滴加95%乙醇脫色，約 30s,水洗；g） 復染：滴加復染液，復染 1min,水洗。革蘭氏陽性菌染色后呈紫色，革蘭氏陰性菌染色后呈紅色。亦 可用1: 10稀釋的石炭酸復紅染色液作復染劑，復染時間為10s。A. 3 檢驗程序檢驗程序見圖A.1 o樣品處理：確定樣品接種量A 1污水中蓑大腸菌程檢驗程序4A. 4 操作步驟 A.4.1樣品準備污水樣品應至少取 200mL使用前應充分混勻。若樣品為經(jīng)過氯消毒的污水，應在采樣后立即用5%硫代硫酸鈉溶液充分中和余氯。 根據(jù)預計的污水樣品中糞大腸菌群數(shù)確定污水樣品接種量。糞大腸菌群數(shù)量相對

24、較少的接種量一般為 10mL 1mL 0.1mL。糞大腸菌群數(shù)較多時接種量為1mL 0.1mL、0.01mL 或 0.1mL、0.01mL、0.001mL 等。接種量少于1mL時，水樣應制成稀釋樣品后供發(fā)酵試驗使用。接種量為0.1mL、0.01mL時，取稀釋比分別為1:10、1:100。其它接種量的稀釋比依此類推。 1:10稀釋樣品的制作方法為：吸取1mL水樣，注入到盛有 9mL滅菌水的試管中，混勻，制成 1:10稀釋樣品。因此，取1mL1:10稀釋樣品，等于取 0.1mL污水樣品。其它稀釋比的稀釋樣品同法制作。A.4.2 發(fā)酵試驗 將樣品接種于裝有乳糖膽鹽培養(yǎng)液的試管（內有小倒管）中， 44

25、C培養(yǎng)24h。樣品接種體積以及管內乳糖膽鹽培養(yǎng)液的濃度與體積根據(jù)以下條件確定：取三個接種量、每個接種量的樣品分別接種于5個試管內，共需15個試管。試管內乳糖膽鹽培養(yǎng)液的濃度與體積應根據(jù)接種量確定。若接種量為10mL,吸取10mL樣品接種于裝有5mL三倍濃度乳糖膽鹽培養(yǎng)液的試管內；若接種量為 1mL時，吸取1mL樣品接種于裝有 10mL普通濃度乳糖膽鹽培養(yǎng)液的試管內；若接種量少于1mL時，吸取1mL稀釋樣品接種于裝有 10mL普通濃度乳糖膽鹽培養(yǎng)液的試管內。A.4.3 平板分離大腸桿菌分解乳糖產酸時培養(yǎng)液變色、產氣時小倒管內出現(xiàn)氣泡。經(jīng) 24h培養(yǎng)后，將產酸的試管內培養(yǎng)液分別劃線接種于 EMB培

26、養(yǎng)基上。置于 37C培養(yǎng)箱中，培養(yǎng) 18h24h。A.4.4 鑒定挑選可疑糞大腸菌群菌落，進行革蘭氏染色和鏡檢?？梢删溆校篴）深紫黑色，具有金屬光澤的菌落；b）紫黑色，不帶或略帶金屑光澤的菌落；c）淡紫紅色，中心色較深的菌落。上述涂片鏡檢的菌落如為革蘭氏陰性無芽抱桿菌，則挑取上述典型菌落13個接種于盛有5mL乳糖蛋白彌培養(yǎng)液倒管和倒管的試管內，置于44C培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24h。產酸產氣試管為糞大腸菌群陽性管。A.5 計數(shù)根據(jù)證實有糞大腸菌群存在的陽性管數(shù)，查表A.1可得100mL污水中糞大腸菌群 MPN值。由于表A.1是按一定的三個10倍濃度差接種量設計的（接種量為10mL 1mL和0.1mL

27、）,當采用其他三個10倍濃度差接種量時，需要修正表內MPN值，具體方法如下：表內所列污水最大接種量增加10倍時表內MPN值相應降低10倍；污水最大接種量減少 10倍時表內MPN值相應增加10倍。如污水接種量改為 1mL 0.1mL和0.01mL時，表A內MPN值相應增加10倍。其它的 三個10倍濃度差接種量的 MPN值相應類推。由于表A.1內MPN值的單位為每100mL污水樣品中MPN值，而污水以1L為報告單位，因此需將查表 A.1 得到的MPN值乘上10,換算成1L污水樣品中的 MPN值。表A.1 污水中糞大腸菌群最可能數(shù)（ MPN檢索表（污水樣品接種量為 5份10ml水樣，5份1ml水樣和

28、0.1ml水樣）陽性管數(shù)每陽性管數(shù)每陽性管數(shù)每接種接種接種100ml接種接種接種100ml接種接種接種100ml100ml10ml0.1ml 水100ml10ml0.1ml 水100ml10ml0.1ml 水水樣水樣樣水樣中水樣水樣樣水樣中水樣水樣樣水樣中MPNMPNMPN0000200540013001220174011700242029402210035203124032500472041440430005920516405360102210741017011421194112101252121241226表A.1 （續(xù)）陽性管數(shù)每陽性管數(shù)每陽性管數(shù)每接種接種接種100ml接種接種接種10

29、0ml接種接種接種100ml100ml10ml0.1ml 水100ml10ml0.1ml 水100ml10ml0.1ml 水水樣水樣樣水樣中水樣水樣樣水樣中水樣水樣樣水樣中MPNMPNmpn|013721314413310149214174143601511215194154202042209420220216221124212602272221442232023922317423380241122419424440251322522425500306230124302703172311443133032923217432390331123320433450341323422434520351

30、523525435590408240154403404192411744140042112422044247043132432344354044152442544462045172452844569050925017450410511125120451480521325223452560531525326453640541725429454720551925532455811002300850023101430111501311026302135024310383031650358104103042050476105123052350595110431011510331116311145114

31、611283121751263113103132051384表A.1 （續(xù)）陽性管數(shù)每陽性管數(shù)每陽性管數(shù)每接種100ml 水樣接種10ml水樣接種0.1ml 水樣100ml水樣中MPN接種100ml 水樣接種10ml水樣接種0.1ml 水樣100ml水樣中MPN接種100ml 水樣接種10ml水樣接種0.1ml 水樣100ml水樣中MPN1141231423514110115143152751513012063201452049121832117521701221032220522941231232324523120124153242752415012517325315251801308330

32、1753079131103312153111013212332245321401331533328533180134173343253421013519335365352501401134021540130141133412454117014215342285422201431734332543280144193443654435014522345405454301501335025550240151153512955135015217352325525401531935337553920154223544155416001552435545555>1600附錄 B（規(guī)范性附錄）醫(yī)療污水

33、中沙門氏菌的檢驗B.1 儀器和設備B.1.1高壓蒸汽滅菌器B. 1.2干燥滅菌箱B.1.3 培養(yǎng)箱B. 1.4恒溫水浴箱B.1.5 電爐B.1.6 天平B.1.7滅菌平皿B. 1.8 滅菌刻度吸管B.1.9 酒精燈B.2 培養(yǎng)基和試劑B.2.1亞硒酸鹽增菌液（SF增菌液）B. 2.1.1 成分胰蛋白腺（或多價腺）10g磷酸氫二鈉（Na2HPO3）16g磷酸二氫鈉（NaH2PO3）2.5g乳糖4g亞硒酸氫鈉4g蒸儲水1000mLB. 2.1.2 制法除亞硒酸氫鈉外，將以上各成分放入蒸儲水中，加熱溶化。再加入亞硒酸氫鈉，待完全溶解后，調整pH到7.07.1，分裝于三角燒杯內。121C下滅菌 15m

34、in備用。B.2.2二倍濃度亞硒酸鹽增菌液（二倍濃度SF增菌液）B. 2.2.1 成分除蒸儲水改為500mL外，其它成分同附錄B.2.1.1。B. 2.2.2 制法制法同附錄B.2.1.2。B.2.3 SS培養(yǎng)基B.2.3.1基礎培養(yǎng)基B. 2.3.1.1 成分牛肉膏5g示月東5g三號膽鹽3.5g瓊脂17g蒸儲水1000mLB. 2.3.1.2 制法將牛肉膏、示腺和膽鹽溶解于400mL蒸儲水中。將瓊脂加到600mL蒸儲水中，煮沸使其溶解。再將二者混合，121C下滅菌15min,保存?zhèn)溆?。B.2.3.2完成培養(yǎng)基B. 2.3.2.1 成分基礎培養(yǎng)基1000mL乳糖10g檸檬酸鈉8.5g硫代硫酸鈉

35、10%寧檬酸鐵溶液19仲性紅溶液0.1%煌綠溶液B.2.3.2.2 制法加熱溶化基礎培養(yǎng)基，按比例加入除中性紅和煌綠溶液以外的各成分，充分混合均勻，調整 加入中性紅和煌綠溶液，傾注平板。制好的培養(yǎng)基宜當日使用，或保存于冰箱內于18h內使用?；途G溶液配好后應在B.2.4亞硫酸鉗瓊脂培養(yǎng)基（BS培 養(yǎng)基）B.2.4.1B.2.4.1.1蛋白月東牛肉膏氯化鈉瓊脂蒸儲水B.2.4.1.2加熱溶解各成分，按每份B.2.4.2亞硫酸鉗貯備液B.2.4.2.1 成分檸檬酸鉗鉉亞硫酸鈉磷酸氯二鈉葡萄糖蒸儲水B.2.4.2.2 制法將檸檬酸鉗鉉溶解于入磷酸氯二鈉攪拌至溶解。冷卻后，加入剩余的8.5g10mL2.

36、5mL0.33mLpH 到 7.0 ,10天以內使用。亞硫酸鉗瓊脂培養(yǎng)基（BS培妾宜基礎培養(yǎng)基成分10g5g5g20g1000mL制法100mL的量分裝于 250mL三角瓶中，121C下滅菌 20min備用。2g20g10g10g200mL50mL沸水中，同時將壓硫酸鈉溶解于100mL沸水中，混合兩液并煮沸 3min,趁熱加50mL葡萄糖水溶液，貯存于冰箱中。B.2.4.3 檸檬酸鐵煌綠貯備液B.2.4.3.1 成分檸檬酸鐵2g煌綠（1 %水溶液）25mL蒸儲水200mLB.2.4.3.2 制法將上述成分溶解于水中，盛于已滅菌的玻璃瓶內，貯存于冰箱。B.2.4.4完成培養(yǎng)基B.2.4.4.1

37、成分基礎培養(yǎng)基100mL亞硫酸鉗貯備液20mL檸檬酸鐵煌綠貯備液4.5mLB.2.4.4.2 制法加熱融化基礎培養(yǎng)基并冷卻至50C，同時分別加熱亞硫酸鉗貯備液和檸檬酸鐵煌綠貯備液至50Co在無菌操作下將后者加入到前者去，充分混合，無菌傾入已滅菌的培養(yǎng)皿中。B.2.5三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基（TSI培 養(yǎng)基）B.2.5.1 成分蛋白月東20g牛肉膏5g乳糖10g蔗糖10g葡萄糖1g氯化鈉5g硫酸亞鐵俊0.2g硫代硫酸鈉0.2g瓊脂12g酚紅0.025g蒸儲水1000mLB. 2.5.2 制法將除瓊脂和酚紅以外的各成分溶解于蒸儲水中，調pH到7.4。加入瓊脂，加熱煮沸，再加入0.2%酚紅水溶液12.5mL

38、,搖勻。分裝試管，裝量宜多些，以便得到較高的底層。121C下滅菌15min。放置高層斜面?zhèn)溆谩.2.6沙門氏菌診斷血清B.3 檢驗程序檢驗程序見圖B.1 oa b. 1污水中沙門氏菌檢驗程序/B.4 操作步驟B.4.1樣品處理和增菌取200mL污水，用滅菌濾膜進行抽濾。用100mL二倍濃度SF增菌液把濾膜上截留的雜質洗脫到滅菌三角燒瓶內，充公搖勻，置于37 C恒溫培養(yǎng)箱，增菌培養(yǎng)1224h。若樣品為經(jīng)過氯消毒的污水，應在采樣后立即用5%硫代硫酸鈉溶液充分中和余氯。B.4.2平板分離取上述增菌培養(yǎng)液，分別接種于SS培養(yǎng)基平板和BS培養(yǎng)基平板，置于 37C培養(yǎng)箱中，培養(yǎng) 24 h48h。觀察各平

39、板上生長的菌落形態(tài)。挑取在SS培養(yǎng)基平板上呈無色透明或中間有黑心，直徑12mm的菌落；挑取在BS培養(yǎng)基平板上呈黑色的菌落或灰綠色的可疑腸道病原菌菌落。每個平板最少挑取5個菌落，接種于 TSI培養(yǎng)基中，置于37 C培養(yǎng)箱中，培養(yǎng) 18h24h。B.4.3 鑒定B.4.3.1血清學試驗在TSI培養(yǎng)基中，如不發(fā)酵乳糖，發(fā)酵葡萄糖產酸產氣或只產酸不產氣，一般產生硫化氫，有動力者，先與沙門氏A-F群。多價血清作玻璃片凝集，凡與多價O血清凝集者，再與。因子血清凝集，以確定所屬群別，然后用H因子血清，確定血清型。雙向菌株應證實兩相的H抗原，有Vi抗原的菌型（傷寒和丙型副傷寒沙門氏菌）應用Vi因子血清檢驗。B

40、.4.3.2 生化試驗應進行葡萄糖、甘露醇、麥芽糖、乳糖、蔗糖、靛基質、硫化氫、動力、尿素試驗。沙門氏菌屬中除傷寒沙門氏菌和雞沙門氏菌不產氣外，通過發(fā)酵葡萄糖、產氣、均發(fā)酵甘露醇和麥芽糖（但豬沙門氏菌、雛沙門氏菌不發(fā)酵麥芽糖），不分解乳糖、蔗糖，尿素酶和靛基質為陰性，通常產生硫化氫。除雞、雛沙門氏 菌和傷寒沙門氏菌的 O型菌株無動力外，通常均有動力。如遇多價。血清不凝集而一般生化反應符合上述情況時，可加做側金盞花醇、水楊素和割化鉀試驗，沙門 氏菌均為陰性。B.5 檢驗結果報告根據(jù)檢驗結果，報告一定體積的樣品中存在或不存在沙門氏菌。附錄 C（規(guī)范性附錄）醫(yī)療污水中志賀氏菌的檢驗方法C.1儀器和設

41、備C.1.1高壓蒸汽滅菌器C. 1.2干燥滅菌箱C.1.3 培養(yǎng)箱C. 1.4恒溫水浴箱C.1.5 電爐C.1.6 天平C.1.7滅菌平皿C. 1.8 滅菌刻度吸管C.1.9 酒精燈C.2培養(yǎng)基和培養(yǎng)液C. 2.1革蘭氏陰性增菌液（GN增菌液）C. 2.1.1 成分胰蛋白腺（或多價腺）20g葡萄糖1g甘露醇2g枸椽酸鈉5g去氧膽酸鈉0.5g磷酸氫二鉀16g磷酸二氫鉀2.5g氯化鈉5g蒸儲水1000mLC. 2.1.2 制法將以上各成分加入蒸儲水中溶化，調整pH至7.0，煮沸過濾，115C下滅菌 20min。貯存于冷暗處備用。C. 2.2二倍濃度革蘭氏陰性增菌液（二倍濃度GN增菌液）C. 2.2

42、.1 成分除蒸儲水改為500mL外，其它成分同附錄C2.1.1 oC. 2.2.2 制法制法同附錄 C.2.1.2。C.2.3 SS培養(yǎng)基同附錄B.2.3 。C.2.4 伊紅美藍瓊脂培養(yǎng)基（EMB培 ）同附錄A.2.3 。C.2.5三糖鐵瓊脂（TSI培 ）同附錄B.2.5 。C.2.6 志賀氏菌診斷血清C. 3 檢驗程序檢驗程序見圖C.1 o圈C1污水史袤襄氐圓椎驗程序5C. 4 操作步驟C.4.1 樣品處理和增菌培養(yǎng)取200mL污水，用滅菌濾膜進行抽濾。若樣品為經(jīng)過氯消毒的污水，應在采樣后立即用5%硫代硫酸鈉溶液充分中和余氯。用 100mL二倍濃度GN增菌液把濾膜上截留的雜質洗脫到已滅菌的三

43、角燒瓶內，搖勻， 置于37C恒溫培養(yǎng)箱，增菌培養(yǎng) 68h。C.4.2 分離取上述增菌培養(yǎng)液，分別接種SS培養(yǎng)基平板和EMB培養(yǎng)基平板，置于 37C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。挑取在SS培養(yǎng)基平板和 EMB培養(yǎng)基平板上呈無色透明，直徑11.5mL的可疑腸道病原菌菌落。每個平板最少挑取5個菌落，接種于 TSI培養(yǎng)基，置于37C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1824h。挑取在TSI中，葡萄糖產 酸不產氣，無動力，不產生硫化氫，上層斜面乳糖不分解的菌株，可做血清學和生化試驗。C.4.3 鑒定C.4.3.1 血清學試驗志賀氏菌屬分為四個群，先與多價血清作玻璃片凝集試驗，如為陽性，再分別與A、8 G D群血清凝集,并進一步與分型血

44、清做玻璃片凝集，最后確定其血清型。C.4.3.2 生化試驗應進行葡萄糖、甘露醇、麥芽糖、乳糖、蔗糖、靛基質、硫化氫、動力、尿素試驗。志賀氏菌屬能分解葡萄糖，但不產氣（福氏志賀氏菌6型有時產生少量氣體），一般不能分解乳糖和蔗糖，宋內氏志賀氏菌對乳 糖和蔗糖遲緩發(fā)酵產酸。志賀氏菌屬均不產生硫化氫，不分解尿素，無動力。對甘露醇、麥芽糖的發(fā)酵及 靛基質的產生，則因菌株不同而異。如遇多價血清玻璃片凝集試驗為陰性，而生化反應符合上述情況時，可加做肌醇、水楊酸、V-P、椽酸鹽、?；浀仍囼?。志賀氏菌屬均為陰性反應。C. 5 檢驗結果報告根據(jù)檢驗結果，報告一定體積的樣品中存在或不存在志賀氏菌。附錄 D（規(guī)范性附錄）醫(yī)療污水中結核桿菌的檢驗方法D. 1 儀器和設備D.1.1 電爐D. 1.2恒溫水浴箱D.1.3高壓蒸汽滅