石河子大學國家大學生創(chuàng)新性計劃項目中期檢查表

1、石河子大學“國家大學生創(chuàng)新性實驗計劃”項目中期檢查表項目名稱高抗氧化活性沙棗多酚的篩選及穩(wěn)定性研究項目編號091075910項目成員李曉燕 馬曉麗 張建軍 夏吉飛 吳春燕指導教師劉紅 教授成果形式研究報告或論文立項時間2009年 11 月 31 日 2010年 12月 31 日項目進展情況：自項目批準以來，該項目組成員按照項目任務(wù)書的計劃安排，進行了明確的分工，各項工作一直有序進行。一、第一階段：2009.122010.1進一步豐富文獻資料，進行系統(tǒng)分析，詳細制定項目研究方案。二、第二階段：2010.22010.61. 多酚標準曲線的繪制。2、不同生長期沙棗果葉中沙棗多酚含量的測定及消長規(guī)律研

2、究。三、第三階段：2010.62010.81、對沙棗多酚對羥自由基能力的研究。2、對D-301大孔樹脂進行預處理以及靜態(tài)吸附實驗的研究。研究成果概述:一、多酚標準曲線的繪制1、測定波長的選擇取沒食子酸溶液和沙棗提取液的稀釋液各1.0 ml， 分別與各顯色試劑混合均勻并定容至25 ml，室溫避光放置，以1.0 ml蒸餾水代替樣品作空白，在440860nm波長范圍內(nèi)進行掃描，得到?jīng)]食子酸和沙棗提取液經(jīng)顯色反應后的吸收光譜，選擇測定的最佳波長為765nm。2、顯色體系中各試劑的用量Folin-Ciocalteau試劑與10%Na2CO3比例準確移取1ml沒食子酸對照品溶液，加入0.50 ml Fol

3、in-Ciocalteau試劑，加入不同體積10% Na2CO3 溶液，經(jīng)顯色反應后加水定容至25ml，放置反應一段時間后，于分光光度計上測定吸光值。表 1 10% Na2CO3體積（mL）1.002.003.004.005.00吸光度值0.1870.2330.2960.3230.334結(jié)果表明，F(xiàn)olin-Ciocalteau試劑與10%Na2CO3比例為1：10。 Folin-Ciocalteau試劑用量取1.00ml沒食子酸對照品溶液，加入0. 503.50ml Folin-Ciocalteau試劑，加入相同體積的10%Na2CO3 溶液，經(jīng)顯色反應后加水定容至25ml，放置反應一段時間

4、后，測定吸光值。表 2Folin-Ciocalteau用量0.501.001.502.002.503.003.50吸光度值0.2720.1860.1850.1860.1920.1770.124當Folin-Ciocalteau試劑用量為0.50ml時，吸光度值最大。3、顯色時間將各比色試劑混合均勻后，室溫避光放置，每隔30min時間測定其吸光值，確定比色體系顯色反應完全所需要的時間。表 3顯色時間（min）306090120150吸光度值0.4950.5030.5040.5050.505隨著時間的增加，吸光度值增加，當反應時間為60min時，吸光度值增加趨勢最大，隨后保持平穩(wěn)。因此選擇60mi

5、n作為反應時間。4、多酚標準曲線的繪制準確稱取真空干燥（60干燥4h）至恒重的沒食子酸標準品適量置于100mL棕色容量瓶中，用水溶解并定容至100mL，搖勻，作為對照品溶液。將配制好的沒食子酸溶液配成濃度為4.43g·mL-1、8.86g·mL-1、17.72g·mL-1、35.44g·mL-1、70.88g·mL-1、88.60g·mL-1的溶液。分別取上述不同濃度溶液2mL加到25mL容量瓶中，然后依次加入2mL蒸餾水，0.5mL 2mol/L福林酚試劑，5mL 10%Na2CO3溶液，用水定容至25mL。室溫下反應1h，在765

6、nm下測定吸光度。由吸光度對濃度進行回歸得方程：A=0.0091c-0.014（R=0.9996），曲線在4.43g·mL-188.60g·mL-1范圍內(nèi)對照品沒食子酸的量與吸光度值呈良好的線性關(guān)系。表 4 不同濃度標準溶液的吸光度沒食子酸濃度（g·mL-1）4.438.8617.7235.4470.8888.60吸光度值0.0150.0630.1570.3160.6270.785 二、不同生長期沙棗葉中沙棗多酚含量的測定及消長規(guī)律研究在前期的研究基礎(chǔ)上，確定超聲輔助提取沙棗多酚的最佳提取方案:固液比為1:12， 溶劑為70%的乙醇溶液，超聲法提取3次（溫度為25

7、），每次20min。表5 不同生長期沙棗葉中多酚含量數(shù)據(jù)表時間/月0.511.522.533.5含量（mg/ml）0.0450.2490.420.6290.7250.7110.705時間/月44.555.566.57含量（mg/ml）0.6790.6160.5870.5720.4210.2820.273由上圖可知，沙棗葉中多酚的含量，隨生長期的不同而不同，整體趨勢為先增大后減小。葉子6月份達到最大值。三、沙棗多酚對羥自由基能力的研究在25ml容量瓶中依次加入1.0mL，7.5mmoL/mL鄰二氮菲溶液，5.0mL PBS(PH=7.4),1.0mLFeSO4溶液，1.0mL，0.1%H2O2,

8、蒸餾水定容至25mL作損傷管。取7.5mmoL/mL鄰二氮菲溶液，5.0mL PBS, 1.0mLFeSO4溶液定容至25mL作未損傷管。取7.5mmoL/mL鄰二氮菲溶液，5.0mL PBS，1.0mLFeSO4溶液，1mL提取液，1mL0.1%H2O2定容至25mL作加藥管。根據(jù)下面公式計算提取液對羥自由基的清除率。 清除率=（A藥-A損傷）/A未損傷-A損傷表 6不同生長期沙棗葉中多酚清除羥自由基能力數(shù)據(jù)表時間/月0.511.522.5清除率0.0440.3770.6540.8800.938時間/月33.544.55清除率0.9750.9560.9200.8870.785表7 不同生長期

9、沙棗果中多酚清除羥自由基能力數(shù)據(jù)表時間/月7891011清除率0.5940.8840.9500.9260.771實驗結(jié)果表明，隨著生長期的延長，沙棗葉和果中多酚清除羥自由基的能力先增強后減弱。四、大孔樹脂的分離純化1、大孔吸附樹脂的預處理（1）取大孔吸附樹脂，用95%乙醇浸泡24h，然后濕法裝柱。（2）用95%乙醇沖洗層析柱（流速2BV/h，BV為樹脂體積數(shù)，下同），至流出液加2倍蒸餾水后不產(chǎn)生渾濁為止，再用大量蒸餾水洗至流出液澄清。（3）繼續(xù)用23BV的5%鹽酸溶液洗層析柱（流速46BV/h），并浸泡23h，再用蒸餾水以同樣的流速洗至中性。（4）用23BV的5%氫氧化鈉溶液洗層析柱（流速46

10、BV/h），浸泡23h后，再用蒸餾水以同樣的流速洗至中性，用95%乙醇浸泡備用。2、靜態(tài)吸附實驗準確稱取經(jīng)預處理的樹脂2.00克，分別置于250mL具塞錐形瓶中，加入50mL一定濃度的沙棗多酚提取液，置于20搖床，120r/min振蕩吸附24h，測定溶液中沙棗多酚的濃度，按下式計算大孔樹脂的吸附量及吸附率： Q吸附量(c1c2)V/W Q吸附率c1c2/ c1式中：c1吸附前溶液濃度（mg·mL-1）c2吸附后溶液濃度（mg·mL-1）V溶液體積（ml）W樹脂重量（g）將吸附后的樹脂過濾，并用50mL蒸餾水沖洗樹脂，將其置于250mL的具塞錐形瓶中，加入50mL 60%的乙

11、醇溶液，置于20搖床，120r/min振蕩解吸24h，測定解吸液中沙棗多酚的濃度，按下式計算大孔樹脂的解吸量及解吸率：Q解吸量cV/WQ解吸率Q解吸量/ Q吸附量×100%式中：c解吸液濃度（mg·mL-1）V解吸液體積（ml）W樹脂重量（g）下一階段工作計劃：1、其它品種不同生長期沙棗多酚抗氧化活性的研究2、對D-301大孔樹脂及硅膠分離純化沙棗多酚優(yōu)化條件的研究。3、進行高抗氧化活性沙棗多酚穩(wěn)定性的研究4、整理數(shù)據(jù)，對前期所得數(shù)據(jù)進行處理，并撰寫研究論文和結(jié)題報告。經(jīng)費使用情況：實驗材料費：0.4萬元 測試費：0.09萬元 專用玻璃儀器添置費：0.08萬元 資料費、復印費等：0.05萬元 采樣交通費：0.07萬