第六章黃酮類化合物

1、O12345678ABOO12345678OO12345678一、定義二、生理活性與分類三、理化性質(zhì)與顏色反應(yīng)四、提取與分離五、黃酮類化合物波譜解析六、生物活性 色原酮 2-苯基色原酮 （2-phenylchromone)OO12345678OO12345678O12345678C6 - C3 - C6AB黃酮類化合物泛指兩個芳環(huán)（黃酮類化合物泛指兩個芳環(huán)（A環(huán)與環(huán)與B環(huán)）經(jīng)中央三碳原子環(huán)）經(jīng)中央三碳原子（三碳鏈）相聯(lián)結(jié)而成的一系列化合物，其基本結(jié)構(gòu)為：（三碳鏈）相聯(lián)結(jié)而成的一系列化合物，其基本結(jié)構(gòu)為： 一、定義二、生理活性與分類三、理化性質(zhì)與顏色反應(yīng)四、提取與分離五、黃酮類化合物波譜解析六、

2、生物活性生理活性生理活性: : 黃酮類化合物分布廣，生理活性也較廣黃酮類化合物分布廣，生理活性也較廣 1、降低血管脆性及異常通透性，及擴冠作用（、降低血管脆性及異常通透性，及擴冠作用（Vit p樣作樣作用）用） 蘆丁、橙皮苷、蘆丁、橙皮苷、d兒茶素、香葉木苷等（毛細血管兒茶素、香葉木苷等（毛細血管性出血的止血藥及治療高血壓、動脈硬化的輔助藥）。性出血的止血藥及治療高血壓、動脈硬化的輔助藥）。 2、抗肝臟毒作用、抗肝臟毒作用 水飛薊素，異水飛薊素、及次異水飛薊水飛薊素，異水飛薊素、及次異水飛薊素等（治療急、慢性肝炎，肝硬化及多種中毒性肝損傷等素等（治療急、慢性肝炎，肝硬化及多種中毒性肝損傷等疾病

3、輔助藥）疾病輔助藥） 3、抗炎作用、抗炎作用 蘆丁、羥基蘆丁、二氫槲皮素及橙皮苷甲蘆丁、羥基蘆丁、二氫槲皮素及橙皮苷甲基查兒酮（對佐劑引發(fā)的大鼠關(guān)節(jié)炎有明顯抑制作用）?；閮和▽ψ魟┮l(fā)的大鼠關(guān)節(jié)炎有明顯抑制作用）。4、雌性激素樣作用、雌性激素樣作用 染料木素、金雀花異黃素、大豆素等。染料木素、金雀花異黃素、大豆素等。有人認為其與己烯雌酚結(jié)構(gòu)相似，故活性相似。有人認為其與己烯雌酚結(jié)構(gòu)相似，故活性相似。 OMeOOOHOH金雀花異黃素金雀花異黃素OHOH己烯雌酚己烯雌酚 5、抗菌抗病毒作用、抗菌抗病毒作用 黃芩苷，木犀草素，山奈酚等有抗菌或黃芩苷，木犀草素，山奈酚等有抗菌或抗病毒作用?？共《咀?/p>

4、用。6、瀉下作用、瀉下作用 營實苷營實苷A7、解痙作用、解痙作用 異甘草素，大豆素等（有類似罌粟堿樣的解除異甘草素，大豆素等（有類似罌粟堿樣的解除平滑肌痙攣的作用，治療緩解高血壓患者的頭痛癥狀）。平滑肌痙攣的作用，治療緩解高血壓患者的頭痛癥狀）。另外還有止咳平喘等作用（杜鵑素）。另外還有止咳平喘等作用（杜鵑素）。結(jié)構(gòu)分類結(jié)構(gòu)分類 根據(jù)黃酮類化合物根據(jù)黃酮類化合物A環(huán)和環(huán)和B環(huán)間三碳鏈的結(jié)構(gòu)狀態(tài)（氧化環(huán)間三碳鏈的結(jié)構(gòu)狀態(tài)（氧化程度、是否成環(huán)），程度、是否成環(huán)），B環(huán)連接的位置等特點，可將主要的天環(huán)連接的位置等特點，可將主要的天然黃酮類化合物分為然黃酮類化合物分為14大類。大類。 1、黃酮類（、黃

5、酮類（flavone） 黃芩苷OOOOHOHOOHOHOHCOOH黃酮(2苯基色原酮)OO1234567823456芹菜素 OOHOOHOHOOOHOHOHOH木犀草素2、黃酮醇（、黃酮醇（flavonol） OOOH3黃酮醇（C3連羥基）OOOHOHOHOH山萘酚OOOHOHOROHOH槲皮素 R=H蘆丁 Rrha1 6glcOOOHOHOHOHOHOH楊梅素 3、二氫黃酮（、二氫黃酮（flavanone） 二氫黃酮（C2，C3氫化） OO23甘草素 R=H甘草苷 R=glcOOOROH橙皮素 R=H橙皮苷 R=蕓香糖基OOROOHOHOMe4、二氫黃酮醇（、二氫黃酮醇（flavanonol

6、） 二氫黃酮醇（C2，C3氫化C3連羥基）OOOH23二氫槲皮素OOOHOHOHOHOH二氫桑色素OOOHOHOHOHOH水飛薊素（保肝）OOOHOHOHOOCH2OHOHOMe5、異黃酮（、異黃酮（isoflavone） 異黃酮（B環(huán)連C3）OO23大豆素 R1=R2=R3=H 大豆苷 R1=R3=H R2=glc葛根素 R2=R3=H R1=glc 解痙大豆素7，4二葡萄糖苷 R1= H R2=R3= glc葛根素木糖苷 R1= glc R2=xyl R3= H OOR2OOR3R16、二氫異黃酮（、二氫異黃酮（isoflavanone） 魚藤酮（殺絳蟲，毒魚）魚藤酮（殺絳蟲，毒魚） OO

7、OOOMeOMeHH 二氫異黃酮二氫異黃酮（C2 , ,C3氫化）氫化） OO32紫檀素紫檀素 R=CH3三葉豆紫檀苷三葉豆紫檀苷 R=glc 抗癌活性抗癌活性高麗槐素高麗槐素 R=H（若（若4羰基與羰基與C6未成環(huán)，其編號不變）未成環(huán)，其編號不變）OOROOO1782345691010111167、查耳酮（、查耳酮（Chalcone） 2羥基查耳酮（黃色） （吡喃酮開環(huán)）OHOOOHOH2345623456+_二氫黃酮（無色）此類可看成此類可看成 縮縮 的產(chǎn)物，同時在酸堿性條件下可與二氫黃酮相互轉(zhuǎn)化，的產(chǎn)物，同時在酸堿性條件下可與二氫黃酮相互轉(zhuǎn)化，因二氫黃酮的因二氫黃酮的 結(jié)構(gòu)可看作是一個插

8、烯內(nèi)酯，可在堿性條件下開環(huán)，酸性環(huán)合。結(jié)構(gòu)可看作是一個插烯內(nèi)酯，可在堿性條件下開環(huán)，酸性環(huán)合。OOCHOCOCH3紅花苷OHOOHOHOHOglc異甘草素OHOOHOH8、二氫查耳酮（、二氫查耳酮（dihydrochalcone） 梨根苷OHOHOOHOglc 二氫查耳酮（吡喃酮開環(huán)，-碳氫化）OHO9、花色素類（、花色素類（anthocyanidin） 芍藥花苷元芍藥花苷元 R1=OCH3 R2=H矢車菊苷元矢車菊苷元 R1= OH R2=H飛燕草苷元飛燕草苷元 R1= R2=OH天竺葵苷元天竺葵苷元 R1= R2=HOOHOHOHOHRR+12O+4 花色素類花色素類（4酮基還原，以烊鹽存

9、在）酮基還原，以烊鹽存在）10、黃烷、黃烷3，4二醇類（二醇類（flavan3，4diol） 無色矢車菊素?zé)o色矢車菊素 R1= OH R2=H無色飛燕草素?zé)o色飛燕草素 R1= R2=OH無色天竺葵素?zé)o色天竺葵素 R1= R2=H OROHOHOHOHOHR12黃烷黃烷3，4二醇類二醇類（C3 , ,C4氫化并連羥基）氫化并連羥基） OOHOH4311、黃烷、黃烷3醇類（醇類（flavan3ol） 花生仁兒茶素花生仁兒茶素OOHOHOHOHOMe黃烷黃烷3醇類（兒茶素類）醇類（兒茶素類）（C2，C3氫化且氫化且C3連羥基）連羥基） OOH32（+）兒茶素OOHOHOHOHOHHH（）表兒茶素OO

10、HHOHOHOHHOH12、橙酮類（噢、橙酮類（噢 類）（類）（aurone） 金魚草素OOCHOHOHOHOH橙酮類（噢 類）（C環(huán)為含氧五元環(huán)）OOCH12345672345613、雙苯吡喃酮類（、雙苯吡喃酮類（xanthone） 雙苯吡喃酮類雙苯吡喃酮類（苯環(huán)與色原酮（苯環(huán)與色原酮2，3位駢合）位駢合） OO12345678龍膽龍膽 酮酮 OOOHOHOMe14、其他類、其他類 （1）雙黃酮類）雙黃酮類 由二分子黃酮相聯(lián)而成，由于聯(lián)結(jié)方式不同又可分由二分子黃酮相聯(lián)而成，由于聯(lián)結(jié)方式不同又可分3種小類：種小類： 3，8雙芹菜素型雙芹菜素型 OOOOOHOHOHOHMeOOMe38銀杏素（解

11、痙，降壓，擴冠）銀杏素（解痙，降壓，擴冠） 8，8雙芹菜素型：雙芹菜素型： OOOOOHOHOHOHOHOH88柏黃素柏黃素 雙苯醚型雙苯醚型 OOOHOHOOOOHOHOH46扁柏黃酮扁柏黃酮 （2）高異黃酮（）高異黃酮（homoisoflavone） OO（3）黃酮木脂素類（）黃酮木脂素類（flavonolignan） 基本結(jié)構(gòu)中有苯丙素的碳架基本結(jié)構(gòu)中有苯丙素的碳架 OOOOOHOHOHCH2OHOHOMe水飛薊素水飛薊素 （4）生物堿型黃酮）生物堿型黃酮 基本結(jié)構(gòu)中有含氮的部分基本結(jié)構(gòu)中有含氮的部分 OHROHROO12R1 R2 榕 堿 NCH3異 榕 堿 HHNCH3H3一、定義二

12、、生理活性與分類三、理化性質(zhì)與顏色反應(yīng)四、提取與分離五、黃酮類化合物波譜解析六、生物活性（一）性狀（二）熒光（三）溶解性（四）酸堿性（五）顯色反應(yīng)多為晶性固體，少數(shù)為無定形粉末。顏色：與分子中是否存在交叉共軛體系及助色 團的類型、數(shù)目及取代位置有關(guān)。黃酮、黃酮醇及其苷類灰黃黃色查耳酮黃橙黃色二氫黃酮及醇、異黃酮不顯色或微黃色（一）性狀（一）性狀（二）熒光（三）溶解性（四）酸堿性（五）顯色反應(yīng) C3-OH在紫外光下有強烈熒光 （亮黃色或亮綠色） C3-OH成苷后熒光減弱。（一）性狀（一）性狀（二）熒光（二）熒光（三）溶解性（四）酸堿性（五）顯色反應(yīng)黃酮苷元黃酮苷元難溶或不溶于H2O 易溶MeOH

13、、EtOH等溶劑 易溶稀堿液 黃酮、黃酮醇、查耳酮難溶于水 （均屬平面型分子） 二氫黃酮及醇對水有一定溶解度 （屬非平面分子）黃酮苷黃酮苷易溶于水、MeOH、EtOH等溶劑 （苷元引入OH多，則水中溶解度大）（一）性狀（一）性狀（二）熒光（二）熒光（三）溶解性（三）溶解性（四）酸堿性（五）顯色反應(yīng) 分子中多Ar-OH顯酸性 （可溶于堿性水溶液、吡啶等溶劑中） 由于Ar-OH數(shù)目、位置不同，酸性強弱也不同以黃酮為例： 7,4-二二-OH 7或或4-OH 一般酚一般酚-OH 5-OH（溶NaHCO3）（溶Na2CO3）（溶不同濃度NaOH） （可用于提取、分離及鑒定工作） -吡喃酮環(huán)上1-位氧原子

14、，因有未共用電子對顯微弱的堿性可與強無機酸（H2SO4、HCl）等生成鹽。OOOOHClClHOH2+-所生成的鹽極不穩(wěn)定，加水后即可分解。黃酮鹽（呈不同的 可用于鑒別）C-H2SO4顏色（一）性狀（一）性狀（二）熒光（二）熒光（三）溶解性（三）溶解性（四）酸堿性（四）酸堿性（五）顯色反應(yīng) 1.還原反應(yīng) （1）鹽酸-鎂粉反應(yīng)（HCl-Mg） （2）四氫硼鈉反應(yīng)（NaBH4） 2.金屬鹽類試劑的絡(luò)合反應(yīng) （1）鋁鹽 （4）鎂鹽 （2）鉛鹽 （5）氯化鍶 （3）鋯鹽 （6）三氯化鐵反應(yīng) 3.硼酸顯色反應(yīng) 4.堿性試劑顯色反應(yīng) (1)鹽酸鎂粉反應(yīng)（HCl-Mg）樣品/EtOHMg粉HCl+濃橙紅紫紫

15、紅紅色色查耳酮橙酮兒茶素大多數(shù)異黃酮HCl-Mg不不 呈呈 色色 （2）四氫硼鈉反應(yīng)（NaBH4）二氫黃酮類NaBH4+紅紅紫紫色色其它黃酮類不呈色 1.還原反應(yīng) （1）鹽酸-鎂粉反應(yīng)（HCl-Mg） （2）四氫硼鈉反應(yīng)（NaBH4） 2.金屬鹽類試劑的絡(luò)合反應(yīng)金屬鹽類試劑的絡(luò)合反應(yīng) （1）鋁鹽）鋁鹽 （4）鎂鹽）鎂鹽 （2）鉛鹽）鉛鹽 （5）氯化鍶）氯化鍶 （3）鋯鹽）鋯鹽 （6）三氯化鐵反應(yīng)）三氯化鐵反應(yīng) 3.硼酸顯色反應(yīng)硼酸顯色反應(yīng) 4.堿性試劑顯色反應(yīng)堿性試劑顯色反應(yīng)OOOHOOOHOHOH ?？膳c金屬類試劑反應(yīng)，生成有色絡(luò)合物。 （1）鋁鹽 （2）鉛鹽 （3）鋯鹽 （4）鎂鹽 （5）

16、氯化鍶 （6）三氯化鐵反應(yīng)黃酮類化合物分子結(jié)構(gòu)中多具有下列結(jié)構(gòu)：（1）鋁鹽）鋁鹽 可用于定性及定量分析樣品+ 1% AlCl3或硝酸鋁絡(luò)絡(luò)合合物物（黃色） max 415 nm（有熒光）樣品+ 1 1% % 醋醋酸酸鉛鉛或堿式醋酸鉛/H2O黃黃 紅紅色色 沉沉淀淀（2）鉛鹽）鉛鹽（3）鋯鹽）鋯鹽 （ZrOCl2）OOOHOOOHOOOZrClOOOZrClOOH2OOH22%ZrOCl2黃綠色絡(luò)合物2%枸櫞酸2%枸櫞酸不變不變褪色褪色（4）鎂鹽）鎂鹽樣樣品品+醋醋酸酸鎂鎂/ /M Me eO OH H呈呈色色可可滴滴在在濾濾紙紙上上二氫黃酮二氫黃酮二氫黃酮醇二氫黃酮醇天藍色熒光天藍色熒光C5-

17、OH色澤更明顯色澤更明顯黃酮黃酮黃酮醇黃酮醇異黃酮異黃酮黃 橙黃 褐色褐色（5）氯化鍶（）氯化鍶（SrCl2）（鄰二酚羥基）+SrC12氨性 MeOH 液綠色綠色樣品棕色棕色黑色黑色沉淀沉淀樣品+顯色顯色Ar-OHFeCl3H2O或醇液（6）三氯化鐵反應(yīng)）三氯化鐵反應(yīng) 1.還原反應(yīng) （1）鹽酸-鎂粉反應(yīng)（HCl-Mg） （2）四氫硼鈉反應(yīng)（NaBH4） 2.金屬鹽類試劑的絡(luò)合反應(yīng) （1）鋁鹽 （4）鎂鹽 （2）鉛鹽 （5）氯化鍶 （3）鋯鹽 （6）三氯化鐵反應(yīng) 3.硼酸顯色反應(yīng)硼酸顯色反應(yīng) 4.堿性試劑顯色反應(yīng)堿性試劑顯色反應(yīng)OOOHOHO+硼 酸硼 酸H+亮黃色亮黃色 1.還原反應(yīng) （1）鹽

18、酸-鎂粉反應(yīng)（HCl-Mg） （2）四氫硼鈉反應(yīng)（NaBH4） 2.金屬鹽類試劑的絡(luò)合反應(yīng) （1）鋁鹽 （4）鎂鹽 （2）鉛鹽 （5）氯化鍶 （3）鋯鹽 （6）三氯化鐵反應(yīng) 3.硼酸顯色反應(yīng) 4.堿性試劑顯色反應(yīng)堿性試劑顯色反應(yīng)OOOHOHOHOMeOHOOHOHOHOMeOH-H+橙皮素橙皮素開環(huán)橙皮橙皮（二氫黃酮）（二氫黃酮）查爾酮查爾酮OH-H+開環(huán)二氫黃酮類二氫黃酮類查爾酮類查爾酮類環(huán)合環(huán)合（ 橙橙 黃黃 色色 ）（一）性狀（二）熒光（三）溶解性（四）酸堿性（五）顯色反應(yīng)一、定義二、分類三、理化性質(zhì)與顏色反應(yīng)四、提取與分離五、黃酮類化合物波譜解析六、生物活性 根據(jù)化合物的性質(zhì)，采取哪些

19、提取方法呢？ 化合物的極性？ 方法溶劑萃取 化合物的酸性？ 方法堿提酸沉 化合物的解離性？ 方法離子交換（一）提取 1.溶劑萃取法 2.堿提酸沉法 3.離子交換法 4.炭粉吸附法藥 材 EtOH提取藥 渣 乙醇液回收乙醇浸 膏回收液浸 膏加水水溶液分別用不同極性溶劑萃取石油醚、氯仿、石油醚 氯 仿 乙酸乙酯正丁醇水（極性?。ㄜ赵龋?（極性大的苷元）（黃酮苷類）（多糖、蛋白質(zhì)等）（分步萃取）乙酸乙酯、正丁醇（一）提取 1.溶劑萃取法 2.堿提酸沉法 3.離子交換法 4.炭粉吸附法注意：加入的酸、堿度應(yīng)盡可能低。例如：蘆丁的提取樣品樣品OH-提取液提取液過濾過濾H+沉淀沉淀（黃酮類）（黃酮類）

20、槐花米H2O石灰乳調(diào) pH = 89藥渣濾液酸調(diào)pH = 34沉淀濾液（一）提取 1.溶劑萃取法 2.堿提酸沉法 3.離子交換法 4.炭粉吸附法注意：應(yīng)用此法主要目的是除雜質(zhì)。黃酮H2O洗除水溶性雜質(zhì)液洗出黃酮類化合物水水甲醇甲醇（一）提取 1.溶劑萃取法 2.堿提酸沉法 3.離子交換法 4.炭粉吸附法主要適用于苷類成分的精制。藥材甲醇提取物分次加入活性炭，攪拌，靜置檢查上清液有無黃酮反應(yīng)，過濾濾液吸苷炭末依次用沸甲醇、沸水、7%酚/水、15%酚/醇洗脫沸甲醇沸水 7%酚/水 15%酚/醇濃縮，加乙醚乙醚（除酚）水（黃酮苷） （一）提取 1.溶劑萃取法 2.堿提酸沉法 3.離子交換法 4.炭粉

21、吸附法 （二）分離 根據(jù)化合物的性質(zhì)，采取哪些分離方法呢？ 化合物的極性大??？ 方法吸附、分配色譜 化合物的酸性強弱？ 方法pH梯度萃取 化合物的分子大小？ 方法葡聚糖凝膠 分子中具有特殊結(jié)構(gòu)？ （如：鄰二酚羥基） 方法金屬鹽絡(luò)合 （二）分離 1.柱色譜法 （硅膠、氧化鋁、纖維粉、 聚酰胺、葡聚糖凝膠） 2.pH梯度萃取法 3.鉛鹽沉淀法 （1）硅膠柱色譜 出柱先后順序： 若母核結(jié)構(gòu)相同，而-OH取代數(shù)目不同，則-OH多的后出柱后出柱 易形成分子內(nèi)氫鍵的-OH，其極性變小先出柱先出柱如：鄰二-OH 間二-OH （Rf值） 一般出柱順序：苷元苷元 單糖苷單糖苷 雙糖苷雙糖苷 多糖多糖苷苷（2）氧

22、化鋁柱色譜 通常情況下，要求在分子的結(jié)構(gòu)中 無酸性基團，或Ar-OH被甲基化。 （3）纖維粉柱色譜 其分離原理同紙層色譜。（4）聚酰胺柱色譜 聚酰胺（Polyamide）是由酰胺聚合而成的一類高分子物質(zhì)。商品名綿綸、尼龍。 原理：氫鍵吸附學(xué)說 聚酰胺分子內(nèi)有很多酰胺鍵，可與酚類、酸類、醌類、硝基化合物等形成氫鍵，因而對這些物質(zhì)產(chǎn)生了吸附作用。聚酰胺吸附物質(zhì)的原理如下圖：NNOOHHNNOOHHOHOO固定相固定相移動相移動相 吸附強弱取決于 化合物與聚酰胺形成氫鍵的能力。 聚酰胺對化合物的吸附力在水中有下列規(guī)律： 形成氫鍵的基團越多，則吸附力越強；OHOHOHOHOHOH 易形成分子內(nèi)氫鍵，則

23、吸附力減弱；OHOHOHOHOHOHCOOHOOHOH 芳香核、共軛雙鍵多者吸附力大；OHOH 以上介紹了聚酰胺對化合物吸附力的影響因素。 即： 形成氫鍵的基團越多，則吸附力越強； （Ar-OH、-COOH、醌基、硝基等） 易形成分子內(nèi)氫鍵，則吸附力減弱； （鄰二-OH、3-OH 4-酮基、5-OH 4-酮基等） 芳香核、共軛雙鍵多者吸附力大； 聚酰胺柱色譜在分離黃酮類化合物時 有下述規(guī)律： 不同類型黃酮化合物的出柱先后順序： 異黃酮 二氫黃酮醇 黃酮 黃酮醇 OOOHOHOHOHOOOHOHOHOOOHOHOHOHOOOHOHOH 苷元相同，出柱先后順序： 叁糖苷 雙糖苷 單糖苷 苷元 查爾

24、酮往往比相應(yīng)的黃酮類化合物難于洗脫 。OHOOHOHOHOOOHOHOH查爾酮黃酮 在聚酰胺柱上，常用的洗脫溶劑如下： 水 甲醇 丙酮 氫氧化鈉/H2O 甲酰胺 二甲基甲酰胺 尿素/H2O （洗脫能力：弱 強） 聚酰胺色譜的應(yīng)用： 黃酮類、酚類、生物堿類、萜類、甾體、糖類等黃酮類、酚類可逆聚酰胺吸附鞣質(zhì)不可逆聚酰胺吸附利用此性質(zhì)，可除提取物中的鞣質(zhì)葡聚糖凝膠（Sephadex gel） 用于黃酮類化合物的分離，主要有兩種型號： Sephadex-G型Sephadex LH-20型（羥丙基葡聚糖凝膠） 作用機理： 分離游離黃酮時吸附作用 （取決于游離Ar-OH的數(shù)目， Ar-OH少則先出柱） 分

25、離黃酮苷是分子篩起主導(dǎo)作用 （分子量大的先出柱） 常用洗脫溶劑： 堿性水溶液（0.1mol/L NH4OH） （含鹽水溶液0.5mol/L NaCl等） 醇及含水醇 其它溶劑 含水丙酮、甲醇-氯仿等。 （二）分離 1.柱色譜法 （硅膠、氧化鋁、纖維粉、 聚酰胺、葡聚糖凝膠） 2.pH梯度萃取法 3.鉛鹽沉淀法 適用于酸性強弱不同的黃酮苷元的分離。混合物/乙醚5%NaHCO35%NaHCO3萃取乙醚酸化回收EtoAcEtoAc5%NaCO35%NaCO3乙醚0.2%NaOH堿液乙醚（一般Ar-OH）4%NaOH堿液乙醚（ 3，5-OH）（無-OH）（4-7二-OH）（ 4、 7-OH） （二）分

26、離 1.柱色譜法 （硅膠、氧化鋁、纖維粉、 聚酰胺、葡聚糖凝膠） 2.pH梯度萃取法 3.鉛鹽沉淀法 根據(jù)分子中某些特定官能團進行分離?；旌衔?乙醇Pb(Ac)2水溶液乙醇沉淀 （具鄰二-OH）H2S 過濾通入硫化鉛沉淀或丙酮溶液溶30%乙醇中中性性濾液回收鄰二酚羥基堿堿式式Pb(OH)Ac濾液沉淀脫鉛（單-OH 或C3、C5-OH）（不具鄰二-OH）（一）提取 1.溶劑萃取法 2.堿提酸沉法 3.離子交換法 4.炭粉吸附法（二）分離 1.柱色譜法 2.pH梯度萃取法 3.鉛鹽沉淀法一、紙色譜一、紙色譜( (纖維素色譜纖維素色譜) )PCPC是小量制備性分離黃酮類化合物較為有效的方法。一般用是

27、小量制備性分離黃酮類化合物較為有效的方法。一般用3030張（張（46cm46cm57cm57cm）的濾紙分離后即可得到足夠水解和紫外分析）的濾紙分離后即可得到足夠水解和紫外分析的樣品。的樣品。色譜法在黃酮類化合物鑒定中的 應(yīng)用 色譜法檢識除具與對照品或色譜法檢識除具與對照品或“參照物參照物”進行可見光、熒進行可見光、熒光及顯色劑顯色斑點顏色及光及顯色劑顯色斑點顏色及Rf檢識外，還具色譜分離排除檢識外，還具色譜分離排除雜質(zhì)干擾的性質(zhì)，其檢識的專屬性和可靠性高于化學(xué)檢識。雜質(zhì)干擾的性質(zhì)，其檢識的專屬性和可靠性高于化學(xué)檢識。常用的色譜檢識條件有：常用的色譜檢識條件有： （1 1）展開方式及條件）展開

28、方式及條件 苷類苷類多用雙向展開。多用雙向展開。第一向第一向 醇性系統(tǒng)醇性系統(tǒng): : BAWBAW（4: 1: 54: 1: 5），），TBATBA（3:1:13:1:1），水飽和），水飽和n-BuOHn-BuOH等。等。 展開前展開前, ,濾紙用下層水飽和，此向主要利用混合物的分配濾紙用下層水飽和，此向主要利用混合物的分配系數(shù)不同進行系數(shù)不同進行正相正相分配色譜分離（移動相醇的親水性分配色譜分離（移動相醇的親水性小于小于固固定相）。定相）。第二向第二向 水性系統(tǒng)（多為酸水或電解質(zhì)）水性系統(tǒng)（多為酸水或電解質(zhì)）2%2%6%HOAC6%HOAC，HOAC-HOAC-濃濃HCl-HHCl-H2 2

29、O O（30:3:1030:3:10），），3%NaCl3%NaCl等。等。 主要以主要以反相分配反相分配色譜為主進行分離色譜為主進行分離( (利用化合物極性不利用化合物極性不同進行分離同進行分離) )。 苷元苷元 多用一向多用一向 醇性系統(tǒng)，醇性系統(tǒng)， 或用苯或用苯-HOAC-H-HOAC-H2 2O O（125:72:3125:72:3），）， CHClCHCl3 3-HOAC-H-HOAC-H2 2O(13:6:1),O(13:6:1), 酚酚- -水（水（4:14:1）, , 或或HOACHOAC濃濃HCl-HHCl-H2 2O O（30:3:330:3:3）。）。 花色素及苷花色素及

30、苷 多用含多用含HClHCl或或HOACHOAC水性系統(tǒng)。水性系統(tǒng)。 （2 2）分子結(jié)構(gòu)與）分子結(jié)構(gòu)與RfRf值的關(guān)系值的關(guān)系 苷元苷元 水性系統(tǒng)（如水性系統(tǒng)（如3-5%HOAC3-5%HOAC） 平面型苷元（黃酮、黃酮醇、查二酮）親水性差，共軛程度高，極性強，平面型苷元（黃酮、黃酮醇、查二酮）親水性差，共軛程度高，極性強， RfRf 0.0 單糖苷單糖苷 雙糖苷雙糖苷 三糖苷三糖苷水性展系統(tǒng)（反相分配，羥基越多，親水性越強，越水性展系統(tǒng)（反相分配，羥基越多，親水性越強，越 RfRf大）大）苷元苷元 單糖苷單糖苷 雙糖苷雙糖苷 三糖苷三糖苷 纖維素色譜纖維素色譜CCCC的色譜分離條件可參考的色

31、譜分離條件可參考PCPC的移、固相條件的移、固相條件（濾紙的本質(zhì)是纖維素），但纖維素質(zhì)地輕，裝柱較難，因此（濾紙的本質(zhì)是纖維素），但纖維素質(zhì)地輕，裝柱較難，因此用得不多。用得不多。二二. 薄層薄層色譜檢識色譜檢識 1. 聚酰胺聚酰胺TLC 現(xiàn)多用聚酰胺薄膜進行黃酮苷元及苷的檢識，其（國產(chǎn)現(xiàn)多用聚酰胺薄膜進行黃酮苷元及苷的檢識，其（國產(chǎn)的聚酰胺薄膜的聚酰胺薄膜 浙江浙江 黃巖）分離效果優(yōu)于硅膠黃巖）分離效果優(yōu)于硅膠TLC及及PC。其。其色譜規(guī)律與柱色譜相同。色譜規(guī)律與柱色譜相同。展開劑展開劑 游離黃酮游離黃酮 多用純有機溶劑系統(tǒng)多用純有機溶劑系統(tǒng)氯仿氯仿-甲醇甲醇（94 6，96 4）氯仿氯仿-

32、甲醇甲醇-丁酮丁酮（12 2 1）苯苯-甲醇甲醇-丁酮（丁酮（9064，8488，602020）等。）等。 黃酮苷黃酮苷 多用醇多用醇水系統(tǒng)水系統(tǒng) 甲醇甲醇-乙酸乙酸-水水（90 5 5）甲醇甲醇-水水（1 1）丙酮丙酮-水（水（1 1）異丙醇異丙醇-水水（3 2）水水-乙醇乙醇-丁酮丁酮-乙酰丙酮（乙酰丙酮（65 15 15 5）水水-正丁醇正丁醇-丙酮丙酮-乙酸乙酸（16221）等。等。 2. 硅膠硅膠TLC 檢識游離黃酮多于黃酮苷。檢識游離黃酮多于黃酮苷。 展開劑展開劑 游離黃酮游離黃酮 甲苯甲苯-甲酸甲酯甲酸甲酯-甲酸（甲酸（5 4 1 ，甲苯與甲酸的比例可調(diào)整），甲苯與甲酸的比例可調(diào)

33、整）適合分離二氫黃酮適合分離二氫黃酮二氯甲烷二氯甲烷-乙酸乙酸-水（水（2 1 1）苯苯-乙酸（乙酸（45 4）苯苯-甲醇甲醇-乙酸（乙酸（3555）氯仿氯仿-甲醇（甲醇（8.5 1.5，7 0.5）苯苯-甲醇（甲醇（95 5）黃酮苷黃酮苷 黃酮黃酮O-苷、黃酮苷、黃酮C-苷和黃酮醇苷和黃酮醇O-苷類苷類 正丁醇正丁醇-乙酸乙酸-水（水（3 1 1）二氫黃酮二氫黃酮O-苷類苷類 氯仿氯仿-乙酸（乙酸（1004） 甲酸甲酸-乙酸乙酯乙酸乙酯-水（水（9 1 1）氯仿氯仿-乙酸乙酯乙酸乙酯-丙酮丙酮（5 1 4）氯仿氯仿-甲醇甲醇-水（水（654512）等）等苯苯-乙酸（乙酸（1004） 氯仿氯仿

34、-乙酸乙酸-甲醇（甲醇（9055）等。）等。 一、定義二、分類三、理化性質(zhì)與顏色反應(yīng)四、提取與分離五、黃酮類化合物波譜解析六、生物活性 在黃酮類化合物結(jié)構(gòu)分析中的應(yīng)用 主要有： （一）紫外光譜（UV） （二）核磁共振1H-NMR （三）核磁共振13C-NMR （四）質(zhì)譜（MS）OOROOR 多數(shù)黃酮類化合物在紫外（UV）譜中主要由兩個吸收帶組成。 苯甲?；到y(tǒng) 桂皮?；到y(tǒng) ( benzoyl) (cinnamoyl) Band II Band I 220280 nm 300400 nmOOR 黃酮類化合物結(jié)構(gòu)中的交叉共軛交叉共軛體系苯甲酰基系統(tǒng) 桂皮?；到y(tǒng) ( benzoyl) (cinn

35、amoyl) Band II Band I 220280 nm 300400 nm黃酮類化合物在MeOH溶液中的 黃酮及黃酮醇類 查爾酮及橙酮類 異黃酮、二氫黃酮及二氫黃酮醇類 黃酮及黃酮醇類木犀草素（黃酮類）槲皮素（黃酮醇類）OOR74引入供電基(-OH、-OMe)AB吸收帶向紅位移BandIBandII 黃酮類在MeOH中B環(huán)氧代對Band I的影響OOOHOHOHOOOHOHOHOHOOOHOHOHOHOH3,5,7-3,5,7,4-3,5,7,3,4-三羥基黃酮四羥基黃酮五羥基黃酮高良姜素山奈酚槲皮素359367370紅移紅移紅移紅移 黃酮類在MeOH中A環(huán)氧代對Band II的影響O

36、OOHOOOHOHOOOHOHOH7-5,7-5,6,7-羥基黃酮二羥基黃酮三羥基黃酮252262274紅移紅移 利用在MeOH中的UV區(qū)別黃酮和黃酮醇類Band I黃酮黃酮醇（3-O被取代）黃酮醇（3-OH游離）328357304350352385黃酮類化合物在MeOH溶液中的 黃酮及黃酮醇類 查爾酮及橙酮類 異黃酮、二氫黃酮及二氫黃酮醇類 查耳酮及橙酮類 波譜特征： 帶 I 強主峰 帶 II 弱次強峰2,3,4-三羥基查耳酮3,4-二羥基橙酮O2345623456查耳酮OCH27O1234561234567橙酮 查耳酮類 Band II220 270 nm Band I 340 390 n

37、m 有時分裂為 Ia（340390） Ib（300320） 環(huán)上引入氧取代基（同黃酮及黃酮醇類） 使帶 I 紅移（ 2-OH影響最大） 2-OH甲基化或苷化使帶I紫移1520nm 橙酮類 常出現(xiàn)34個吸收峰 主峰（Band I） 370 430 nm天然來源的橙酮 388 413 nm黃酮類化合物在MeOH溶液中的 黃酮及黃酮醇類 查爾酮及橙酮類 異黃酮、二氫黃酮及二氫黃酮醇類 異黃酮、二氫黃酮及二氫黃酮醇7-羥基異黃酮4,7-二羥基二氫黃酮 OOOOOOOH 異黃酮、二氫黃酮及二氫黃酮醇異黃酮、二氫黃酮及二氫黃酮醇共同特點： 帶 I 弱B環(huán)不能與吡喃酮環(huán)上羰基共軛 帶 II 強主峰根據(jù)主峰位

38、置區(qū)別： 異黃酮245270 nm 二氫黃酮、二氫黃酮醇270295 nm黃酮類化合物黃酮類化合物在在MeOH溶液中的溶液中的 黃酮及黃酮醇類黃酮及黃酮醇類 查爾酮及橙酮類查爾酮及橙酮類 異黃酮、二氫黃酮及二氫黃酮醇類異黃酮、二氫黃酮及二氫黃酮醇類 加入診斷試劑后引起的位移及其在結(jié)構(gòu)測定中的意義 下面以黃酮及黃酮醇為例進行說明 NaOMe NaOAc NaOAc/H3BO3 AlCl3、AlCl3/HCl NaOMe NaOMe是個強堿，在一定程度上可使黃酮及黃酮醇上所有的Ar-OH解離。 因此，將使Band I及II向紅位移。1. Band I + 4060 nm 強度不不降有4-OH +

39、5060 nm 強度下下降無4-OH 有 3-OH NaOMe 2. 立即測試光譜 = 5分鐘后測試光譜 （即：Band I 和 Band II 吸收譜不隨時間延長而衰退） 說明無 3,4-二-OH結(jié)構(gòu)（free） （即無對堿敏感的取代圖式）3. 立即測試光譜 5分鐘后測試光譜 說明可能存在 3,4-二-OH結(jié)構(gòu)（free）注：對堿敏感的取代圖式 3,4- 3,3,4- 5,6,7- 5,7,8- 3,4,5- 等 NaOMe NaOAc NaOAc/H3BO3 AlCl3、AlCl3/HCl NaOAc NaOAc的堿性 H-6109876543210 ppmTMSH-8 H-6 1. A環(huán)

40、質(zhì)子 2. B環(huán)質(zhì)子 3. C環(huán)質(zhì)子 4. 糖端基碳上的質(zhì)子 5. 乙酰氧基上的質(zhì)子 6. 甲氧基上的質(zhì)子2. B環(huán)質(zhì)子 (1) 4-氧取代黃酮類化合物ORHHHH2356B7.10 8.106.50 7.10環(huán)對其的負屏蔽效應(yīng)4-OR取代基的屏蔽作用COR2356BH-2 H-6H-3 H-5構(gòu)成 AABB 系統(tǒng)AB偶合系統(tǒng)J 8.5 Hz2. B環(huán)質(zhì)子 (2) 3,4-二氧取代黃酮及黃酮醇類化合物OROR2 5 6 H-5 H-2H-6dd,d,d,J = 8.5 Hz6.70 7.10J = 2.5 HzJ = 8.5 Hz7.20 7.90J = 2.5 Hz7.20 7.90 依據(jù)H

41、-2及H-6的化學(xué)位移，可以區(qū)別黃酮及黃酮醇的3,4-位上是 3-OH, 4-OMe 3-OMe, 4-OH。2. B環(huán)質(zhì)子 (2) 3,4-二氧取代黃酮及黃酮醇類化合物二氧取代黃酮及黃酮醇類化合物 1. A環(huán)質(zhì)子 2. B環(huán)質(zhì)子 3. C環(huán)質(zhì)子 4. 糖端基碳上的質(zhì)子 5. 乙酰氧基上的質(zhì)子 6. 甲氧基上的質(zhì)子孤立芳氫的單峰信號易與之相混孤立芳氫的單峰信號易與之相混注意注意3. C環(huán)質(zhì)子 (1) 黃酮類OOH6.30 ( s )3（尖銳的單峰）OOHORHROOROOHHROROOR3. C環(huán)質(zhì)子 (2) 異黃酮類OOH7.60 7.80 (s)3. C環(huán)質(zhì)子 (3) 二氫黃酮及二氫黃酮醇

42、OOHHHH3H-2H-3J =17.0 Hz偕偶Jtrans= 11.0 HzJcix= 5.0 HzH-3J =17.0 Hz偕偶Jtrans= 11.0 HzJcix= 5.0 Hzdd,5.202.80dd,OOOHHHH3H-2H-3Jtrans= 11.0 HzJtrans= 11.0 Hz d,4.904.30d,3. C環(huán)質(zhì)子 (4) 查耳酮及橙酮類OHH2345623456OCHO1234561234567H H- -H H- -d, J = 17.0 Hz6.70 7.407.30 7.70芐氫S,6.50 6.70 1. A環(huán)質(zhì)子 2. B環(huán)質(zhì)子 3. C環(huán)質(zhì)子 4. 糖端基碳上的質(zhì)子 5. 乙酰氧基上的質(zhì)子 6. 甲氧基上的質(zhì)子黃酮苷類化合物上糖的質(zhì)子信號（端基質(zhì)子） 黃酮醇-3-O-葡萄糖