5.3血紅蛋白的提取和分離(人教版精品)ppt課件

1、12血血一、基礎(chǔ)知識(shí)一、基礎(chǔ)知識(shí) 凝膠色譜法（分配色譜法）凝膠色譜法（分配色譜法）1 1、凝膠：、凝膠：一些微小多孔的球體（內(nèi)含許多貫穿的通道，由多糖類構(gòu)成如葡聚糖、瓊脂糖）一些微小多孔的球體（內(nèi)含許多貫穿的通道，由多糖類構(gòu)成如葡聚糖、瓊脂糖）2 2、概念：、概念：根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量的大小分離蛋白質(zhì)的有效方法根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量的大小分離蛋白質(zhì)的有效方法3 3、原理：、原理：3;.45用凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)時(shí)，分子量大的蛋白質(zhì)用凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)時(shí)，分子量大的蛋白質(zhì)A A路程較長(zhǎng)，移動(dòng)速度較慢路程較長(zhǎng)，移動(dòng)速度較慢 B B路程較長(zhǎng)，移動(dòng)速度較快路程較長(zhǎng)，移動(dòng)速度較快C C路程較短，移動(dòng)速度較慢路程

2、較短，移動(dòng)速度較慢 D D路程較短，移動(dòng)速度較快路程較短，移動(dòng)速度較快D6相對(duì)分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)在凝膠中的進(jìn)行過(guò)程可表示為圖中哪一個(gè)相對(duì)分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)在凝膠中的進(jìn)行過(guò)程可表示為圖中哪一個(gè)B7緩沖溶液：緩沖溶液：能夠抵制（能夠抵制（ ） 對(duì)溶液的（對(duì)溶液的（ ）的影響，維持）的影響，維持PH PH 基本基本不變。不變。外界的酸或堿外界的酸或堿PHPH值值89使用使用SDS-SDS-聚丙烯酰胺電泳過(guò)程中，不同蛋白質(zhì)的電泳遷移率完全取決于聚丙烯酰胺電泳過(guò)程中，不同蛋白質(zhì)的電泳遷移率完全取決于A A 電荷的多少電荷的多少 B B 分子的大小分子的大小C C 肽鏈的多少肽鏈的多少 D D 分子形

3、狀的差異分子形狀的差異10分離血紅蛋白溶液分離血紅蛋白溶液有機(jī)溶劑有機(jī)溶劑 （無(wú)色透明的甲苯層）（無(wú)色透明的甲苯層）脂類物質(zhì)脂類物質(zhì) （白色白色脂溶性物質(zhì)沉淀層）脂溶性物質(zhì)沉淀層）血紅蛋白溶液血紅蛋白溶液 （紅色透明液體）（紅色透明液體）紅細(xì)胞破碎物沉（暗紅色沉淀物）紅細(xì)胞破碎物沉（暗紅色沉淀物）1112下列操作正確的是（下列操作正確的是（ ）A. A. 分離紅細(xì)胞時(shí)采用低速長(zhǎng)時(shí)間離心分離紅細(xì)胞時(shí)采用低速長(zhǎng)時(shí)間離心 B. B. 紅細(xì)胞釋放出血紅蛋白只需要加入蒸餾水就可紅細(xì)胞釋放出血紅蛋白只需要加入蒸餾水就可C. C. 分離血紅蛋白溶液是低速短時(shí)間離心分離血紅蛋白溶液是低速短時(shí)間離心 D. D.

4、 透析時(shí)要用透析時(shí)要用20mmol/l20mmol/l的磷酸緩沖液，透析的磷酸緩沖液，透析12h12hD D13在蛋白質(zhì)的提取和分離中，關(guān)于對(duì)樣品處理過(guò)程中，分析無(wú)誤的是在蛋白質(zhì)的提取和分離中，關(guān)于對(duì)樣品處理過(guò)程中，分析無(wú)誤的是A A洗滌紅細(xì)胞的目的是去除血漿中的葡萄糖、無(wú)機(jī)鹽洗滌紅細(xì)胞的目的是去除血漿中的葡萄糖、無(wú)機(jī)鹽B B洗滌時(shí)離心速度過(guò)小，時(shí)間過(guò)短，白細(xì)胞等會(huì)沉淀，達(dá)不到分離的效果洗滌時(shí)離心速度過(guò)小，時(shí)間過(guò)短，白細(xì)胞等會(huì)沉淀，達(dá)不到分離的效果C C洗滌過(guò)程選用洗滌過(guò)程選用0.1%0.1%的生理鹽水的生理鹽水D D透析的目的是去除樣品中相對(duì)分子質(zhì)量較小的雜質(zhì)透析的目的是去除樣品中相對(duì)分子質(zhì)

5、量較小的雜質(zhì)D14注意事項(xiàng)：底塞中插入的玻璃管的上部不得超出橡皮塞的凹穴底面，否則難以鋪?zhàn)⒁馐马?xiàng)：底塞中插入的玻璃管的上部不得超出橡皮塞的凹穴底面，否則難以鋪實(shí)尼龍網(wǎng)，還會(huì)導(dǎo)致液體殘留，蛋白質(zhì)分離不徹底。實(shí)尼龍網(wǎng)，還會(huì)導(dǎo)致液體殘留，蛋白質(zhì)分離不徹底。1516173 3）樣品加入與洗脫）樣品加入與洗脫加樣前加樣前 打開(kāi)下端出口，使柱內(nèi)凝膠面上的（打開(kāi)下端出口，使柱內(nèi)凝膠面上的（ ）緩慢下降到與（緩慢下降到與（ ）平齊，關(guān)閉出口）平齊，關(guān)閉出口緩沖液緩沖液凝膠面凝膠面18加透析樣品加透析樣品1920調(diào)整緩沖液面：與凝膠面平齊調(diào)整緩沖液面：與凝膠面平齊滴加透析樣品：用（滴加透析樣品：用（ ）將）將1

6、ml（ ）的樣品加到色譜柱的（）的樣品加到色譜柱的（ ）樣品滲入凝膠床：樣品滲入凝膠床：（ ）洗脫：打開(kāi)下端，用磷酸緩沖液洗脫洗脫：打開(kāi)下端，用磷酸緩沖液洗脫收集：待（收集：待（ ）接近色譜柱底端時(shí)，用試管收集流出液，每）接近色譜柱底端時(shí)，用試管收集流出液，每（ ）收集一試管連續(xù)收集）收集一試管連續(xù)收集注意正確的加樣操作：注意正確的加樣操作： 不要觸及破壞凝膠面不要觸及破壞凝膠面 貼壁加樣貼壁加樣 使吸管管口沿管壁環(huán)繞移動(dòng)使吸管管口沿管壁環(huán)繞移動(dòng)吸管吸管透析液透析液頂端頂端樣品完全進(jìn)凝膠層樣品完全進(jìn)凝膠層5ml紅色的蛋白質(zhì)紅色的蛋白質(zhì)21二、實(shí)驗(yàn)操作二、實(shí)驗(yàn)操作蛋白質(zhì)的提取和分離一般分為四步：

7、蛋白質(zhì)的提取和分離一般分為四步：（1 1）樣品處理：包括洗滌紅細(xì)胞；血紅蛋白釋放；離心等操作收集到的血紅蛋白）樣品處理：包括洗滌紅細(xì)胞；血紅蛋白釋放；離心等操作收集到的血紅蛋白溶液。溶液。（2 2）粗分離：透析除去分子較小的雜質(zhì)。）粗分離：透析除去分子較小的雜質(zhì)。（3 3）純化：通過(guò)凝膠色譜法將分子量較大的雜質(zhì)蛋白質(zhì)除去。）純化：通過(guò)凝膠色譜法將分子量較大的雜質(zhì)蛋白質(zhì)除去。（4 4）純度鑒定：通過(guò)聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定。）純度鑒定：通過(guò)聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定。22233.3.下列是有關(guān)血紅蛋白提取和分離的相關(guān)操作，其中正確的是（下列是有關(guān)血紅蛋白提取和分離的相關(guān)操作，其中正確的是（ ）A A可采集豬血作為實(shí)驗(yàn)材料