植物組織培養(yǎng)第十二章2幾種花卉的組織培養(yǎng)ppt課件

1、第十二章第十二章 (2)(2)幾種花卉的組織培養(yǎng)幾種花卉的組織培養(yǎng)本章內(nèi)容與目的要求：本章內(nèi)容與目的要求： 掌握百合生物學(xué)特性和快速繁掌握百合生物學(xué)特性和快速繁殖方法殖方法 掌握蘭科植物組培的大致過(guò)程掌握蘭科植物組培的大致過(guò)程 掌握胡蝶蘭花梗組培的方法掌握胡蝶蘭花梗組培的方法第一節(jié)第一節(jié) 百合的組織培養(yǎng)百合的組織培養(yǎng) 全世界已發(fā)現(xiàn)百合約全世界已發(fā)現(xiàn)百合約89余種，主要分布地區(qū)是中余種，主要分布地區(qū)是中 國(guó)、日本、北美和歐洲等溫帶地區(qū)；國(guó)、日本、北美和歐洲等溫帶地區(qū)； 北美百合協(xié)會(huì)將百合園藝品種劃分為北美百合協(xié)會(huì)將百合園藝品種劃分為10個(gè)種系；個(gè)種系； 觀賞栽培的主要是觀賞栽培的主要是4個(gè)種系，

2、即：亞洲百合雜種個(gè)種系，即：亞洲百合雜種 系、茶香百合雜種系、東方百合雜種系、麝香百系、茶香百合雜種系、東方百合雜種系、麝香百 合雜種系；合雜種系； 以上四品系株形端正，花色清白給人以清純、高以上四品系株形端正，花色清白給人以清純、高 雅的印象，是切花中的佳品。雅的印象，是切花中的佳品。 亞洲百合亞洲百合我國(guó)昆明、上海、我國(guó)昆明、上海、深圳的百合切花深圳的百合切花生產(chǎn)發(fā)展較快，生產(chǎn)發(fā)展較快，已形成三大生產(chǎn)已形成三大生產(chǎn)基地。基地。麝香百合麝香百合 目前國(guó)內(nèi)切花目前國(guó)內(nèi)切花栽培的百合大多栽培的百合大多是亞洲型，主要是亞洲型，主要從荷蘭、日本引從荷蘭、日本引進(jìn)，經(jīng)過(guò)幾年的進(jìn)，經(jīng)過(guò)幾年的栽培試驗(yàn)，已

3、篩栽培試驗(yàn)，已篩選出一批適合我選出一批適合我國(guó)生產(chǎn)的品種。國(guó)生產(chǎn)的品種。一、形態(tài)特性和生物學(xué)習(xí)性一、形態(tài)特性和生物學(xué)習(xí)性百合是百合科百合屬植物的統(tǒng)稱，為多年生的草百合是百合科百合屬植物的統(tǒng)稱，為多年生的草本植物。本植物。鱗莖無(wú)皮，廣卵形，直徑鱗莖無(wú)皮，廣卵形，直徑5 8cm，白色或黃白色，白色或黃白色，莖高莖高3090cm，直立，葉多而散生，披針形，光滑。，直立，葉多而散生，披針形，光滑?；▎紊驍?shù)花橫向著生莖頂，花朵呈喇叭狀、筒花單生或數(shù)花橫向著生莖頂，花朵呈喇叭狀、筒狀，有清香?；ū幌榷送饩?，花被筒深處淡綠色。狀，有清香?；ū幌榷送饩?，花被筒深處淡綠色。百合屬于球根花卉，要求肥沃、疏松和排

4、水良好百合屬于球根花卉，要求肥沃、疏松和排水良好的沙壤土，以有利于鱗莖發(fā)育膨大。的沙壤土，以有利于鱗莖發(fā)育膨大。二、傳統(tǒng)的繁殖方法二、傳統(tǒng)的繁殖方法1. 1.分球法：百合母球生長(zhǎng)過(guò)程中，于莖軸分球法：百合母球生長(zhǎng)過(guò)程中，于莖軸上逐漸形成小鱗莖，稱上逐漸形成小鱗莖，稱“莖生小球莖生小球”，經(jīng)一年栽培，可分生經(jīng)一年栽培，可分生1 13 3個(gè)甚至個(gè)甚至7 79 9個(gè)個(gè)小球。小球。 2.鱗片扦插法：于89月，取成熟健壯的老鱗莖，陰干后剝下鱗片，斜插于濕潤(rùn)木屑或顆粒泥炭中，在適宜溫度、濕度下，經(jīng)24個(gè)月生根發(fā)葉，并在鱗片基部生長(zhǎng)出小磷片，1片鱗片可獲5060個(gè)子球，三、百合的組織培養(yǎng)三、百合的組織培養(yǎng)本

5、方法自本方法自20世紀(jì)世紀(jì)70年代后期開始，日本人以葉年代后期開始，日本人以葉片為外植體誘導(dǎo)出大花卷丹的小植株；片為外植體誘導(dǎo)出大花卷丹的小植株；我國(guó)于我國(guó)于80年代初由蘭洲百合的花藥、花絲等培年代初由蘭洲百合的花藥、花絲等培育出完整小植株。育出完整小植株。 80年代以后，培養(yǎng)出去病毒的百合種苗和通過(guò)年代以后，培養(yǎng)出去病毒的百合種苗和通過(guò)胚培養(yǎng)獲得遠(yuǎn)緣雜交的新品種。胚培養(yǎng)獲得遠(yuǎn)緣雜交的新品種。1 1、花器的組織培養(yǎng)、花器的組織培養(yǎng)(1)(1)取材和滅菌取材和滅菌 花蕾開花前數(shù)日的）花蕾開花前數(shù)日的） 酒酒精精7070擦拭花蕾表面擦拭花蕾表面 酒精燈酒精燈上灼燒上灼燒3 35s 5s 剝開花蕾無(wú)

6、菌剝開花蕾無(wú)菌培養(yǎng)皿內(nèi)）培養(yǎng)皿內(nèi)） 分別切取花絲、子分別切取花絲、子房、花柱等房、花柱等3 35mm5mm） 接種。接種。（2 2培養(yǎng)基培養(yǎng)基 花柱花梗、莖段等）：花柱花梗、莖段等）：MS + IAA MS + IAA l.0 + BA 0.2 l.0 + BA 0.2 ； 葉片用：葉片用：MS+NAA 1.0+BA 0.1 MS+NAA 1.0+BA 0.1 ； 植株分化：植株分化：MS + NAA 2.0 + IBA 0.4 MS + NAA 2.0 + IBA 0.4 + Kt0.05+ Kt0.05； 以上均附加：蔗糖以上均附加：蔗糖3 3和瓊脂和瓊脂0.70.7，pH5.8pH5.8

7、6.26.2。（3 3培養(yǎng)條件培養(yǎng)條件 光照度光照度2000Lx2000Lx，每天照用，每天照用15h15h，保溫，保溫 2020。 花器部位：以花絲的部位為好，成活率很高，花器部位：以花絲的部位為好，成活率很高，發(fā)芽較多；其次為子房和花柱部分。發(fā)芽較多；其次為子房和花柱部分。 子球形成途徑：一是從切中處形成愈傷組織，子球形成途徑：一是從切中處形成愈傷組織，以后再發(fā)芽；或是從切口直接產(chǎn)生芽。以后再發(fā)芽；或是從切口直接產(chǎn)生芽。 麝香百合花器培養(yǎng)得到的植株，生長(zhǎng)約麝香百合花器培養(yǎng)得到的植株，生長(zhǎng)約6個(gè)月個(gè)月即可開花，未發(fā)現(xiàn)不正?，F(xiàn)象，只是母株的花即可開花，未發(fā)現(xiàn)不正常現(xiàn)象，只是母株的花較大，且全株

8、無(wú)病毒癥狀。較大，且全株無(wú)病毒癥狀。(4)(4)生長(zhǎng)情況生長(zhǎng)情況2、鱗片組織培養(yǎng) 對(duì)于擴(kuò)大培養(yǎng)材料來(lái)源，加快繁殖速度和培養(yǎng)得到無(wú)病毒苗等皆有重要意義。（1 1取材與消毒：以鱗片外植體，受土壤微生物的影取材與消毒：以鱗片外植體，受土壤微生物的影響，所以污染率相當(dāng)高。為此外植體消毒要嚴(yán)加注意，響，所以污染率相當(dāng)高。為此外植體消毒要嚴(yán)加注意，可應(yīng)用幾種消毒劑并用的方法，切取可應(yīng)用幾種消毒劑并用的方法，切取0.5cm20.5cm2鱗片接種。鱗片接種。（2 2初代培養(yǎng)基：初代培養(yǎng)基：MS + 2,4D 1.0 + IAA 1.0 + MS + 2,4D 1.0 + IAA 1.0 + Kt 0.5Kt

9、0.5 繼代培養(yǎng)：繼代培養(yǎng)：MS + NAA 2 + IBA 0.4 + Kt MS + NAA 2 + IBA 0.4 + Kt 0.05 0.05 （3 3培養(yǎng)條件：培養(yǎng)條件：2525土土 22，照光，照光 9-10 h9-10 hd d，光強(qiáng)，光強(qiáng)1200 Lx1200 Lx。（4 4生長(zhǎng)情況生長(zhǎng)情況 接種接種2 2周后，即有周后，即有9898左右的鱗片切左右的鱗片切塊在近軸面或邊緣上有淡黃色的不定芽塊在近軸面或邊緣上有淡黃色的不定芽原基呈環(huán)狀突起原基呈環(huán)狀突起2 24 4個(gè)個(gè)/ /塊），塊），4 4周后，周后，可形成中間抽出綠色的白色小鱗莖，其可形成中間抽出綠色的白色小鱗莖，其基部發(fā)生

10、一些粗壯的根?；堪l(fā)生一些粗壯的根。 將幼苗切成將幼苗切成1.51.52cm2cm長(zhǎng)的片斷，接長(zhǎng)的片斷，接種到誘導(dǎo)愈傷組織的培養(yǎng)基上，種到誘導(dǎo)愈傷組織的培養(yǎng)基上，3 3周后周后葉子的基部、葉脈、葉緣上均可誘導(dǎo)出葉子的基部、葉脈、葉緣上均可誘導(dǎo)出一團(tuán)團(tuán)淡黃色的愈傷組織。一團(tuán)團(tuán)淡黃色的愈傷組織。愈傷組織轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基愈傷組織轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基1010周后，周后，逐漸膨大，分化出許多大小不等的鱗莖，逐漸膨大，分化出許多大小不等的鱗莖，并在基部長(zhǎng)出許多粗壯的根。并在基部長(zhǎng)出許多粗壯的根。（5 5試管苗移栽試管苗移栽 首先應(yīng)把根部的培養(yǎng)基清洗干首先應(yīng)把根部的培養(yǎng)基清洗干凈。凈。 移栽前，放在移栽前，放在

11、4 41010低溫條低溫條件下鍛煉件下鍛煉2 23 3周，這樣移栽后的幼周，這樣移栽后的幼苗生長(zhǎng)更加健壯。苗生長(zhǎng)更加健壯。 移栽幼苗最好用消毒的腐殖土移栽幼苗最好用消毒的腐殖土或泥炭土加蛭石的混合基質(zhì)，育苗盤或泥炭土加蛭石的混合基質(zhì)，育苗盤必須清洗消毒。必須清洗消毒。 移栽后注意濕度管理，相對(duì)濕移栽后注意濕度管理，相對(duì)濕度控制在度控制在80809090，防止烈日曝曬，防止烈日曝曬，后期幼苗不宜澆水過(guò)多，并及時(shí)噴灑后期幼苗不宜澆水過(guò)多，并及時(shí)噴灑藥劑預(yù)防病蟲危害。藥劑預(yù)防病蟲危害。四、鱗莖打破休眠的方法 百合栽培中首先避免因球根的休眠而導(dǎo)致發(fā)芽率不高及盲花。僅靠貯藏?zé)o法打破休眠，需要人工打破休眠

12、，方法有： 1.1.冷藏：冷藏：13131515預(yù)冷，預(yù)冷，3 355冷藏冷藏6-76-7周。周。2.2.溫水浸泡：于溫水浸泡：于4848的溫水中，每隔的溫水中，每隔2 23min3min提起提起再泡入，反復(fù)再泡入，反復(fù)2 23 3次，后在次，后在4545溫水中浸泡溫水中浸泡1h1h，嚴(yán)格掌握水溫。嚴(yán)格掌握水溫。3.3.激素處理：用激素處理：用1000 xGA1000 xGA溶液浸泡，為避免發(fā)根阻溶液浸泡，為避免發(fā)根阻礙，可先將球根倒置浸泡一半，而后恢復(fù)正常位礙，可先將球根倒置浸泡一半，而后恢復(fù)正常位置予以靜置。置予以靜置。第二節(jié) 蘭花的組織培養(yǎng)技術(shù)蘭花系蘭科植物，在自然條件下主要靠分株繁殖，

13、蘭花系蘭科植物，在自然條件下主要靠分株繁殖，繁殖率一年只有幾倍，所以無(wú)法大量繁殖生產(chǎn)，而繁殖率一年只有幾倍，所以無(wú)法大量繁殖生產(chǎn)，而且由于長(zhǎng)期進(jìn)行無(wú)性繁殖，帶病毒株增多，逐漸使且由于長(zhǎng)期進(jìn)行無(wú)性繁殖，帶病毒株增多，逐漸使種性降低，影響生長(zhǎng)。種性降低，影響生長(zhǎng)。 一、概述法國(guó)法國(guó)Morel(1952年年)等觀察到虎頭蘭的莖尖在無(wú)菌等觀察到虎頭蘭的莖尖在無(wú)菌培養(yǎng)基上能形成扁圓形的小球體，這些小球體與種培養(yǎng)基上能形成扁圓形的小球體，這些小球體與種胚發(fā)育成的原球體非常相似，即原球莖，是蘭花培胚發(fā)育成的原球體非常相似，即原球莖，是蘭花培養(yǎng)成功的關(guān)鍵。養(yǎng)成功的關(guān)鍵。原球莖增殖很快，并可形成幼苗。這一方法和

14、技原球莖增殖很快，并可形成幼苗。這一方法和技術(shù)在蘭花生產(chǎn)上得到廣泛的應(yīng)用，造就了現(xiàn)在的術(shù)在蘭花生產(chǎn)上得到廣泛的應(yīng)用，造就了現(xiàn)在的“蘭花工業(yè)的發(fā)展。蘭花工業(yè)的發(fā)展。國(guó)蘭原球莖的增殖國(guó)蘭幼苗的形成主要部位是：頂芽側(cè)芽和花梗等主要部位是：頂芽側(cè)芽和花梗等1. 1.新芽的莖尖新芽的莖尖 莖尖是細(xì)胞分裂最旺盛的部分，也是培養(yǎng)莖尖是細(xì)胞分裂最旺盛的部分，也是培養(yǎng)成功率最高的部位。成功率最高的部位。 2.2.花?；ü?當(dāng)蘭花開花約一個(gè)月后，剪取其花梗頂端當(dāng)蘭花開花約一個(gè)月后，剪取其花梗頂端及若干個(gè)花梗腋芽。及若干個(gè)花梗腋芽。二、培養(yǎng)部位二、培養(yǎng)部位三、莖尖的選取、滅菌和接種三、莖尖的選取、滅菌和接種1. 1

15、.芽的準(zhǔn)備和滅菌芽的準(zhǔn)備和滅菌滅菌：切取滅菌：切取2 26cm6cm大小的芽大小的芽 流水沖洗流水沖洗 去掉去掉1 12 2片苞葉片苞葉 1010次氯酸鈉或漂白次氯酸鈉或漂白粉溶液中浸粉溶液中浸10 10 15 min 15 min 接種。接種。剝離和切割：剝離和切割： 在切割時(shí)應(yīng)將芽放在無(wú)菌水中操作，減少褐在切割時(shí)應(yīng)將芽放在無(wú)菌水中操作，減少褐變的機(jī)會(huì)。以消除病毒為目的時(shí)要盡量小些，變的機(jī)會(huì)。以消除病毒為目的時(shí)要盡量小些，可以小到可以小到0.1mm0.1mm：若以繁殖為目的，培養(yǎng)物：若以繁殖為目的，培養(yǎng)物可在可在2 25mm5mm左右。左右。2 2、培養(yǎng)基、培養(yǎng)基 大多蘭花以大多蘭花以MSM

16、S培養(yǎng)基最好，另外培養(yǎng)基最好，另外KCKC培養(yǎng)基也不錯(cuò)。培養(yǎng)基也不錯(cuò)。 大多品種蘭的莖尖接種以固體培養(yǎng)大多品種蘭的莖尖接種以固體培養(yǎng)基為好；基為好； 蕙蘭屬在液體培養(yǎng)基培養(yǎng)形成原球蕙蘭屬在液體培養(yǎng)基培養(yǎng)形成原球莖后則用固體培養(yǎng)基進(jìn)行繼代培養(yǎng)；莖后則用固體培養(yǎng)基進(jìn)行繼代培養(yǎng)； 卡德蘭屬和石斛屬這一類易變褐枯卡德蘭屬和石斛屬這一類易變褐枯死，以在液體培養(yǎng)基為好。死，以在液體培養(yǎng)基為好。3.3.繼代培養(yǎng)繼代培養(yǎng) 接種后接種后1 12 2個(gè)月培養(yǎng)的莖尖即可形個(gè)月培養(yǎng)的莖尖即可形成原球莖球狀體，以后即發(fā)芽生根長(zhǎng)成原球莖球狀體，以后即發(fā)芽生根長(zhǎng)葉。葉。 發(fā)芽前把它切成小塊進(jìn)行轉(zhuǎn)移，讓發(fā)芽前把它切成小塊進(jìn)行

17、轉(zhuǎn)移，讓它繼續(xù)不斷地形成原球莖球狀體。它繼續(xù)不斷地形成原球莖球狀體。 這樣連續(xù)的進(jìn)行繼代培養(yǎng)，短時(shí)間這樣連續(xù)的進(jìn)行繼代培養(yǎng)，短時(shí)間可以得到大量的原球莖球狀體?？梢缘玫酱罅康脑蚯o球狀體。 苗有苗有34葉大小，根葉大小，根23條時(shí)可移植。條時(shí)可移植。 (1)從試管內(nèi)取的苗用水將瓊脂沖洗掉，沖洗不徹從試管內(nèi)取的苗用水將瓊脂沖洗掉，沖洗不徹 底會(huì)發(fā)生霉菌腐爛。底會(huì)發(fā)生霉菌腐爛。 (2)經(jīng)水沖洗的苗吸干水分陰晾經(jīng)水沖洗的苗吸干水分陰晾1h再定植。再定植。 (3)移栽后保證，移栽后保證，50的弱光，溫度的弱光，溫度2025，保，保持一定的濕度，不能完全密閉，也要注意通風(fēng)。根持一定的濕度，不能完全密閉，也

18、要注意通風(fēng)。根在開始生長(zhǎng)后可在開始生長(zhǎng)后可1周澆一次周澆一次1000倍的復(fù)合肥料。倍的復(fù)合肥料。4 4、試管苗的移栽、試管苗的移栽第三節(jié) 蝴蝶蘭的培養(yǎng)1.莖尖培養(yǎng) (1) 將芽外植體消毒：除去葉后，用水沖洗，10的漂白粉滅菌15min。除去葉原基后，用5的漂白粉滅菌l0min，以后用無(wú)菌水沖洗35次。 (2) 接種：切取莖尖和各葉基部的腋芽，約23mm大小，接種到培養(yǎng)基中。 (3) 培養(yǎng)基：采用VW培養(yǎng)基，添加15CM進(jìn)行液體培養(yǎng)，或進(jìn)行固體培養(yǎng)。莖尖莖尖(4) (4) 培養(yǎng)條件培養(yǎng)條件 溫度溫度2525，光照強(qiáng)度，光照強(qiáng)度2000Lx2000Lx，照明，照明161624h24h。 液體培養(yǎng)基用液體培養(yǎng)基用60r60rminmin的速度進(jìn)行振的速度進(jìn)行振蕩培養(yǎng)，培養(yǎng)蕩培養(yǎng)，培養(yǎng)7 710d10d再轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)再轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基，培養(yǎng)1 1個(gè)月后轉(zhuǎn)移到固體培養(yǎng)基。個(gè)月后轉(zhuǎn)移到固體培養(yǎng)基。 培養(yǎng)培養(yǎng)1 1個(gè)月即可形成原球莖球狀體，個(gè)月即可形成原球莖球狀體，以后再進(jìn)行繼代培養(yǎng)，不斷繁殖原球莖以后再進(jìn)行繼代培養(yǎng)，不斷繁殖原球莖球狀體。球狀體。2 2、花梗腋芽的培養(yǎng)、花梗腋芽的培養(yǎng) 表面消毒表面消毒: : 帶腋芽花梗帶腋芽花梗 自來(lái)水沖洗自來(lái)水沖洗 1010漂白粉溶液浸泡漂白粉溶液浸泡20m