蘇教微生物培養(yǎng)基一學習教案

1、會計學1蘇教微生物培養(yǎng)基一蘇教微生物培養(yǎng)基一第一頁，共40頁。第2頁/共40頁第二頁，共40頁。病毒病毒(bngd)第3頁/共40頁第三頁，共40頁。SARS病毒病毒(bngd) 禽流禽流感病毒感病毒(bngd)第4頁/共40頁第四頁，共40頁。第5頁/共40頁第五頁，共40頁。真菌真菌(zhnjn)第6頁/共40頁第六頁，共40頁。如圖是酵母菌電子顯微如圖是酵母菌電子顯微鏡下的形態(tài)鏡下的形態(tài)(xngti)結結構構酵母菌和霉菌酵母菌和霉菌(mjn)青霉青霉第7頁/共40頁第七頁，共40頁。 了解有關了解有關(yugun)培養(yǎng)基的基礎知識，培養(yǎng)基的基礎知識，進行無菌技術的操作，進行微生物的培養(yǎng)進

2、行無菌技術的操作，進行微生物的培養(yǎng)。 一、課題一、課題(kt)目標：目標： 掌握培養(yǎng)基的制備掌握培養(yǎng)基的制備(zhbi)、高壓蒸氣滅菌、高壓蒸氣滅菌和平板劃線法等基本操作技術，熟練、規(guī)范地和平板劃線法等基本操作技術，熟練、規(guī)范地進行無菌操作，成功地培養(yǎng)微生物。進行無菌操作，成功地培養(yǎng)微生物。無菌技術的操作。無菌技術的操作。二、課題重點和難點：二、課題重點和難點：三、技能目標：三、技能目標：第8頁/共40頁第八頁，共40頁。一一 基礎知識基礎知識:（3）按培養(yǎng)基的）按培養(yǎng)基的功能功能(gngnng)分：分： P12基礎培養(yǎng)基基礎培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基（1）按培養(yǎng)基的）按培

3、養(yǎng)基的化學成分分：化學成分分：天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基半合成培養(yǎng)基半合成培養(yǎng)基閱讀課本閱讀課本(kbn)P8第三段第三段分別說出它們的優(yōu)分別說出它們的優(yōu)點、缺點。點、缺點。第9頁/共40頁第九頁，共40頁。第10頁/共40頁第十頁，共40頁。第11頁/共40頁第十一頁，共40頁。1 1、煮沸消毒法、煮沸消毒法:100:100煮沸煮沸5-6min5-6min2 2、巴氏消毒法：、巴氏消毒法：70-75 70-75 下煮下煮30min30min或或 80 80 下煮下煮15min15min3 3、化學藥劑消毒法、化學藥劑消毒法: :用用75%75%酒精、新潔酒精、新潔爾滅等進行皮膚

4、消毒爾滅等進行皮膚消毒; ;氯氣氯氣(l q)(l q)消毒水消毒水源源4 4、紫外線消毒、紫外線消毒(1)常用消毒的方法：常用消毒的方法：第12頁/共40頁第十二頁，共40頁。1 1、灼燒滅菌、灼燒滅菌: :2 2、干熱、干熱(n r)(n r)滅滅菌：菌：160-170 160-170 下下加熱加熱1-2h1-2h。3 3、高壓蒸氣滅菌：、高壓蒸氣滅菌：100kPa100kPa、121 121 下下維持維持15-30min.15-30min.(2)常用常用(chn yn)滅菌的方法：滅菌的方法：第13頁/共40頁第十三頁，共40頁。分類分類定義定義方法方法滅菌法滅菌法殺滅一切微生物殺滅一切

5、微生物物理法：熱力、輻射、微物理法：熱力、輻射、微波、等離子體波、等離子體化學法：醛類、烷化劑化學法：醛類、烷化劑高效消高效消毒法毒法殺滅一切致病微殺滅一切致病微生物生物紫外線、含氯劑、臭氧、紫外線、含氯劑、臭氧、復配劑等復配劑等中效消中效消毒法毒法殺滅除芽孢外的殺滅除芽孢外的致病微生物致病微生物超聲波、碘類、醇類、酚超聲波、碘類、醇類、酚類類低效消低效消毒法毒法殺滅細菌繁殖體、殺滅細菌繁殖體、親脂病毒親脂病毒單鏈季胺鹽、雙胍類、中單鏈季胺鹽、雙胍類、中草藥、金屬離子草藥、金屬離子第14頁/共40頁第十四頁，共40頁。第15頁/共40頁第十五頁，共40頁。三、實驗三、實驗(shyn)操作操作

6、1.制備牛肉膏蛋白制備牛肉膏蛋白(dnbi)胨培養(yǎng)基（用于培胨培養(yǎng)基（用于培養(yǎng)細菌）養(yǎng)細菌）第16頁/共40頁第十六頁，共40頁。基基pH中性或偏堿性，霉菌培養(yǎng)中性或偏堿性，霉菌培養(yǎng)基呈酸性?；仕嵝?。第17頁/共40頁第十七頁，共40頁。1 1配制配制(pizh)(pizh)：計算、稱量、熔化：計算、稱量、熔化2 2調節(jié)調節(jié)pHpH：用：用3%3%的的HCI/NaOHHCI/NaOH調節(jié)調節(jié) pH 7 pH 70- 70- 72 23 3分裝：分裝過程中注意不要使培養(yǎng)基沾分裝：分裝過程中注意不要使培養(yǎng)基沾 在在 管口或瓶口上，以免沾污棉塞管口或瓶口上，以免沾污棉塞 而引起污染。分裝三角燒瓶的

7、量而引起污染。分裝三角燒瓶的量 以不超過三角燒瓶容積的一半為宜。以不超過三角燒瓶容積的一半為宜。4 4包扎：包扎：操作步驟操作步驟:第18頁/共40頁第十八頁，共40頁。 5 5滅菌滅菌: : 將將50ml50ml培養(yǎng)基用玻棒轉移至三角錐瓶中，塞培養(yǎng)基用玻棒轉移至三角錐瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮紙，再放入高壓蒸氣滅菌鍋上棉花塞，包上牛皮紙，再放入高壓蒸氣滅菌鍋，在壓力為，在壓力為100kPa100kPa、溫度為、溫度為121121，滅菌，滅菌151530min30min。 將培養(yǎng)皿用舊報紙包裹，放入干熱滅菌箱內，將培養(yǎng)皿用舊報紙包裹，放入干熱滅菌箱內，在在160160170 170 下滅菌下滅

8、菌2h2h。 6 6倒平板倒平板: : 待培養(yǎng)基冷卻到待培養(yǎng)基冷卻到50 50 左右時，在酒精燈附近左右時，在酒精燈附近倒平板。倒平板。2d2d后觀察平板，無雜菌污染才可用來接后觀察平板，無雜菌污染才可用來接種種. . 7 7無菌檢查：無菌檢查： 將滅菌的培養(yǎng)基放入將滅菌的培養(yǎng)基放入3737的溫室中培養(yǎng)的溫室中培養(yǎng)24244848小時，以檢查滅菌是否小時，以檢查滅菌是否(sh fu)(sh fu)徹底。徹底。第19頁/共40頁第十九頁，共40頁。倒平板倒平板(pngbn):第20頁/共40頁第二十頁，共40頁。 1 1、臨時保藏、臨時保藏(bocng)(bocng)：接種到：接種到固體斜面培養(yǎng)

9、基，固體斜面培養(yǎng)基，菌落長成后置于菌落長成后置于44冰箱保存。冰箱保存。 2 2、長期保存：甘、長期保存：甘油冷凍管藏法油冷凍管藏法第21頁/共40頁第二十一頁，共40頁。1.1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻(lngqu)(lngqu)到到50 50 左右時左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度？ 答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手(tn shu)時，就可以進行倒平板了。時，就可以進行倒平板了。2.2.為什么需要使

10、錐形瓶的瓶口通過火焰？為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？ 答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。污染培養(yǎng)基。注意注意:第22頁/共40頁第二十二頁，共40頁。3.3.平板冷凝平板冷凝(lngnng)(lngnng)后，為什么要將平后，為什么要將平板倒置？板倒置？4.4.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位皿蓋與皿底之間的部位(bwi)(bwi)，這個平板還能用，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？ 答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結水珠，凝固答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結

11、水珠，凝固(nngg)(nngg)后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地揮發(fā)，又可以置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地揮發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。 答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個平板培養(yǎng)微培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。生物。第23頁/共40頁第二十三頁，共40頁。第24頁/共40頁第二十四頁，共40頁。2 2、純化、純化(chn (chn hu)hu)大腸桿菌大腸桿

12、菌: :接種接種(jizhng)(jizhng)方法有：方法有：平板劃線法和稀釋涂布平板法平板劃線法和稀釋涂布平板法 平板劃線法平板劃線法:通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)畫線的操通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)畫線的操作作,將聚集的菌鐘逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面將聚集的菌鐘逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面. 在數(shù)次畫線后在數(shù)次畫線后,可以分離到由一個細胞繁殖而來可以分離到由一個細胞繁殖而來(r li)的肉眼可的肉眼可見的子細胞群體見的子細胞群體,這就是菌落這就是菌落.第25頁/共40頁第二十五頁，共40頁。第26頁/共40頁第二十六頁，共40頁。劃線劃線(hu xin)后后 培養(yǎng)一培養(yǎng)一段時間

13、后段時間后第27頁/共40頁第二十七頁，共40頁。第28頁/共40頁第二十八頁，共40頁。第29頁/共40頁第二十九頁，共40頁。 1. 1.為什么在操作的第一步以及每次劃線為什么在操作的第一步以及每次劃線(hu xin)(hu xin)之前都之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線要灼燒接種環(huán)？在劃線(hu xin)(hu xin)操作結束時，仍然需要灼燒接操作結束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？種環(huán)嗎？為什么？ 答：操作的第一步灼燒接種(jizhng)環(huán)是為了避免接種(jizhng)環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種(jizhng)環(huán)是為了殺死上次劃線結束后，接種(jizhng)環(huán)上殘

14、留的菌種，使下一次劃線時，接種(jizhng)環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結束后灼燒接種(jizhng)環(huán)，能及時殺死接種(jizhng)環(huán)上殘留的菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者。第30頁/共40頁第三十頁，共40頁。 2. 2.在灼燒在灼燒(zhu sho)(zhu sho)接種環(huán)之后，為什么要等接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進行劃線？其冷卻后再進行劃線？答：以免接種答：以免接種(jizhng)(jizhng)環(huán)溫度太高，殺死環(huán)溫度太高，殺死菌種。菌種。 3. 3.在作第二次以及其后的劃線在作第二次以及其

15、后的劃線(hu xin)(hu xin)操作時，為操作時，為什么總是從上一次劃線什么總是從上一次劃線(hu xin)(hu xin)的末端開始劃線的末端開始劃線(hu (hu xin)xin)？ 答：劃線后，線條末端細菌的數(shù)目比線條起始答：劃線后，線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。第31頁/共40頁第三十一頁，共40頁。四、課題成果四、課題成果(chnggu)評價評價 （

16、一）培養(yǎng)基的制作是否合格（一）培養(yǎng)基的制作是否合格 如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1 12 d2 d后無菌落后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。 （二）接種操作是否符合無菌要求（二）接種操作是否符合無菌要求 如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本一如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點，則說明接種操作是符合要求致，并符合大腸桿菌菌落的特點，則說明接種操作是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說明接種過程中，無菌的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，

17、則說明接種過程中，無菌操作還未達到操作還未達到(d do)(d do)要求，需要分析原因，再次練習。要求，需要分析原因，再次練習。 （三）是否進行了及時細致的觀察與記錄（三）是否進行了及時細致的觀察與記錄 培養(yǎng)培養(yǎng)12 h12 h與與24 h24 h后的大腸桿菌菌落的大小會有明顯不后的大腸桿菌菌落的大小會有明顯不同，及時觀察記錄的同學會發(fā)現(xiàn)這一點，并能觀察到其他一些同，及時觀察記錄的同學會發(fā)現(xiàn)這一點，并能觀察到其他一些細微的變化。這一步的要求主要是培養(yǎng)學生良好的科學態(tài)度與細微的變化。這一步的要求主要是培養(yǎng)學生良好的科學態(tài)度與習慣。習慣。第32頁/共40頁第三十二頁，共40頁。本課題知識本課題知

18、識(zh shi)(zh shi)小結小結: :第33頁/共40頁第三十三頁，共40頁?！镜淅馕觥镜淅馕?ji x)(ji x)】 例例1 1關微生物營養(yǎng)物質的敘述中，正確的是關微生物營養(yǎng)物質的敘述中，正確的是: :A.A.是碳源的物質不可能同時是氮源是碳源的物質不可能同時是氮源 B. B.凡碳源都提供凡碳源都提供(tgng)(tgng)能量能量C.C.除水以外的無機物只提供除水以外的無機物只提供(tgng)(tgng)無機鹽無機鹽 D. D.無機氮源也能提供無機氮源也能提供(tgng)(tgng)能量能量 解析：不同的微生物，所需營養(yǎng)物質有較大差別，要針對微生解析：不同的微生物，所需營養(yǎng)

19、物質有較大差別，要針對微生物的具體情況分析。對于物的具體情況分析。對于A A、B B選項，它的表達選項，它的表達(biod)(biod)是不完整的。是不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同時是氮源，如有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同時是氮源，如NH4HCO3NH4HCO3；有的碳源同時是能源，如葡萄糖；有的碳源同時是氮源；有的碳源同時是能源，如葡萄糖；有的碳源同時是氮源，也是能源，如蛋白胨。對于，也是能源，如蛋白胨。對于C C選項，除水以外的無機物種類繁多，選項，除水以外的無機物種類繁多，功能也多樣。如二氧化碳，可作為自養(yǎng)型微生物的碳源；功能也多樣。如二氧化碳，可作

20、為自養(yǎng)型微生物的碳源；NaHCO3NaHCO3，可作為自養(yǎng)型微生物的碳源和無機鹽；而可作為自養(yǎng)型微生物的碳源和無機鹽；而NaClNaCl則只能提供無機鹽。對則只能提供無機鹽。對于于DD選項，無機氮源提供能量的情況還是存在的，如選項，無機氮源提供能量的情況還是存在的，如NH3NH3可為硝化細可為硝化細菌提供能量和氮源。菌提供能量和氮源。答案：答案：D第34頁/共40頁第三十四頁，共40頁。例例2 2下面對發(fā)酵工程中滅菌的理解下面對發(fā)酵工程中滅菌的理解(lji)(lji)不正不正確的是確的是: :A.A.防止雜菌污染防止雜菌污染 B. B.消滅雜菌消滅雜菌C.C.培養(yǎng)基和發(fā)酵設備都必須滅菌培養(yǎng)基和

21、發(fā)酵設備都必須滅菌 D.D.滅菌必須在接種前滅菌必須在接種前答案答案(d n)：B 解析：滅菌是微生物發(fā)酵過程的一個重要環(huán)節(jié)。解析：滅菌是微生物發(fā)酵過程的一個重要環(huán)節(jié)。A A說的是滅說的是滅菌的目的，因為發(fā)酵所用的菌種大多是單一的純種，整個發(fā)酵菌的目的，因為發(fā)酵所用的菌種大多是單一的純種，整個發(fā)酵過程不能混入其他微生物（雜菌），所以是正確的；過程不能混入其他微生物（雜菌），所以是正確的；B B是錯誤的是錯誤的，因為滅菌的目的是防止雜菌污染，但實際操作中不可能只消，因為滅菌的目的是防止雜菌污染，但實際操作中不可能只消滅雜菌，而是消滅全部微生物。滅雜菌，而是消滅全部微生物。C C是正確的，因為與發(fā)

22、酵有關的是正確的，因為與發(fā)酵有關的所有設備和物質都要滅菌；發(fā)酵所用的微生物是滅菌后專門接所有設備和物質都要滅菌；發(fā)酵所用的微生物是滅菌后專門接種種(jizhng)(jizhng)的，滅菌必須在接種的，滅菌必須在接種(jizhng)(jizhng)前，如果接種前，如果接種(jizhng)(jizhng)后再滅菌就會把所接菌種也殺死。后再滅菌就會把所接菌種也殺死。第35頁/共40頁第三十五頁，共40頁。編號編號成分成分含量含量粉狀硫粉狀硫10g10g（NHNH4 4）2 2SOSO4 40.4g0.4gK K2 2HPOHPO4 44.0g4.0gMgSOMgSO4 49.25g9.25gFeSOFeSO4 40.5g0.5g