植物組織培養(yǎng)基配制

1、肌醇20 000培養(yǎng)基的配制植物組織培養(yǎng)中常用的一種培養(yǎng)基是MS培養(yǎng)基。MS培養(yǎng)基的 配制包括以下步驟。培養(yǎng)基母液的配制和保存MS培養(yǎng)基含有近30種營養(yǎng)成分，為 了避免每次配制培養(yǎng)基都要對這幾十種成分進行稱量，可將培養(yǎng)基中 的各種成分，按原量的20倍或200倍分別稱量，配成濃縮液，這種 濃縮液叫做培養(yǎng)基母液。這樣每次使用時，取其總量的1/20 （50mL）或1/200（5 mL）,加水稀釋，制成培養(yǎng)液。現(xiàn)將制備培養(yǎng)基母液所需 的各類物質的量列出，供配制時使用。大量元素（母液I）mg/ LNH4NO333 000KNO338 000CaCl22H2O8 800MgSO47H2O7 400KH2P

2、O43 400微量元素（母液n ）KI166H3BO31 240MnSO44H2O4 460ZnSO47H2O1 720Na2MoO42H2O50CUSO45H2O5CoCl26H2。5鐵鹽（母液m）FeSQ 7H2O5 560Na2-EDTA2H2O7 460有機成分（母液IV）IV AIV B煙酸100鹽酸毗哆醇（維生素B6）100鹽酸硫胺素（維生素Bi）100甘氨酸400以上各種營養(yǎng)成分的用量，除了母液I為20倍濃縮液外，其余的均為200倍濃縮液。上述幾種母液都要單獨配成1L的貯備液。其中，母液I、母液n及母液W的配制方法是：每種母液中的幾種成分稱量完畢后， 分別 用少量的蒸館水徹底溶解

3、，然后再將它們混溶，最后定容到1 L。母液山的配制方法是：將稱好的FeSO47H2O和Na2-EDTA2H2O分別放到450 mL蒸館水中，邊加熱邊不斷攪拌使它們溶解，然后將 兩種溶液混合，并將pH調至5.5,最后定容到1 L,保存在棕色玻璃 瓶中。各種母液配完后，分別用玻璃瓶貯存，并且貼上標簽，注明母液 號、配制倍數、日期等，保存在冰箱的冷藏室中。MS培養(yǎng)基中還需要加入2, 4-二氯苯氧乙酸（2, 4-D）、荼乙酸（NAA）、6節(jié)基喋吟（6BA）等植物生長調節(jié)物質，并且分別配成母液（0.1 mg/mL）。其配制方法是：分別稱取這3種物質各10 mg,將2, 4-D和NAA用少量（1mL）無水

4、乙醇預溶，將6BA用少量（1 mL）的物 質的量濃度為0.1mol/L的NaOH溶液溶解，溶解過程需要水浴加熱， 最后分別定容至100 mL,即得質量濃度為0.1 mg/mL的母液。配制培養(yǎng)液 用量筒或移液管從各種母液中分別取出所需的用 量：母液I為50mL,母液H、m IVA和IV B各5 mL。再取2,4-D 5mL、NAA1 mL ,與各種母液一起放入燒杯中。配制培養(yǎng)液時應注意：在使用提前配制的母液時，應在量取各 種母液之前，輕輕搖動盛放母液的瓶子，如果發(fā)現(xiàn)瓶中有沉淀、懸浮 物或被微生物污染，應立即淘汰這種母液，重新進行配制；用量筒 或移液管量取培養(yǎng)基母液之前，必須用所量取的母液將量筒或

5、移液管 潤洗2次；量取母液時，最好將各種母液按將要量取的順序寫在紙 上，量取1種，劃掉1種，以免出錯。溶化瓊脂 用粗天平分別稱取瓊脂9 g、蒸糖30 g,放入1 000 mL的搪瓷量杯中，再加入蒸館水750 mL,用電爐加熱，邊加熱邊用玻 璃棒攪拌，直到液體呈半透明狀。然后再將配好的混合培養(yǎng)液加入到 煮沸的瓊脂中，最后加蒸館水定容至1 000 mL,攪拌均勻。需要注意的是，在加熱瓊脂、制備培養(yǎng)基的過程中，操作者千萬 不能離開，否則沸騰的瓊脂外溢，就需要重新稱量、制備。此外，如 果沒有搪瓷量杯，可用大燒杯代替。但要注意大燒杯底的外表面不能 沾水，否則加熱時燒杯容易炸裂，使溶液外溢，造成燙傷。調p

6、H用滴管吸取物質的量濃度為1 mol/L的NaOH溶液，逐滴 滴入溶化的培養(yǎng)基中，邊滴邊攪拌，并隨時用精密的pH試紙（5 47 0）測培養(yǎng)基的pH,一直到培養(yǎng)基的pH為5 8為止（培養(yǎng)基的pH必須 嚴格控制在5 8）。培養(yǎng)基的分裝 溶化的培養(yǎng)基應該趁熱分裝。分裝時，先將培養(yǎng) 基倒入燒杯中，然后將燒杯中的培養(yǎng)基倒入錐形瓶（50 mL或100 mL）中。注意不要讓培養(yǎng)基沾到瓶口和瓶壁上。錐形瓶中培養(yǎng)基的量約為錐形瓶容量的1/51/4。每1 000 mL培養(yǎng)基，可分裝2530瓶。培養(yǎng)基分裝完畢后，應及時封蓋瓶口。用2塊硫酸紙（每塊大小 約為9 cm9 cm）中間夾1層薄牛皮紙封蓋瓶口，并用線繩捆扎。

7、最后 在錐形瓶外壁貼上標簽。局壓火菌培養(yǎng)基的局壓火菌包括以下幾個步驟。第一，碼放錐形瓶。將裝有培養(yǎng)基的錐形瓶直立于金屬小筐中， 再放入高壓蒸氣滅菌鍋內。如果沒有金屬小筐，可以在兩層錐形瓶之 間放一塊玻璃板隔開。第二，放置其他需要滅菌的物品。將其他需要滅菌的物品也放入 高壓蒸氣滅菌鍋內，如裝有蒸館水的錐形瓶、帶螺口蓋的玻璃瓶、燒 杯、廣口瓶（以上物品都要用牛皮紙封口），用牛皮紙包裹的培養(yǎng)皿、 剪刀、解剖刀、鑲子、濾紙、鉛筆等。第三，滅菌。待需要滅菌的物品碼放完畢，蓋上鍋蓋。在98 kPa121.3 C下，滅菌20 min。滅菌后取出錐形瓶，讓其中的培養(yǎng)基白然冷卻凝固。最好放置 再使用。甘氨酸2M

8、驪養(yǎng)基配方:硝酸鉀 KNO3 101.111900硝酸鉉 NH4NO3 80.041650磷酸二氫鉀KH2PO4 136.09170硫酸鎂 MgSO4.7H2O 246.47370氯化鈣 CaCl2.2H2O 147.02440硼酸 H3BO3 61.836.2硫酸鋌 MnSO4.4H2O223.0122.3微量元素硫酸鋅 ZnSO4.7 H2O287.548.6鉗酸鈉 Na2MoO4.2 H2O 241.950.25硫酸銅 CuSO4.5 H2O 249.680.025氯化鉆 CoCl2.62 237.930.025鐵鹽乙二胺四乙酸二鈉Na2.EDTA 372.2537.3硫酸業(yè)鐵 FeSO

9、24.7H2O 278.0327.8肌醇成分分子量使用濃度(mg/L)碘化鉀KI166.010.83100FeSO4 7H2O27.80.10.50.5342.3130g/L數量(mg/l25001502501340.753.0102.00.250.0250.02537.3有機成分鹽酸硫胺素 VB1鹽酸毗哆醇 VB6煙酸 VB5 或 VPP蔗糖 sucroseB5 培養(yǎng)基的組成和配方組成成分KNO3CaCl2 2H2OMgSO4 7H2O(NH4)2SO4KIH3BO4MnSO4 4H2O微量元素ZnSO4 7H2ONa2MoO 4 2H2OCoCl2 6H2OCuSO4 5H2O鐵鹽Na2-

10、EDTA煙酸0.5鹽酸硫胺素(維 B1)1.0肌醇100煙酸1.0有機成分鹽酸毗哆醇1.0鹽酸硫鉉10N6培養(yǎng)基配方組成成分數量(mg/l )硝酸鉀(KN03)2830硫酸鉉(NH4SO4)463大量元素氯化鈣(CaCl2 - 2HzO)166硫酸鎂(MgSO4 7 H20)185磷酸二氫鉀(KH2PO4)400硫酸業(yè)鐵(FeSO4 - 7H20)27.8硫酸鋌(MnS04 4H20)4.4微量元素硫酸鋅(ZnSO4 7H20)1.6硼酸(H2BO3)0.8碘化鉀(KI)1.6甘氨酸2有機成分鹽酸毗哆素（維 B6）本發(fā)明涉及一種適宜藍莓試管苗增殖的培養(yǎng)基組合物及其方法，步驟如下：1） 培養(yǎng)基包括基本培養(yǎng)基和組培各階段培養(yǎng)基的各組分與每升所含重量為：（1）基本培養(yǎng)基：WPM,其中白糖 3 Og/L,瓊脂 78 g/L, pH5 . 3 ;（2） 誘導培養(yǎng)基：WPM + TDZ1.。2. Omg/L+IBAO. 3 0. 5 m g/L ;（3）葉片誘導培養(yǎng)基：WPM + TDZ2.。3. Omg/L;（4） 增殖培養(yǎng)基：WPM + TDZ0. 2 0. 5mg/L+IBA0. 1 0. 2 m g/L + GAO.