液相色譜-基礎(chǔ)ppt課件

1、色譜的發(fā)明人色譜的發(fā)明人俄國科學家：M. S. Tswett正式命名“色譜的文獻一、色譜來源石油醚碳酸鈣顆粒色素玻璃柱經(jīng)典液相色譜經(jīng)典液相色譜色譜法簡介色譜法簡介色譜法Chromatography溯源俄國科學家1903年發(fā)現(xiàn)色譜的吸附原理，開創(chuàng)了運用吸附原理分別植物色素的新方法并見諸于俄文的文獻1906年正式命名見諸文獻色譜法；Chromatography50年代開場廣泛研討和運用主要是氣相色譜及薄層色譜高效液相色譜法的廣泛運用始于70年代色譜分別的機理色譜分別的機理色譜是一種分別技術(shù)色譜是一種分別技術(shù)色譜分別是一個物理過程色譜分別是一個物理過程流動相流動相Mobile Phase固定相固定相

2、Stationary Phase樣品溶解于流動相中的溶質(zhì)樣品溶解于流動相中的溶質(zhì)液相色譜分別機理液相色譜分別機理 高效液相色譜是一種以液體作流動相和固體微粒作固定相，待測組分在柱內(nèi)的兩相之間進展高速分配和高效分別的柱液體色譜方法。 樣品溶液中的各組分，因其物理化學性質(zhì)的微小差別，當其隨流動相進入色譜柱后，便在柱的兩相之間產(chǎn)生不同的相互作用力，從而導致柱上遷移速率的微小差別。 隨著流動相的延續(xù)推移，這種微小的差別被不斷擴展，直至柱內(nèi)出現(xiàn)明顯不同的遷移間隔，使最終到達組分完全分別。什么是液相色譜什么是液相色譜色譜液相色譜柱色譜紙色譜薄層色譜高高效效液液相相色色譜譜H HP PL LC C氣相色譜什

3、么是高效液相色譜什么是高效液相色譜 High Performance Liquid Chromatography 高效液相色譜法，簡稱：HPLC 是一種區(qū)別于經(jīng)典液相色譜；基于儀器方法的高效能分別手段： 高性能的色譜柱，高精度、耐高壓的輸液泵以及高靈敏度的檢測器 廣泛運用于各個領(lǐng)域： 醫(yī)藥 / 環(huán)保 / 石化 / 生命科學 / 食品及農(nóng)業(yè) 在技術(shù)，實際及運用上仍處于開展階段流動相 泵泵色譜柱檢測器 泵輸泵輸液液分別 檢測檢測 記錄儀記錄儀和和積積分分儀儀- -色色譜譜任任務(wù)務(wù)站站AEGBCDF進樣閥進樣HPLC的儀器配置的儀器配置高效液相色譜根本概念高效液相色譜根本概念 色譜峰或色譜譜帶 基線

4、噪音 基線漂移 檢測限敏感度 色譜峰對稱性 色譜定性參數(shù) 色譜柱效能參數(shù)液相色譜圖相關(guān)術(shù)語液相色譜圖相關(guān)術(shù)語色譜峰 Peak色譜柱流出組分經(jīng)過檢測器時產(chǎn)生的呼應(yīng)信號的微分曲線峰底 Peak Base峰的起點與終點之間銜接的直線峰高 Peak Height峰最大值到峰底的間隔峰寬 Peak Width在峰兩側(cè)拐點處所作切線與峰底相交兩點之間的間隔半高峰寬 Peak Width at Half Height經(jīng)過峰高的中點作平行于峰底的直線，其與峰兩側(cè)相交兩點之間的間隔液相色譜圖相關(guān)術(shù)語液相色譜圖相關(guān)術(shù)語 峰面積 Peak Area 峰與峰底之間的面積 規(guī)范偏向； Standard Error 0.

5、607倍峰高處所對應(yīng)峰寬的一半 拖尾峰 Tailing Peak 后沿較前沿平緩的不對稱峰 前伸峰 Leading Peak 前沿較后沿平緩的不對稱峰 鬼峰 Ghost Peak 并非由試樣所產(chǎn)生的峰；亦稱假峰液相色譜圖相關(guān)術(shù)語液相色譜圖相關(guān)術(shù)語 基線 Baseline 在正常操作條件下，僅由流動相所產(chǎn)生的呼應(yīng)信號的曲線 基線漂移 Baseline Drift 基線隨時間定向的緩慢變化 基線噪聲；N Baseline Noise 由各種要素所引起的基線動搖 譜帶擴展 Band Broadening 由于縱向分散,傳質(zhì)阻力等要素的影響,使組分在色譜柱內(nèi)挪動過程中譜帶寬度添加的景象液相色譜圖相關(guān)術(shù)

6、語液相色譜圖相關(guān)術(shù)語 死時間，t0 Dead time 不被固定相滯留的組分，從進樣到出現(xiàn)峰最大值所需的時間 保管時間，tR Retention time 組分從進樣到出現(xiàn)峰最大值所需的時間 死體積，V0 Dead volume 不被固定相滯留的組分，從進樣到出現(xiàn)峰最大值所需的流動相體積 保管體積，VR Retention volume 組分從進樣到出現(xiàn)峰最大值所需的流動相體積液相色譜實驗所需的根本參數(shù)液相色譜實驗所需的根本參數(shù) 液相色譜實驗所需的根本參數(shù) 流動相：種類及配比，等度或梯度 固定相：色譜柱類型及內(nèi)徑、粒徑、長短 流動相流速 檢測器參數(shù)：紫外檢測波長或其他檢測器相應(yīng)參數(shù) 柱溫度 進

7、樣量 以上參數(shù)即構(gòu)成一個詳細的HPLC方法， 亦稱色譜條件色譜圖：色譜圖：HPLC圖形結(jié)果圖形結(jié)果Chromatogram色譜圖即色譜柱流出物經(jīng)過檢測器時所產(chǎn)生的呼應(yīng)信號對時間的色譜圖即色譜柱流出物經(jīng)過檢測器時所產(chǎn)生的呼應(yīng)信號對時間的曲線圖，其縱坐標為信號強度，橫坐標為保管時間。曲線圖，其縱坐標為信號強度，橫坐標為保管時間。 色譜峰色譜峰保管時間分保管時間分基線基線峰高峰高峰寬峰寬呼應(yīng)值呼應(yīng)值色譜峰或色譜譜帶色譜峰或色譜譜帶流出曲線上的突起部分稱為色譜峰正常色譜峰為對稱形正態(tài)分布曲線不對稱色譜峰有兩種：前延峰和拖尾峰色譜流出曲線圖及相關(guān)參數(shù)色譜流出曲線圖及相關(guān)參數(shù) 樣品進入色譜柱，經(jīng)流動相沖洗

8、，由檢測器測得的信號-洗脫時間曲線，即色譜圖。檢測限敏感度檢測限敏感度 常用基線噪音的三倍表示：S/N=3 式中： N 為噪音mV或mAU) S 為信號(mV或mAU)對稱因子計算表示圖對稱因子計算表示圖 色譜峰的對稱性對稱因子： a. 拖尾因子 b. 不對稱因子峰對稱因子計算公式峰對稱因子計算公式對稱因子(fs)：式中： fs=0.951.05為正常峰 fs0.95為前延峰 fs1.05為拖尾峰色譜柱效能參數(shù)計算表示圖色譜柱效能參數(shù)計算表示圖色譜柱的柱效色譜柱的柱效 N N實際塔板數(shù)計算公式：Ws 方法Wtan16切線法Wh5.54半峰高W3s9 3sW4s16 4sW5s25 5s實際板數(shù)實際板數(shù)(n)計算公式計算公式或通常用： 假設(shè)運用調(diào)整保管時間 tR計算實際塔板數(shù)，所得值稱為有效實際塔板數(shù)( n有效或 neff )分別